双黄连对体外腹腔巨噬细胞分泌细胞因子的影响
作者：吴迪 张霞 陈宁 王家泰
单位：天津市环湖医院ICU，天津 300060
关键词：
中国中西医结合急救杂志000318中图分类号：R363.272 文献标识码：B 文章编号：10089691(2000)03017801▲
内毒素对机体造成的损害除其本身毒性作用外，主要是它们所诱导的巨噬细胞等免疫细胞分泌的大量炎性细胞因子对组织和细胞造成的广泛损伤。双黄连是一种常用的清热解毒制剂，我们在对危重病临床治疗中发现它对肠源性内毒素血症和全身炎症反应综合征(SIRS)具有一定的疗效。我们采用体外实验观察双黄连对内毒素刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌炎性细胞因子的作用。报告如下。
1 材料与方法
, http://www.100md.com 1.1 动物：纯系Balb/C雄性小鼠2只， 8～10周龄，用于制备小鼠腹腔巨噬细胞。4～6周龄小鼠2只，雌雄不限，用于检测白介素1(IL1)。小鼠腹腔巨噬细胞悬液制备按文献〔1〕方法。
双黄连浓度(g/L)
注：IL1和IL6单位为kU/L，TNFα单位为%
图1 双黄连对炎性细胞因子的拮抗作用
1.2 实验方法：在 24 孔板中加入小鼠腹腔巨噬细胞悬液，然后按需要分别加入含10%小牛血清的完全培养基RPMI 1640，作空白对照；终末浓度为2 mg/L的脂多糖(LPS)，作LPS对照；终末浓度为2 mg/L的LPS和系列终末浓度的双黄连(60.0 g/L，30.0 g/L，15.0 g/L，7.5 g/L，3.750 0 g/L，1.875 0 g/L，0.937 5 g/L)。以上均做3个复孔，每孔反应体积为2 ml。以上样品于 37 ℃，5%CO2培养48小时，轻轻吸取上清液于-40 ℃保存待测。
, 百拇医药
细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNFα)，IL1和IL6活性测定采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定〔2，3〕，通过公式计算出活性值。
1.3 统计学方法：结果均以均值±标准差(
±s)表示，组间比较用t检验。
2 结 果
双黄连对经LPS刺激体外腹腔巨噬细胞分泌炎性细胞因子TNFα，IL1和IL6活性作用趋势见图1。
3 讨 论
在某些病理条件下，如严重感染、创伤、休克等肠粘膜屏障功能受到破坏，肠道大量内毒素移位入血，诱导产生多种炎性介质的失控释放，即各种内外源性炎性介质所产生的一系列“瀑布样级联反应”，其中以TNF和IL与其关系最为密切〔4，5〕。
, http://www.100md.com
巨噬细胞具有多种功能，通过吞噬、降解杀伤、抗原处理及分泌细胞因子等活动，诱导和 调节机体免疫应答反应。TNFα、IL1和IL6均为巨噬细胞合成释放的细胞因子，它们对机体既可增强防御能力，又可产生损害作用。内毒素移位入血后造成对机体的损害除其本身毒性外，主要是其刺激体内巨噬细胞等免疫细胞，诱导产生过量的炎性细胞因子等内源性介质，造成对机体组织的广泛损伤。
本实验发现双黄连对体外LPS刺激的腹腔巨噬细胞分泌过量TNFα、IL1和IL6等炎性细胞因子的活性有显著抑制作用。当双黄连浓度大于7.5 g/L时，此作用显著增加，但增加药物浓度，此作用无显著改变。说明双黄连能够减少或抵消在LPS刺激下的体外巨噬细胞合成或释放过量的炎性细胞因子，从而减轻这些因子对机体产生的毒害作用。其中中等剂量的双黄连对巨噬细胞分泌的炎性细胞因子的调节作用较强、以上实验结果提示双黄连对LPS刺激的体外巨噬细胞合成和分泌过量炎性细胞因子有显著的抑制作用且呈剂量依赖性，为临床应用双黄连防治全身炎性反应综合征提供了理论依据，也从实验角度证实了双黄连的治疗意义。■
, 百拇医药
作者简介：吴 迪(1962)，男(汉族)，山东烟台人，主治医师。
参考文献：
〔1〕杨贵贞主编.医用免疫学.第1版.吉林：吉林人民出版社，1980.402405.
〔2〕北京医科大学T细胞研究室主编.实用细胞因子学.第1版.北京：人民卫生出版社，1992.10.
〔3〕李会强，姚智，邢冬红，等.IL2，IL6和TNFα MTT检测方法的建立.天津第二医学院学报，1993，9：45.
〔4〕Lowry S F.Cytokine mediators of immunity and inflammation.Arch Sury,1993,128:9171006.
〔5〕姜玉峰，岳茂兴.解毒固本冲剂对大鼠肿瘤坏死因子α和白介素2及病理形态学改变的影响.中国中西医结合急救杂志，2000，7(1)：5153.
