高效液相色谱法测定酮洛芬贴片的含量及其稳定性研究
作者：张仲元 岳莉 张青萍 佟志清 王玉峰
单位：岳莉 张仲元(中国人民解放军第463医院药剂科，沈阳 110042)
关键词：酮洛芬；贴片；高效液相色谱法；含量；稳定性
沈阳药科大学学报000311 摘 要 建立了用高效液相色谱测定酮洛芬贴片含量的方法并对其进行了稳定性研究.固定相：HYPERSIL ODS C18.流动相：甲醇-0.05 mol.L-1磷酸二氢钾(55∶45).检测波长：258 nm.酮洛芬浓度在6.696～33.48 μg.mL-1范围内，线性关系良好，r=0.9993，平均回收率95.17%，RSD=0.75%，日内、日间差RSD均小于1.5%.本法适用于酮洛芬贴片的质量控制和稳定性研究.
分类号 R914
Determination of Ketoprofen in a Patch by HPLC and the Study on Its Stability
Zhang Zhongyuan,Yue Li,Zhang Qingping，Tong Zhiqing，Wang Yufeng
The 463rd Hospital of PLA.，Shenyang 110042
Abstract A HPLC method was established for the determination of ketoprofen in a patch and the study on its stability.The HYPERSIL ODS C18 column was used.The mobile phase consisted of methanol-water(55∶45)with 0.05 mol*L-1 potassium dihydrogen phosphate.The detective wavelength was 258 nm.The linear range was from 6.696 to 33.48 μg*mL-1,r=0.999 3.The average recovery was 95.17% with RSD=0.75%.The method can be used in the determination of ketoprofen in a patch and the study on its stability.
Key words ketoprofen；patch;HPLC；content;stability
酮洛芬是一种非甾体抗炎镇痛药，《中华人民共和国药典》已收载其原料药和肠溶胶囊剂，本品口服后有胃肠道刺激等副作用，将其制成透皮给药制剂可避免上述副作用，并可提高病灶部位组织中的药物浓度，增强其抗炎镇痛作用.制剂中酮洛芬的含量测定方法已报导的有中和滴定法及紫外分光光度法，但由于酮洛芬贴片中成分复杂、干扰物质多而无法采用.本文建立了酮洛芬贴片含量测定的HPLC法，进行了该贴片对光、热的稳定性加速试验，预测了其有效期.
1 实验材料
810液相色谱系统(美国WATERS公司)；甲醇(色谱纯)；磷酸二氢钾及环己烷为分析纯；磷酸盐缓冲液(pH7.2，按中国药典配制)；酮洛芬(西南合成药厂，含量99.93%)；对甲氧基苯甲酸(分析纯)；酮洛芬贴片(自制，批号：970521、970522、970523)；空白贴片(自制，除不含酮洛芬外其余成分及制备方法与酮洛芬贴片相同)；酮洛芬标准溶液(精取经五氧化二磷60℃减压干燥至恒重的酮洛芬适量，用流动相溶解并稀释，使含酮洛芬约35μg.mL-1)；内标溶液(精取对甲氧基苯甲酸适量，用流动相溶解并稀释，使含对甲氧基苯甲酸约20 μg.mL-1).
2 方法与结果
2.1 样品处理
2.1.1 样品测定液的制备
取酮洛芬贴片1片，2 cm×3 cm，去掉防粘底纸，置分液漏斗中.加入环己烷40 mL，振摇，使压敏胶溶解.精加磷酸盐缓冲液(pH 7.2)50 mL，振荡提取，静置使分层.分出下层，再用磷酸盐缓冲液(pH7.2)提取4次，每次精加50 mL.提取液合并，过滤.弃去初滤液，取续滤液5.0 mL与内标溶液5.0 mL置具塞试管中，摇匀，即得.
2.1.2 空白样品测定液的制备
取空白贴片1片、2 cm×3 cm，制备方法除不加内标物溶液外同样品测定液，即得.
2.2 色谱条件
流动相：甲醇-0.05 mol.L-1磷酸二氢钾(55∶45)〔1〕.色谱柱：HYPERSIL ODS C18(5 μm)，150 mm×4.6 mm(国家色谱中心).流速：1.0 mL.min-1.检测波长：258 nm.
2.3 干扰物质的考察
2.3.1 贴片中除主药外成分的干扰
取空白贴片和酮洛芬贴片分别按“2.1.2”和“2.1.1”项下方法制备、进样、测定，得HPLC图谱1、2.经对比分析可看出，贴片中内标物和酮洛芬两者间分离良好，测定液中除主药外的成分(包括未知成分)对主成分峰和内标物峰无干扰.
Fig.1 Chromatograms of a blank patch
1—Unknown substance
2.3.2 贴片中分解产物的干扰
取光照试验(3000 Lux、10 d)后的贴片样品，按“2.1.1”项下方法制备、进样测定，得HPLC图谱3.经与图谱2对比分析可看出，贴片中经光照试验后的分解产物峰对主成分峰和内标物峰也无干扰.
Fig.2 Chromatograms of the ketoprofen patch with interstandard
1 and 4—Unknown substance；2—Interstandard;3—Ketoprofen
Fig.3 Chromatograms of the ketoprofen patch with interstandard under optical tests
1 and 4—Unknown substance；2—Interstandard;3—Ketoprofen
从以上试验可看出，本法专属性强，适用于该制剂的质量控制和稳定性研究.
