血小板活化因子对正常灌注和缺血-再灌注心肌的电生理
作者：张国强 曾庆 顾承东 张坚 柴枝楠
单位：张国强(中日友好医院急诊科，北京 100029)；曾庆(中日友好医院急诊科，北京 100029)；顾承东(中日友好医院急诊科，北京 100029)；张坚(中日友好医院急诊科，北京 100029)；柴枝楠(中日友好医院急诊科，北京 100029)
关键词：
中国危重病急救医学000317 分类号：R363 文献标识码：B
文章编号：1003-0603(2000)03-0176-02▲
血小板活化因子电生理作用和其诱发缺血-再灌注心律失常的研究已见报道〔1〕。本研究通过模拟正常灌注以及缺血-再灌注状态，观察血小板活化因子对心肌电生理的影响。
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1 材料与方法
1.1 实验方法：豚鼠(350～450 g)8只经硫喷妥钠腹腔麻醉后，开胸摘取心脏。心脏被置于Tyrode′s液(成分为NaCl 123 mmol/L，KCl 4 mmol/L，NaHCO3 20 mmol/L，NaH2PO3 0.9 mmol/L，CaCl2 1.8 mmol/L，MgCl2 0.5 mmol/L，Dglucose 10 mmol/L)的恒温槽中(95%O2，5%CO2，36 ℃)，然后迅速分离左室乳头肌，将乳头肌移入2 ml的灌流槽中，用Tyrode′s液平衡1小时，灌流速度5 ml/min。标本通过刺激电极诱发动作电位(持续时间1 ms，2倍阈值刺激强度，频率1 HZ，采用标准微电极技术获取动作电位信息，信号参数经放大器(MFZ-8300，日本光电)放大后传递至示波器(VC-11，日本光电)，最后通过计算机贮存和分析动作电位参数。将血小板活化因子(Sigma)溶解于1∶1的蒸馏水和二甲基亚砜(DMSO)混合液制成1 mmol/L的原液。在实验开始前稀释成实验浓度。
, 百拇医药
1.1.1 正常灌流：在标本完全平衡后，用混有血小板活化因子的Tyrode′s液灌流15分钟，观察血小板活化因子对心肌电生理主要参数的影响。
1.1.2 模拟缺血-再灌注：随机分为缺血-再灌注组和缺血-再灌注+血小板活化因子组。缺血-再灌注组用无糖、无氧(95%N2，5%CO2)的Tyrode′s液灌流1小时后再改用Tyrode′s液灌流；缺血-再灌注+血小板活化因子组先用混有血小板活化因子的Tyrode′s液灌流10分钟，用无糖、无氧(95%N2、5%CO2)的Tyrode′s液灌流1小时后，再改用Tyrode′s液灌流。观察血小板活化因子对缺血-再灌注动作电位时程的影响。
1.2 统计学方法：数据用均值±标准差(
±s)表示，采用标准t检验方法，P<0.05为具有显著性差异。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 8只动物正常灌流下，血小板活化因子对心脏的电生理作用：血小板活化因子(1 μmol/L)灌流前后，心肌动作电位幅度(APA)和静息膜电位(RMP)无显著改变，但动作电位时相明显缩短。90%复极水平动作电位时相(APD90)从(144.0±6.3)ms缩短为(120.3±5.6)ms(P<0.001)。血小板活化因子诱发心肌的电生理变化始于灌流后5分钟，在10分钟左右达到稳定状态，血小板活化因子对心脏的电生理作用在用Tyrode′s液冲洗15～20分钟后完全消失(表1和图1)。
表1 正常灌注下血小板活化因子对心肌电生理影响(±s)
动物数(只)
乳头肌(块)
, 百拇医药
RMP(mV)
APA(mV)
APD90(ms)
灌流前
8
8
85.5±2.2
135.9±3.6
144.0±6.3
血小板活化因子灌注
8
8
, 百拇医药
86.1±2.6
135.0±3.3
120.3±5.6*
冲洗后10～15分钟
8
8
85.4±2.6
136.0±3.6
141.0±5.8
注：与灌流前比较：*P<0.001
, 百拇医药
注：与对照值比较：P<0.01
图1 正常灌注下血小板活化因子对动作电位特性的影响
2.2 血小板活化因子对模拟缺血-再灌注状态心肌的电生理作用：模拟缺血状态时心肌动作电位时相明显缩短，但APD90缩短至基础值的50%左右时，动作电位时相未再进一步的缩短；在再灌注时，心肌动作电位时相迅速恢复至基础值水平。血小板活化因子明显加速了缺血早期的动作电位缩短(左侧)；而对缺血中、晚期无明显影响(中间)；相反，在再灌注时，血小板活化因子引起心肌动作电位延长(右侧)见图2。
注：与缺血-再灌注组比较：＃P<0.05，＃＃P<0.01；与基础值比较：*P<0.05
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图2 血小板活化因子对缺血-再灌注心肌动作电位时程的影响
3 讨 论
血小板活化因子诱发缺血-再灌注心律失常已见报道。血小板活化因子可能与缺血-再灌注损伤密切相关，因此有关血小板活化因子与缺血-再灌注损伤的研究已被越来越多的学者所关注。
与文献〔2〕结果一致，本研究显示了血小板活化因子明显缩短了心肌动作电位时相。机制可能为：①增加了Ca2+内流，引起细胞内Ca2+增加，从而减少了钙内流的驱动力并加速慢通道的失活〔3〕；②增加K+外流，特别是ATP敏感性钾通道(KATP通道)的开放。
