视网膜脱离模型的实验研究
作者：孙晓东 张皙 陈荣家 李霞萍
单位：孙晓东 张皙(上海市第一人民医院眼科，上海 200080)；陈荣家 李霞萍(上海医科大 学附属眼耳鼻喉科医院眼科病理室，上海 200030)
关键词：兔；视网膜脱离；透明质酸钠；动物模型
眼视光学杂志000308 [摘 要] 目的: 尝试在兔眼上建立有效的实验性视网膜脱离(retinal detachment,RD)，为今后研究RD复 位后视功能损害机理奠定基础。 方法: 14只成年灰兔，分为实验组和对照 组。实验组在显微镜下使用27G前房注射针在赤道部视网膜上造孔后，注射0.1%透明质酸钠0 .2～0.3ml，可见视网膜呈灰白色隆起。术后观察1～4周后进行组织学观察。 结果: 术后100% 实验兔发生RD，范围达75%～85%。所有眼反应轻微，玻璃体内未见明显炎症反应。RD维持4 ～6天，平均5.2天。组织学切片显示RD眼玻璃体内少量炎症细胞浸润，术后1周组和2周组各 有1眼在镜下有浆液性扁平RD，其余眼镜下均复位，未见炎性细胞浸润。 结论： 通过在兔眼视 网膜下注射透明质酸钠的方法建立RD动物模型，方法简便、实用、有效，为今后进一步研究 RD后的视网膜改变奠定了实验基础。
, 百拇医药
[中图分类号] R774.1+2 [文献标识码] A
[文章编号] 1008-1801(2000)03-0153-03
Experimental study of retinal detachment models
SUN Xiao-dong,ZHANG Xi,CHEN Rong-jia,et al.
(Department of Ophthalmology, Shangha i First People's Hospital, Shanghai Institute of Ophthalmology, Shanghai 200080)
Abstract： Objective： We tried to produce an experimental model for retinal detac hment (RD) to study the possible reasons for incomplete recovery of visual funct ion after retinal reattachment.Methods： Fourteen pigmented rabbits were divided into four experimental groups a nd two control groups. An RD model was produced by infusing 0.1% sodium hyaluron ate 0.2～0.3ml through a 27G microtubule between the neural retina and retinal pi gment epithelium under the microscope. Histomorphological observation was perfor med by light microscopy after completion of the experiment.Results： After completion of the experiment, RD occurred in 100% of the experime ntal rabbits. The RD area extended from 70 to 85% of the retina. There was no ob vious inflammation in any eye. RD was maintained from 4 to 6 days (average 5.2 d ays). RD eyes showed only a few inflamed cells in the vitreous under the microsc ope. One eye which seemed to have no RD under the ophthalmoscope 1 and 2 weeks a fter the experiment, showed a flat serous detachment under the microscope. All o ther eyes showed no inflammatory infiltration after retinal reattachment.Conclusion：The method of injecting sodium hyaluronate under the retina in rabbits to establish an RD model is convenient, practical and effecti ve.
, 百拇医药
Key words： rabbit; ret inal detachment; sodium hyaluronate; animal model
视网膜脱离(retinal detachment, RD)是严重的致盲性眼病。虽然 手术治愈率有了很大的提高，但术后视功能恢复不理想，引起的原因还有待于进一步研究 [1,2]。由于在人眼上很难获得合适的RD标本进行研究，故需通过建立动物模型的方 法进行研究。本研究尝试在兔眼上建立RD模型，为今后研究RD术后视功能损害的原因奠定基 础。
1 材料和方法
1.1 实验对象和方法 健康成年灰兔14只，设为 实验组12只，正常对照组 1只，RD阳性对照组1只。体重2.2～2.7kg，平均2.4kg，雌雄兼有。实验 动物由上海生物制 品研究所提供。实验组分为4 组，每组3只，6只眼，双眼同时建立RD模型后，分别在观察1、 2、3、4周后取眼球。RD对照组，在建立RD模型后8小时取眼球。正常对照组在实验全部结束 时取眼球。术后采用直接眼底镜观察眼底视网膜情况。并进行病理组织学切片检查。