收稿日期：2000-02-17
修回日期：2000-04-10, http://www.100md.com
单位：天津市环湖医院ICU，天津 300060
关键词：
中国中西医结合急救杂志000318中图分类号：R363.272 文献标识码：B 文章编号：10089691(2000)03017801▲
内毒素对机体造成的损害除其本身毒性作用外，主要是它们所诱导的巨噬细胞等免疫细胞分泌的大量炎性细胞因子对组织和细胞造成的广泛损伤。双黄连是一种常用的清热解毒制剂，我们在对危重病临床治疗中发现它对肠源性内毒素血症和全身炎症反应综合征(SIRS)具有一定的疗效。我们采用体外实验观察双黄连对内毒素刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌炎性细胞因子的作用。报告如下。
1 材料与方法
, http://www.100md.com 1.1 动物：纯系Balb/C雄性小鼠2只， 8～10周龄，用于制备小鼠腹腔巨噬细胞。4～6周龄小鼠2只，雌雄不限，用于检测白介素1(IL1)。小鼠腹腔巨噬细胞悬液制备按文献〔1〕方法。
双黄连浓度(g/L)
注：IL1和IL6单位为kU/L，TNFα单位为%
图1 双黄连对炎性细胞因子的拮抗作用
1.2 实验方法：在 24 孔板中加入小鼠腹腔巨噬细胞悬液，然后按需要分别加入含10%小牛血清的完全培养基RPMI 1640，作空白对照；终末浓度为2 mg/L的脂多糖(LPS)，作LPS对照；终末浓度为2 mg/L的LPS和系列终末浓度的双黄连(60.0 g/L，30.0 g/L，15.0 g/L，7.5 g/L，3.750 0 g/L，1.875 0 g/L，0.937 5 g/L)。以上均做3个复孔，每孔反应体积为2 ml。以上样品于 37 ℃，5%CO2培养48小时，轻轻吸取上清液于-40 ℃保存待测。
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细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNFα)，IL1和IL6活性测定采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定〔2，3〕，通过公式计算出活性值。
1.3 统计学方法：结果均以均值±标准差(
±s)表示，组间比较用t检验。2 结 果
双黄连对经LPS刺激体外腹腔巨噬细胞分泌炎性细胞因子TNFα，IL1和IL6活性作用趋势见图1。
3 讨 论
在某些病理条件下，如严重感染、创伤、休克等肠粘膜屏障功能受到破坏，肠道大量内毒素移位入血，诱导产生多种炎性介质的失控释放，即各种内外源性炎性介质所产生的一系列“瀑布样级联反应”，其中以TNF和IL与其关系最为密切〔4，5〕。
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巨噬细胞具有多种功能，通过吞噬、降解杀伤、抗原处理及分泌细胞因子等活动，诱导和 调节机体免疫应答反应。TNFα、IL1和IL6均为巨噬细胞合成释放的细胞因子，它们对机体既可增强防御能力，又可产生损害作用。内毒素移位入血后造成对机体的损害除其本身毒性外，主要是其刺激体内巨噬细胞等免疫细胞，诱导产生过量的炎性细胞因子等内源性介质，造成对机体组织的广泛损伤。
本实验发现双黄连对体外LPS刺激的腹腔巨噬细胞分泌过量TNFα、IL1和IL6等炎性细胞因子的活性有显著抑制作用。当双黄连浓度大于7.5 g/L时，此作用显著增加，但增加药物浓度，此作用无显著改变。说明双黄连能够减少或抵消在LPS刺激下的体外巨噬细胞合成或释放过量的炎性细胞因子，从而减轻这些因子对机体产生的毒害作用。其中中等剂量的双黄连对巨噬细胞分泌的炎性细胞因子的调节作用较强、以上实验结果提示双黄连对LPS刺激的体外巨噬细胞合成和分泌过量炎性细胞因子有显著的抑制作用且呈剂量依赖性，为临床应用双黄连防治全身炎性反应综合征提供了理论依据，也从实验角度证实了双黄连的治疗意义。■
, 百拇医药
作者简介：吴 迪(1962)，男(汉族)，山东烟台人，主治医师。
参考文献：
〔1〕杨贵贞主编.医用免疫学.第1版.吉林：吉林人民出版社，1980.402405.
〔2〕北京医科大学T细胞研究室主编.实用细胞因子学.第1版.北京：人民卫生出版社，1992.10.
〔3〕李会强，姚智，邢冬红，等.IL2，IL6和TNFα MTT检测方法的建立.天津第二医学院学报，1993，9：45.
〔4〕Lowry S F.Cytokine mediators of immunity and inflammation.Arch Sury,1993,128:9171006.
〔5〕姜玉峰，岳茂兴.解毒固本冲剂对大鼠肿瘤坏死因子α和白介素2及病理形态学改变的影响.中国中西医结合急救杂志，2000，7(1)：5153.
收稿日期：2000-02-17
修回日期：2000-04-10, http://www.100md.com