本研究还显示了血小板活化因子明显加速了缺血早期心肌的动作电位的缩短，但对缺血中、晚期心肌无明显影响；
, 百拇医药
本研究还显示了血小板活化因子明显加速了缺血早期心肌的动作电位的缩短,介对缺血中、晚期心肌无明显影响；可能的解释为缺血早期，ATP轻度减少，KATP通道只是部分开放，所以血小板活化因子引起了KATP通道的进一步开放。放大了缺血早期后动作电位时相的缩短，而随着缺血时间的延长，ATP完全消耗，KATP通道已经完全开放，因此血小板活化因子对KATP通道的轻度开放作用被掩盖。本研究还发现血小板活化因子延长了再灌注时心肌的动作电位时相，此结果尽管不被心脏缺血-再灌注时血小板活化因子对心肌电生理影响研究所支持〔1〕，但无论如何，此结果提示了ATP浓度的陡升可能抑制血小板活化因子对心肌动作电位时相的缩短。血小板活化因子在一定条件下，可能对心肌动作电位时相具有正性作用，通过增加Ca2+内流，延长动作电位平台期。
作者简介：张国强(1964-)，男(汉族)，湖南省人，副主任医师。主要从事缺血-再灌注损伤的研究，1996～1998年赴日本金泽医科大学研修；发表论文10余篇。
, http://www.100md.com
参考文献：
[1]Nichol A,Desmond J,Sheridan.Electrophysiological and arrhythmogenuc effects of platelet activating factor duing normal perfusion,myocardial ischamia and reperfusion in the guineapig.Br J Pharmacol,1990,101: 734-738.
[2]Robertson D A,Genovese A,Levi R.Negative inotropic effect of platelet activating factor on human myocardium:a pharma-cological study.J Pharmcol Exp Ther,1987,243:834-839.
[3]Ghassan B,Shimin W,Michel B,et al.Modulation of cardiac cell ca2+ currents by PAF.Blood Pressure,1996,5(Supple 3):59-62.
收稿日期：1999-06-18 修回日期：1999-12-04, 百拇医药
单位：张国强(中日友好医院急诊科，北京 100029)；曾庆(中日友好医院急诊科，北京 100029)；顾承东(中日友好医院急诊科，北京 100029)；张坚(中日友好医院急诊科，北京 100029)；柴枝楠(中日友好医院急诊科，北京 100029)
关键词：
中国危重病急救医学000317 分类号：R363 文献标识码：B
文章编号：1003-0603(2000)03-0176-02▲
血小板活化因子电生理作用和其诱发缺血-再灌注心律失常的研究已见报道〔1〕。本研究通过模拟正常灌注以及缺血-再灌注状态，观察血小板活化因子对心肌电生理的影响。
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1 材料与方法
1.1 实验方法：豚鼠(350～450 g)8只经硫喷妥钠腹腔麻醉后，开胸摘取心脏。心脏被置于Tyrode′s液(成分为NaCl 123 mmol/L，KCl 4 mmol/L，NaHCO3 20 mmol/L，NaH2PO3 0.9 mmol/L，CaCl2 1.8 mmol/L，MgCl2 0.5 mmol/L，Dglucose 10 mmol/L)的恒温槽中(95%O2，5%CO2，36 ℃)，然后迅速分离左室乳头肌，将乳头肌移入2 ml的灌流槽中，用Tyrode′s液平衡1小时，灌流速度5 ml/min。标本通过刺激电极诱发动作电位(持续时间1 ms，2倍阈值刺激强度，频率1 HZ，采用标准微电极技术获取动作电位信息，信号参数经放大器(MFZ-8300，日本光电)放大后传递至示波器(VC-11，日本光电)，最后通过计算机贮存和分析动作电位参数。将血小板活化因子(Sigma)溶解于1∶1的蒸馏水和二甲基亚砜(DMSO)混合液制成1 mmol/L的原液。在实验开始前稀释成实验浓度。
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1.1.1 正常灌流：在标本完全平衡后，用混有血小板活化因子的Tyrode′s液灌流15分钟，观察血小板活化因子对心肌电生理主要参数的影响。
1.1.2 模拟缺血-再灌注：随机分为缺血-再灌注组和缺血-再灌注+血小板活化因子组。缺血-再灌注组用无糖、无氧(95%N2，5%CO2)的Tyrode′s液灌流1小时后再改用Tyrode′s液灌流；缺血-再灌注+血小板活化因子组先用混有血小板活化因子的Tyrode′s液灌流10分钟，用无糖、无氧(95%N2、5%CO2)的Tyrode′s液灌流1小时后，再改用Tyrode′s液灌流。观察血小板活化因子对缺血-再灌注动作电位时程的影响。
1.2 统计学方法：数据用均值±标准差(
±s)表示，采用标准t检验方法，P<0.05为具有显著性差异。, 百拇医药