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1.2 RD模型建立 术前2%阿托品眼药水扩瞳2次。实验时采用3%戊巴比妥钠(1ml /kg)兔耳缘静脉麻醉。缝线 固定上下直肌，沿角巩缘剪开下方球结膜，在前下方角巩缘后2mm处，用20G巩膜穿刺刀刺穿 巩 膜，显微镜下，伸入27G前房注射针(美国Beaver公司)。在赤道部视网膜上造孔，然后向 后极部，以平行于视网膜方向，在视网膜下缓慢推注少量浓度为0.1%的透明质酸钠(上海建 华 精细生物制品有限公司出品，规格5毫升/支)，可见局部视网膜灰白色隆起，然后在视网膜 层 间向各个方向继续推注透明质酸钠0.2～0.3ml，显微镜下可见整个后极部视网膜灰白色隆 起，直到赤道部前。用8-0可吸收缝线缝合巩膜切口1针，结膜下注射庆大霉素1万单位。
1.3 组织切片的制备 在预定的实验观察期满后，采用耳缘静脉注射过量3% 戊巴比妥钠，即刻摘取眼球。左眼固定于眼球固定液(95%酒精，蒸馏水，40%福尔马林， 冰醋酸)。经酒精系列脱水后，浸蜡，切片，常规HE染色。日本Nikon YS2型光学显微镜观 察，日本Olympus B2光学显微镜下摄片。
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2 结果
2.1 术中并发症 术中2眼在视网膜上造孔时发生视网膜表面出血，1眼量少，1眼 出血量稍多，未进入玻璃体腔，平铺在视网膜表面，色鲜红，范围约5～6 PD，但2眼均继续 实验，直至术毕未见出血增多。4眼术中发生裂孔扩大。其他所有眼手术经过顺利。
2.2 术后观察 术后第1天观察实验组兔眼,除1眼结膜囊有少量黄白色分 泌 物外，其余眼结膜稍充血，所有眼角膜透明，前房清亮，晶状体透明，眼底可见玻璃体无混 浊，视网膜均有脱离，呈灰白色隆起3～4D，范围达75%～85%，裂孔可见约1～2PD， 最 大的1眼裂孔有4PD，裂孔均位于赤道部。结膜囊有少量分泌物的1眼，亦无眼内炎表现，予0 .3%氧氟沙星眼药水滴眼，庆大霉素4万单位/天，肌肉注射，2天后分泌物消失。另有2眼视 网 膜表面可见有出血，3天后基本吸收。所有模型眼RD维持4～6天，平均5.2天。1周后所有眼 视网膜在眼底镜下观察均已复位。
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2.3 病理组织学观察 对照组视网膜组织结构排列整齐，形态正常，光感受器细 胞与色素上皮细胞紧密相连，Müller细胞框架纤维结构完整(图1)。
RD对照组光镜下可见2眼神经视网膜上皮层与色素上皮层分离。玻璃体内见少量炎症细 胞浸润和游离的色素上皮细胞(图2，3)。
实验组中1周组和2周组各有1眼光镜下局部有浆液性扁平RD，其中色素上皮游离、肥大、增 生，少量淋巴样细胞浸润(图4)。1眼色素上皮细胞有轻度增生。其余10眼光镜下视网膜均 已复位，未见明显炎症细胞浸润。复位3周后视网膜组织结构与正常对照组无明显差异(图5 )。
图1 正常对照组(×10)
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图2 脱离的视网膜(×10)
图3 玻璃体内的炎症细胞和RPE细胞(×40)
图4 浆液性RD(×40)
图5 复位3周的视网膜
3 讨论
视网膜脱离模型可以建立在猴、猫、兔等动物上，方法多样[3～6]，可以采用玻璃 体切割术切除部分玻璃体，然后在视网膜上造孔注入平衡液，或通过微管直接在视 网膜下注射自体液化玻璃体，或采用在视网膜下直接注射平衡盐液等方法造成RD。这些方法 各有利弊，通过玻璃体切割的方法能造成长达24周的RD，但由于去除了玻璃体，不完全符合 人眼的RD发生过程；注射自体玻璃体虽比较接近人眼的RD发生过程，但由于先取出玻璃体再 注射，对玻璃体扰动较大；注射平衡盐液方法简单，但维持1～2天，有时不能达到实验要求 。
, 百拇医药
本实验通过在兔眼视网膜下直接注射透明质酸钠的方法建立RD动物模型，比较符合人眼RD发 病过程，手术并发症少，方法简便实用。本实验采用兔作为实验动物，来源广泛，而且兔眼 在 RD发生后无需采用其他方法，待透明质酸钠吸收后视网膜可以自行复位。透明质酸钠作为介 质与玻璃体成分非常接近，一度曾作为玻璃体替代物在玻璃体手术中应用[7]，对 视网膜几乎无毒性。本研究也发现只有3眼视网膜下有少量浆液性渗出，较少有炎症细胞浸 润，再次 证明透明质酸钠有较少的组织刺激性，可以最大限度地减少介质本身对视网膜的毒性作用。 而且透明质酸钠有一定的粘滞性，操作方便，还可以通过浓度的改变延长吸收的时间，方便 地达到实验所需的观察时间[8]。
本研究通过在兔眼视网膜下注射透明质酸钠的方法建立RD动物模型，方法简便、实用、有效 ，通过这一方法能研究RD发生时和复位后的视网膜改变，为最终进行恢复视功能研究奠定实 验基础。
基金项目：上海市卫生 局青年科研基金资助项目(131954Y3)
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作者简介：孙晓东(1965-)，男，上 海人，上海医科大学在职博士研究生，主治医 师，目前主要研究视网膜脱离后视功能保护的分子机理研究。
4 参考文献
[1] American Academy of Ophthalmology. The repair of rhegmatogenous re tinal detachments[J]. Ophthalmology,1996,103:1313-1324.
