HCV全长NS3基因表达及在抗体检测中的应用
作者：张斌 叶林柏 郜金荣 徐进平 阮华 王晓玲 赵月娥
单位：武汉大学病毒学研究所，武汉 430072
关键词：丙型肝炎病毒；NS3；表达；抗体检测
中国病毒学000317 中图分类号：R512.63 文献标识码：A
文章编号：1003-5125(2000)03-0308-04
Expression of Full-length HCV NS3 Gene in E.coli and
Its Application in HCV Antibody Detection
ZHANG Bin，YE Lin-bai，GAO Jin-rong，XUE Jing-ping，RUAN Hua
, 百拇医药
WANG Xiao-ling，ZHAO Yue-e
(Institute of Virology, Wuhan University, Wuhan 430072, China)
Abstract: Full-length NS3 gene of a hepatitis C virus was amplified by PCR using plasmid pBAC25 containing HCV nonstructural protein gene as template. The amplified fragment (about 1.8 kb) was cloned into plasmid pQE30 and the recombinant plasmid was expressed in JM109. The NS3 protein was purified by NiSO4 metal chelating resin, and its antigenecity was determined by ELISA, the results showed that the full-length NS3 protein was more sensitive than the commercial carboxy-terminal domain of NS3 protein in HCV antibody detection.
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Key words: Hepatitis C virus; NS3; Expression; Antibody detection
丙型肝炎病毒(HCV)是引起非甲非乙型肝炎的主要病原因子。被HCV感染的病例中，超过50%以上会引起持续性感染、慢性肝炎，最终可能引起肝硬化和肝细胞癌[1]。HCV严重威胁人类健康，但目前对丙肝患者尚缺乏有效的治疗手段，因此，严格把好血源关，提高对丙肝患者检出的灵敏度，是阻止丙肝血源传播的有效手段。
丙型肝炎病毒基因组为单股正链RNA，核苷酸长约9.5 kb，仅含一个开放阅读框，翻译成一个大的聚蛋白前体，由宿主细胞信号肽酶和病毒蛋白酶加工成多个成熟蛋白。其中非结构蛋白NS3分子量为70 kD，有丝氨酸蛋白酶和RNA解旋酶活性[2，3]，参与聚蛋白前体加工和RNA复制过程。NS3蛋白较早被用于HCV的血清学检测，但目前广泛采用的NS3工程蛋白都是C端半长，分子量为33 kD左右。本研究在大肠杆菌中表达全长NS3蛋白，通过抗体检测比较证明，运用全长的NS3蛋白比半长的NS3蛋白更为优越......
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作者简介：张斌(1975年-)，男，硕士，研究方向为丙型肝炎病毒。
参考文献
[1] Saito I, Miyamura T, Ohbayashi A, et al. Hepatitis C virus infection is associated with the development of hepatocellular carcinoma [J]. PNAS USA, 1990, 87:6547
[2] Grakoui A, McCourt D W, Wychowski C, et al. Characterization of the hepatitis C virus-encoded serine proteinase: detemination of proteinase-depended polyprotein cleavage sites [J]. J Virology, 1993,67:2832
, 百拇医药
[3] Kim D W, Gwack Y, Han J H, et al. C-terminal domain of the hepatitis C virus NS3 protein contains an RNA helicase activity [J]. Biochem Biophy Res Commun, 1995, 215:160
[4] 金冬雁，黎孟枫译，侯云德校.分子克隆实验指南[M].第二版，北京科学出版社，1993
[5] 孙家华，盛蕾，袁桂玉. 丙型肝炎实验室诊断研究进展[J].国外医学病毒学分册，1998，5(4)：113
[6] Ishido S, Fujita T, Hotta H. Complex formation of NS5B with NS3 and NS4A proteins of hepatitis C virus [J]. Biochem Biophys Res Commun, 1998,244:35
[7] Jin L and Peterson D L. Expression, isolation, and characterization of the Hepatiitis C Virus ATPase/RNA Helicase [J]. Arch Bioch Biophy, 1995,323:47
收稿日期：1999-05-20，修回日期：2000-03-01