2 结 果
2.1 8只动物正常灌流下，血小板活化因子对心脏的电生理作用：血小板活化因子(1 μmol/L)灌流前后，心肌动作电位幅度(APA)和静息膜电位(RMP)无显著改变，但动作电位时相明显缩短。90%复极水平动作电位时相(APD90)从(144.0±6.3)ms缩短为(120.3±5.6)ms(P<0.001)。血小板活化因子诱发心肌的电生理变化始于灌流后5分钟，在10分钟左右达到稳定状态，血小板活化因子对心脏的电生理作用在用Tyrode′s液冲洗15～20分钟后完全消失(表1和图1)。
表1 正常灌注下血小板活化因子对心肌电生理影响(
±s)动物数(只)
乳头肌(块)
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RMP(mV)
APA(mV)
APD90(ms)
灌流前
8
8
85.5±2.2
135.9±3.6
144.0±6.3
血小板活化因子灌注
8
8
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86.1±2.6
135.0±3.3
120.3±5.6*
冲洗后10～15分钟
8
8
85.4±2.6
136.0±3.6
141.0±5.8
注：与灌流前比较：*P<0.001
, 百拇医药
注：与对照值比较：P<0.01
图1 正常灌注下血小板活化因子对动作电位特性的影响
2.2 血小板活化因子对模拟缺血-再灌注状态心肌的电生理作用：模拟缺血状态时心肌动作电位时相明显缩短，但APD90缩短至基础值的50%左右时，动作电位时相未再进一步的缩短；在再灌注时，心肌动作电位时相迅速恢复至基础值水平。血小板活化因子明显加速了缺血早期的动作电位缩短(左侧)；而对缺血中、晚期无明显影响(中间)；相反，在再灌注时，血小板活化因子引起心肌动作电位延长(右侧)见图2。
注：与缺血-再灌注组比较：＃P<0.05，＃＃P<0.01；与基础值比较：*P<0.05
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图2 血小板活化因子对缺血-再灌注心肌动作电位时程的影响
3 讨 论
血小板活化因子诱发缺血-再灌注心律失常已见报道。血小板活化因子可能与缺血-再灌注损伤密切相关，因此有关血小板活化因子与缺血-再灌注损伤的研究已被越来越多的学者所关注。
与文献〔2〕结果一致，本研究显示了血小板活化因子明显缩短了心肌动作电位时相。机制可能为：①增加了Ca2+内流，引起细胞内Ca2+增加，从而减少了钙内流的驱动力并加速慢通道的失活〔3〕；②增加K+外流，特别是ATP敏感性钾通道(KATP通道)的开放。
本研究还显示了血小板活化因子明显加速了缺血早期心肌的动作电位的缩短，但对缺血中、晚期心肌无明显影响；
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本研究还显示了血小板活化因子明显加速了缺血早期心肌的动作电位的缩短,介对缺血中、晚期心肌无明显影响；可能的解释为缺血早期，ATP轻度减少，KATP通道只是部分开放，所以血小板活化因子引起了KATP通道的进一步开放。放大了缺血早期后动作电位时相的缩短，而随着缺血时间的延长，ATP完全消耗，KATP通道已经完全开放，因此血小板活化因子对KATP通道的轻度开放作用被掩盖。本研究还发现血小板活化因子延长了再灌注时心肌的动作电位时相，此结果尽管不被心脏缺血-再灌注时血小板活化因子对心肌电生理影响研究所支持〔1〕，但无论如何，此结果提示了ATP浓度的陡升可能抑制血小板活化因子对心肌动作电位时相的缩短。血小板活化因子在一定条件下，可能对心肌动作电位时相具有正性作用，通过增加Ca2+内流，延长动作电位平台期。
作者简介：张国强(1964-)，男(汉族)，湖南省人，副主任医师。主要从事缺血-再灌注损伤的研究，1996～1998年赴日本金泽医科大学研修；发表论文10余篇。
, http://www.100md.com
参考文献：
[1]Nichol A,Desmond J,Sheridan.Electrophysiological and arrhythmogenuc effects of platelet activating factor duing normal perfusion,myocardial ischamia and reperfusion in the guineapig.Br J Pharmacol,1990,101: 734-738.
[2]Robertson D A,Genovese A,Levi R.Negative inotropic effect of platelet activating factor on human myocardium:a pharma-cological study.J Pharmcol Exp Ther,1987,243:834-839.
[3]Ghassan B,Shimin W,Michel B,et al.Modulation of cardiac cell ca2+ currents by PAF.Blood Pressure,1996,5(Supple 3):59-62.
收稿日期：1999-06-18 修回日期：1999-12-04, 百拇医药