[2] 孙晓东,许迅,张晰.视网膜脱离术后的颜色明度敏感性[J].眼科研究,199 6,14:195-197.
[3] Imai K,Hayashi A,de Juan E Jr. Method and evaluation of experim ental retinal reattachment[J]. Nippon Ganka Gakkai Zasshi,1998,102:161-166.
, http://www.100md.com
[4] Takeuchi A,Kricorian G,Marmor MF. When vitreous enters the subr etinal space. Implications for subretinal fluid protein[J]. Retina,1996,16:426 -430.
[5] Kim SD,Naoi N,Maruiwa F,Sawada A. Electrical responses from locall y detached retina and its recovery after reattachment[J]. Ophthalmologica,1996 ,210:195-199.
[6] 高永峰.孔源性视网膜脱离和增生性玻璃体视网膜病变的动物模型[J].眼 科研究,2000,18:92-93.
[7] Liesegang TJ. Viscoelastic substances in ophthalmology[J]. Surv Ophthalmol,1990,34:268-272.
[8] Cook B,Lewis GP,Fisher SK,et al. Apoptotic photoreceptor degenerat ion in experimental retinal detachment[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci,1995,36:9 90-996.
收稿日期：2000-03-28； 修回日期：2000-05-21, 百拇医药
单位：孙晓东 张皙(上海市第一人民医院眼科，上海 200080)；陈荣家 李霞萍(上海医科大 学附属眼耳鼻喉科医院眼科病理室，上海 200030)
关键词：兔；视网膜脱离；透明质酸钠；动物模型
眼视光学杂志000308 [摘 要] 目的: 尝试在兔眼上建立有效的实验性视网膜脱离(retinal detachment,RD)，为今后研究RD复 位后视功能损害机理奠定基础。 方法: 14只成年灰兔，分为实验组和对照 组。实验组在显微镜下使用27G前房注射针在赤道部视网膜上造孔后，注射0.1%透明质酸钠0 .2～0.3ml，可见视网膜呈灰白色隆起。术后观察1～4周后进行组织学观察。 结果: 术后100% 实验兔发生RD，范围达75%～85%。所有眼反应轻微，玻璃体内未见明显炎症反应。RD维持4 ～6天，平均5.2天。组织学切片显示RD眼玻璃体内少量炎症细胞浸润，术后1周组和2周组各 有1眼在镜下有浆液性扁平RD，其余眼镜下均复位，未见炎性细胞浸润。 结论： 通过在兔眼视 网膜下注射透明质酸钠的方法建立RD动物模型，方法简便、实用、有效，为今后进一步研究 RD后的视网膜改变奠定了实验基础。
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[中图分类号] R774.1+2 [文献标识码] A
[文章编号] 1008-1801(2000)03-0153-03
Experimental study of retinal detachment models
SUN Xiao-dong,ZHANG Xi,CHEN Rong-jia,et al.