2.4 标准曲线及线性关系试验
分别精密量取酮洛芬标准溶液1、2、3、4、5 mL和流动相4、3、2、1、0 mL于具塞试管中，各精密加入内标溶液5 mL，摇匀，进样.以酮洛芬浓度(μg.mL-1)为横坐标(X)、相应的酮洛芬与内标物峰面积比为纵坐标(Y)进行线性回归，得线性回归方程为Y=0.037 37X-0.019 12，r=0.999 3，(n=5).从上述结果可以看出，样品测定液的浓度在6.696～33.49 μg.mL-1范围内时峰面积比与酮洛芬浓度之间线性关系良好.
2.5 制剂回收率试验
分别精密量取酮洛芬标准溶液2、3、4 mL于分液漏斗中，各加入去掉防粘底纸的空白贴片1张(2 cm×3 cm),照“2.1.1”项，自“加入环己烷40 mL……”操作，进样.结果见表1.
Tab.1 Recoveries(n=5) Amount
added
/μg.mL-1
Amount
founded
/μg.mL-1
Recoveries
/%
RSD
/%
0.2678
0.2549
95.19
1.06
0.4018
0.3801
94.60
0.49
0.5357
0.5128
95.73
0.71
Average recovery:95.17%；RSD：0.75%
2.6 方法精密度试验
选择线性关系试验中5个浓度样品中的任意3个浓度样品进行日内及日间的测定结果差异考察(n=3).结果为，日内：RSD=1.01%，日间：RSD=1.39%.
2.7 制剂含量测定
取3个批号的样品，照“2.1.1”项操作，进样，结果见表2.Tab.2 Results of quantitation(n=3) Batch No
Actual amount/%
RSD/%
970521
102.9
0.52
970522
97.83
0.45
970523
98.75
0.28
2.8 光照实验
取样品置光照度为3 000 Lux处，分别于放置样品后0、1、3、6、10 d取出，观察性状变化，用HPLC法测定含量，操作同2.1.1项，结果见表3.本品经光照后不稳定，易变色，含量降低，应避光保存.Tab.3 Results of optical tests Time
/d
970521
970522
970523
Content
/%
Color**
Content
/%
Color
Content
/%
Color
1
98.86
-
99.14
-
98.44
-
3
96.34
+
96.07
+
97.53
+
6
95.80
+
93.42
+
95.25
+
10
91.91
+
92.19
++
93.01
++
*Content/%=(Amount of time t/Amount of time 0)×100%； **Color:“-”No change，“+”Yellow，“++”Dark yellow2.9 制剂稳定性预测〔2〕
将样品分置40、45、50、55、60、65、70℃恒温水浴中，一定时间后取样，观察性状变化并测定含量，操作同“2.1.1”项.按V0=(C0-Ci)/t求各个温度下的药物分解初始平均速度V0，见表4.根据Arrhenius公式，以V0的对数(logV0)代替反应速度常数ki的对数(logki)对温度的倒数(T-1)作直线回归，线性回归方程见表5.
Tab.4 V0(%.d-1)and color change Temp
/℃
Time
/d
970521
970522
970523
V0
Color
V0
Color
V0
Color
< /%.d-1
/%.d-1
/%.d-1
70
1
0.380
-
0.321
-
0.456
-
65
2
0.302
-
0.260
-
0.335
-
60
3
0.234
-
0.195
-
0.349
-
55
4
0.165
-
0.159
-
0.220
-
50
5
0.097
-
0.102
-
0.167
-
45
6
0.055
-
0.041
-
0.078
-
40
7
0.014
-
0.020
-
0.017
-
-No color change
取室温为25℃(T=298)代入logV0-T-1的线性回归方程中，求出V0(25),再将V0(25)代入公式t0.9=0.1C0/V0(25)，得t0.9(见表5).酮洛芬贴片对热较稳定，降解速率较小，色泽也未改变，室温贮存的有效期(t0.9)均在2年以上，可暂定本品在室温避光条件下的贮存期为2年.Tab.5 Regressive equation of logV0-T-1 and storage life Batch
A
B
r
V0(25)/%.d-1
t0.9/a
970521
13.611 5
-4 763.79
0.955 8
4.223 1×10-3
3.2
970522
12.016 3
-4 249.69
0.965 7
5.696 3×10-3
2.3
970523
13.091 2
-4 551.40
0.919 0
6.577 3×10-3
2.0
3 讨论
a.中国药典1995年版和英国药典1988年版中酮洛芬原料及制剂的含量测定方法均为中和滴定法，也有报道采用紫外分光光度法进行制剂分析〔3〕，但经实验均不能消除本贴片中辅料和降解产物的干扰.作者参考了葛庆华等〔1〕、陈琰等〔4〕的方法所建立的HPLC法具有较好的专属性，可用于该贴片的含量测定及稳定性研究.
b.本方法在建立过程中对内标物进行了选择试验，经比较最终选定了对甲氧基苯甲酸.
c.本方法在建立过程中还对贴片中酮洛芬的提取剂(磷酸盐缓冲液，pH7.2)的用量及提取次数进行了考察试验，结果共提取5次、50 mL/次，即可提取完全.
参考文献
1 葛庆华，张焱，陈庆华.缓释微丸及血浆中酮洛芬的HPLC测定.中国医药工业杂志，1994，25(11)：505～507
2 庞贻慧，鲁纯素.药物稳定性预测方法的简化-初均速法.药学学报，1982，17(3)：207～209
3 张家镛,陈烨，盖雪松.酮洛芬搽剂含量测定方法研究.沈阳药学院学报，1994，11(3)：172～174
4 陈琰，董志超，蒋雪涛.RP-HPLC法测定吲哚美辛贴剂含量及累积体外透皮吸收量.中国药学杂志，1998，33(8)：487～489
收稿日期:1999-08-30