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单位：武汉大学病毒学研究所，武汉 430072
关键词：丙型肝炎病毒；NS3；表达；抗体检测
中国病毒学000317 中图分类号：R512.63 文献标识码：A
文章编号：1003-5125(2000)03-0308-04
Expression of Full-length HCV NS3 Gene in E.coli and
Its Application in HCV Antibody Detection
ZHANG Bin，YE Lin-bai，GAO Jin-rong，XUE Jing-ping，RUAN Hua
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WANG Xiao-ling，ZHAO Yue-e
(Institute of Virology, Wuhan University, Wuhan 430072, China)
Abstract: Full-length NS3 gene of a hepatitis C virus was amplified by PCR using plasmid pBAC25 containing HCV nonstructural protein gene as template. The amplified fragment (about 1.8 kb) was cloned into plasmid pQE30 and the recombinant plasmid was expressed in JM109. The NS3 protein was purified by NiSO4 metal chelating resin, and its antigenecity was determined by ELISA, the results showed that the full-length NS3 protein was more sensitive than the commercial carboxy-terminal domain of NS3 protein in HCV antibody detection.
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丙型肝炎病毒(HCV)是引起非甲非乙型肝炎的主要病原因子。被HCV感染的病例中，超过50%以上会引起持续性感染、慢性肝炎，最终可能引起肝硬化和肝细胞癌[1]。HCV严重威胁人类健康，但目前对丙肝患者尚缺乏有效的治疗手段，因此，严格把好血源关，提高对丙肝患者检出的灵敏度，是阻止丙肝血源传播的有效手段。
丙型肝炎病毒基因组为单股正链RNA，核苷酸长约9.5 kb，仅含一个开放阅读框，翻译成一个大的聚蛋白前体，由宿主细胞信号肽酶和病毒蛋白酶加工成多个成熟蛋白。其中非结构蛋白NS3分子量为70 kD，有丝氨酸蛋白酶和RNA解旋酶活性[2，3]，参与聚蛋白前体加工和RNA复制过程。NS3蛋白较早被用于HCV的血清学检测，但目前广泛采用的NS3工程蛋白都是C端半长，分子量为33 kD左右。本研究在大肠杆菌中表达全长NS3蛋白，通过抗体检测比较证明，运用全长的NS3蛋白比半长的NS3蛋白更为优越......
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参考文献
[1] Saito I, Miyamura T, Ohbayashi A, et al. Hepatitis C virus infection is associated with the development of hepatocellular carcinoma [J]. PNAS USA, 1990, 87:6547
[2] Grakoui A, McCourt D W, Wychowski C, et al. Characterization of the hepatitis C virus-encoded serine proteinase: detemination of proteinase-depended polyprotein cleavage sites [J]. J Virology, 1993,67:2832
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[3] Kim D W, Gwack Y, Han J H, et al. C-terminal domain of the hepatitis C virus NS3 protein contains an RNA helicase activity [J]. Biochem Biophy Res Commun, 1995, 215:160
[4] 金冬雁，黎孟枫译，侯云德校.分子克隆实验指南[M].第二版，北京科学出版社，1993
[5] 孙家华，盛蕾，袁桂玉. 丙型肝炎实验室诊断研究进展[J].国外医学病毒学分册，1998，5(4)：113
[6] Ishido S, Fujita T, Hotta H. Complex formation of NS5B with NS3 and NS4A proteins of hepatitis C virus [J]. Biochem Biophys Res Commun, 1998,244:35
[7] Jin L and Peterson D L. Expression, isolation, and characterization of the Hepatiitis C Virus ATPase/RNA Helicase [J]. Arch Bioch Biophy, 1995,323:47
收稿日期：1999-05-20，修回日期：2000-03-01
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