(Department of Ophthalmology, Shangha i First People's Hospital, Shanghai Institute of Ophthalmology, Shanghai 200080)
Abstract： Objective： We tried to produce an experimental model for retinal detac hment (RD) to study the possible reasons for incomplete recovery of visual funct ion after retinal reattachment.Methods： Fourteen pigmented rabbits were divided into four experimental groups a nd two control groups. An RD model was produced by infusing 0.1% sodium hyaluron ate 0.2～0.3ml through a 27G microtubule between the neural retina and retinal pi gment epithelium under the microscope. Histomorphological observation was perfor med by light microscopy after completion of the experiment.Results： After completion of the experiment, RD occurred in 100% of the experime ntal rabbits. The RD area extended from 70 to 85% of the retina. There was no ob vious inflammation in any eye. RD was maintained from 4 to 6 days (average 5.2 d ays). RD eyes showed only a few inflamed cells in the vitreous under the microsc ope. One eye which seemed to have no RD under the ophthalmoscope 1 and 2 weeks a fter the experiment, showed a flat serous detachment under the microscope. All o ther eyes showed no inflammatory infiltration after retinal reattachment.Conclusion：The method of injecting sodium hyaluronate under the retina in rabbits to establish an RD model is convenient, practical and effecti ve.
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Key words： rabbit; ret inal detachment; sodium hyaluronate; animal model
视网膜脱离(retinal detachment, RD)是严重的致盲性眼病。虽然 手术治愈率有了很大的提高，但术后视功能恢复不理想，引起的原因还有待于进一步研究 [1,2]。由于在人眼上很难获得合适的RD标本进行研究，故需通过建立动物模型的方 法进行研究。本研究尝试在兔眼上建立RD模型，为今后研究RD术后视功能损害的原因奠定基 础。
1 材料和方法
1.1 实验对象和方法 健康成年灰兔14只，设为 实验组12只，正常对照组 1只，RD阳性对照组1只。体重2.2～2.7kg，平均2.4kg，雌雄兼有。实验 动物由上海生物制 品研究所提供。实验组分为4 组，每组3只，6只眼，双眼同时建立RD模型后，分别在观察1、 2、3、4周后取眼球。RD对照组，在建立RD模型后8小时取眼球。正常对照组在实验全部结束 时取眼球。术后采用直接眼底镜观察眼底视网膜情况。并进行病理组织学切片检查。
, 百拇医药
1.2 RD模型建立 术前2%阿托品眼药水扩瞳2次。实验时采用3%戊巴比妥钠(1ml /kg)兔耳缘静脉麻醉。缝线 固定上下直肌，沿角巩缘剪开下方球结膜，在前下方角巩缘后2mm处，用20G巩膜穿刺刀刺穿 巩 膜，显微镜下，伸入27G前房注射针(美国Beaver公司)。在赤道部视网膜上造孔，然后向 后极部，以平行于视网膜方向，在视网膜下缓慢推注少量浓度为0.1%的透明质酸钠(上海建 华 精细生物制品有限公司出品，规格5毫升/支)，可见局部视网膜灰白色隆起，然后在视网膜 层 间向各个方向继续推注透明质酸钠0.2～0.3ml，显微镜下可见整个后极部视网膜灰白色隆 起，直到赤道部前。用8-0可吸收缝线缝合巩膜切口1针，结膜下注射庆大霉素1万单位。
1.3 组织切片的制备 在预定的实验观察期满后，采用耳缘静脉注射过量3% 戊巴比妥钠，即刻摘取眼球。左眼固定于眼球固定液(95%酒精，蒸馏水，40%福尔马林， 冰醋酸)。经酒精系列脱水后，浸蜡，切片，常规HE染色。日本Nikon YS2型光学显微镜观 察，日本Olympus B2光学显微镜下摄片。
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2 结果
2.1 术中并发症 术中2眼在视网膜上造孔时发生视网膜表面出血，1眼量少，1眼 出血量稍多，未进入玻璃体腔，平铺在视网膜表面，色鲜红，范围约5～6 PD，但2眼均继续 实验，直至术毕未见出血增多。4眼术中发生裂孔扩大。其他所有眼手术经过顺利。
2.2 术后观察 术后第1天观察实验组兔眼,除1眼结膜囊有少量黄白色分 泌 物外，其余眼结膜稍充血，所有眼角膜透明，前房清亮，晶状体透明，眼底可见玻璃体无混 浊，视网膜均有脱离，呈灰白色隆起3～4D，范围达75%～85%，裂孔可见约1～2PD， 最 大的1眼裂孔有4PD，裂孔均位于赤道部。结膜囊有少量分泌物的1眼，亦无眼内炎表现，予0 .3%氧氟沙星眼药水滴眼，庆大霉素4万单位/天，肌肉注射，2天后分泌物消失。另有2眼视 网 膜表面可见有出血，3天后基本吸收。所有模型眼RD维持4～6天，平均5.2天。1周后所有眼 视网膜在眼底镜下观察均已复位。
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2.3 病理组织学观察 对照组视网膜组织结构排列整齐，形态正常，光感受器细 胞与色素上皮细胞紧密相连，Müller细胞框架纤维结构完整(图1)。
RD对照组光镜下可见2眼神经视网膜上皮层与色素上皮层分离。玻璃体内见少量炎症细 胞浸润和游离的色素上皮细胞(图2，3)。
实验组中1周组和2周组各有1眼光镜下局部有浆液性扁平RD，其中色素上皮游离、肥大、增 生，少量淋巴样细胞浸润(图4)。1眼色素上皮细胞有轻度增生。其余10眼光镜下视网膜均 已复位，未见明显炎症细胞浸润。复位3周后视网膜组织结构与正常对照组无明显差异(图5 )。
图1 正常对照组(×10)
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图2 脱离的视网膜(×10)
图3 玻璃体内的炎症细胞和RPE细胞(×40)
图4 浆液性RD(×40)
图5 复位3周的视网膜
3 讨论
视网膜脱离模型可以建立在猴、猫、兔等动物上，方法多样[3～6]，可以采用玻璃 体切割术切除部分玻璃体，然后在视网膜上造孔注入平衡液，或通过微管直接在视 网膜下注射自体液化玻璃体，或采用在视网膜下直接注射平衡盐液等方法造成RD。这些方法 各有利弊，通过玻璃体切割的方法能造成长达24周的RD，但由于去除了玻璃体，不完全符合 人眼的RD发生过程；注射自体玻璃体虽比较接近人眼的RD发生过程，但由于先取出玻璃体再 注射，对玻璃体扰动较大；注射平衡盐液方法简单，但维持1～2天，有时不能达到实验要求 。
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本实验通过在兔眼视网膜下直接注射透明质酸钠的方法建立RD动物模型，比较符合人眼RD发 病过程，手术并发症少，方法简便实用。本实验采用兔作为实验动物，来源广泛，而且兔眼 在 RD发生后无需采用其他方法，待透明质酸钠吸收后视网膜可以自行复位。透明质酸钠作为介 质与玻璃体成分非常接近，一度曾作为玻璃体替代物在玻璃体手术中应用[7]，对 视网膜几乎无毒性。本研究也发现只有3眼视网膜下有少量浆液性渗出，较少有炎症细胞浸 润，再次 证明透明质酸钠有较少的组织刺激性，可以最大限度地减少介质本身对视网膜的毒性作用。 而且透明质酸钠有一定的粘滞性，操作方便，还可以通过浓度的改变延长吸收的时间，方便 地达到实验所需的观察时间[8]。
本研究通过在兔眼视网膜下注射透明质酸钠的方法建立RD动物模型，方法简便、实用、有效 ，通过这一方法能研究RD发生时和复位后的视网膜改变，为最终进行恢复视功能研究奠定实 验基础。
基金项目：上海市卫生 局青年科研基金资助项目(131954Y3)
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作者简介：孙晓东(1965-)，男，上 海人，上海医科大学在职博士研究生，主治医 师，目前主要研究视网膜脱离后视功能保护的分子机理研究。
4 参考文献
[1] American Academy of Ophthalmology. The repair of rhegmatogenous re tinal detachments[J]. Ophthalmology,1996,103:1313-1324.
[2] 孙晓东,许迅,张晰.视网膜脱离术后的颜色明度敏感性[J].眼科研究,199 6,14:195-197.
[3] Imai K,Hayashi A,de Juan E Jr. Method and evaluation of experim ental retinal reattachment[J]. Nippon Ganka Gakkai Zasshi,1998,102:161-166.
, http://www.100md.com
[4] Takeuchi A,Kricorian G,Marmor MF. When vitreous enters the subr etinal space. Implications for subretinal fluid protein[J]. Retina,1996,16:426 -430.
[5] Kim SD,Naoi N,Maruiwa F,Sawada A. Electrical responses from locall y detached retina and its recovery after reattachment[J]. Ophthalmologica,1996 ,210:195-199.
[6] 高永峰.孔源性视网膜脱离和增生性玻璃体视网膜病变的动物模型[J].眼 科研究,2000,18:92-93.
[7] Liesegang TJ. Viscoelastic substances in ophthalmology[J]. Surv Ophthalmol,1990,34:268-272.
[8] Cook B,Lewis GP,Fisher SK,et al. Apoptotic photoreceptor degenerat ion in experimental retinal detachment[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci,1995,36:9 90-996.
收稿日期：2000-03-28； 修回日期：2000-05-21, 百拇医药