国产与进口丁咯地尔对新生大鼠单个脑细胞游离钙影响的比较
作者：丁新生 罗阳 肖继皋 王斌 许逸 张孝清 杨思军
单位：丁新生(南京医科大学附属一院，江苏 南京 210029)；罗阳(南京医科大学附属三院，江苏 仪征 211900)；肖继皋 王斌 许逸 张孝清(南京医科大学药理教研室，江苏 南京 210029)；杨思军(南京大学配位实验室，江苏 南京 210093)
关键词：
中风与神经疾病杂志000323 中图分类号：R743
文章编号：1003-2754(2000)03-0174-01
脑缺血后发生一系列病理生理变化，其中导致脑细胞死亡的中心环节是神经细胞内钙超载。故降低神经细胞内钙浓度是阻止神经细胞损伤、死亡的重要途径。丁咯地尔是一种血管活性药物，在临床上用于治疗缺血性脑血管疾病。本实验应用AR-CM-MIC阳离子测定系统观察国产与进口丁咯地尔对新生大鼠脑细胞内游离钙([Ca2+]i)增高的影响。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
药品与仪器：国产盐酸丁咯地尔50mg/支(商品名“赛莱乐”，南京医药股份有限公司)。进口盐酸丁咯地尔50mg/支(商品名“活脑灵”，法国LABORATOIRESL LAFON公司)。取新生SD大鼠，制备神经细胞悬液，用Fura-2/AM负载后进行荧光测定，由下式计算出胞浆内游离钙([Ca2+]i)浓度：[Ca2+]i=kd×sf2/sb2×[(R-Rmin)/(Rmax-R)]
2 结 果
2.1 国产与进口丁咯地尔对去甲肾上腺素(NE)引起的[Ca2+]i增高影响的比较 在细胞外Ca2+为1.3mmol/L,加入0.1μmmol/L NE时，[Ca2+]i能升至280.3±9.6nmol/L，而国产与进口丁咯地尔0.1、1、10μmol/L对NE诱导的脑细胞[Ca2+]i增高均能明显抑制，且各相应剂量组间比较均无明显差异。
, 百拇医药
2.2 国产与进口丁咯地尔对组胺引起的[Ca2+]i增高影响的比较 加入100μmol/L组胺 ， [Ca2+]i升至223.5±6.3nmol/L,国产与进口丁咯地尔0.1、1μmol/L对组胺引起的[Ca2+]i增高无明显抑制，而10μmol/L有明显的抑制作用，两者比较均无明显差异。
2.3 国产与进口丁咯地尔对氯化钾(KCl)引起的[Ca2+]i增高影响的比较 加入50mmol/L KCl后[Ca2+]i明显增高 ， 达到289.8±7.8nmol/L。国产与进口丁咯地尔0.1、1、10μmol/L对KCl引起的[Ca2+]i增高无明显抑制作用。
3 讨 论
脑缺血时，存在严重Ca2+内流紊乱，大量Ca2+蓄积在神经组织内产生严重的毒性作用，诱发一系列病理反应，是神经细胞死亡的最后共同通路[1]。
, 百拇医药
丁咯地尔是一种新型的血管活性药物，因其对循环系统有舒张血管和改变血流量的作用，已广泛用于临床治疗脑缺血、血管性痴呆及周围血管病[2，3]。本实验观察其对脑细胞游离钙含量的影响，揭示其在减轻钙超载方面的作用。
NE引起细胞内钙增高的机制现已基本阐明[4]，一方面激活受体调控的钙通道引起外钙内流，另一方面作用于内质网上的IP3受体，使细胞内钙释放。实验发现，丁咯地尔0.1、1、10μmol/L均能明显抑制NE引起的[Ca2+]i增高，提示丁咯地尔有阻断α-肾上腺素能受体作用，与文献报道相符。
组胺引起细胞内钙增高主要是通过受体活化使外钙内流。实验发现，丁咯地尔0.1、1μmol/L无明显抑制作用，10μmol/L抑制作用明显，证明丁咯地尔对组胺受体依赖性钙通道有一定的阻滞作用。
已经知道高K+是通过打开神经细胞膜电压敏感性钙通道，引起外钙内流，导致细胞内钙增高。实验结果表明，丁咯地尔0.1、1、10μmol/L均对高K+诱导的外钙内流无明显抑制，证明丁咯地尔以对脑细胞电压依赖性通道无明显阻滞作用。
, 百拇医药
本研究证明，丁咯地尔作用于肾上腺素能受体，抑制NE引起的[Ca2+]i增加，对组胺引起的[Ca2+]i增高有一定的拮抗作用，而对高K+引起的[Ca2+]i增高无抑制作用。且国产与进口丁咯地尔各相应剂量组间作用均无明显差异。
参考文献
[1]Siesjo BK,Wieloch T. Cerebral metabolism in ischaemia:neurochemical basis for therapy[J]. Br J Anaeth,1985,57:47.
[2]Balas P,Pagratis N. Experience with buflonedil in peripheral arterical occlusive disease[J]. Angiology,1981,32:679-88.
, 百拇医药
[3]Genesio MAD,Sanz MC. Evaluation of buflomdiel in geriatric patients suffering vascular cerebral insufficiency[J]. Angiology,1981,32:717-28.
[4]Lepretre N,Mironneau J,Arnaudeau S,et al. Activation of alpha-IA adrenoceptors mobilizes calcium from the intracelular stores in myocytes from rat portal vein[J]. J Pharmacol Exp Ther,1994,268:167-174.
收稿日期：1999-09-22
修订日期：2000-02-10, 百拇医药
单位：丁新生(南京医科大学附属一院，江苏 南京 210029)；罗阳(南京医科大学附属三院，江苏 仪征 211900)；肖继皋 王斌 许逸 张孝清(南京医科大学药理教研室，江苏 南京 210029)；杨思军(南京大学配位实验室，江苏 南京 210093)
关键词：
中风与神经疾病杂志000323 中图分类号：R743
文章编号：1003-2754(2000)03-0174-01
脑缺血后发生一系列病理生理变化，其中导致脑细胞死亡的中心环节是神经细胞内钙超载。故降低神经细胞内钙浓度是阻止神经细胞损伤、死亡的重要途径。丁咯地尔是一种血管活性药物，在临床上用于治疗缺血性脑血管疾病。本实验应用AR-CM-MIC阳离子测定系统观察国产与进口丁咯地尔对新生大鼠脑细胞内游离钙([Ca2+]i)增高的影响。
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1 材料与方法
药品与仪器：国产盐酸丁咯地尔50mg/支(商品名“赛莱乐”，南京医药股份有限公司)。进口盐酸丁咯地尔50mg/支(商品名“活脑灵”，法国LABORATOIRESL LAFON公司)。取新生SD大鼠，制备神经细胞悬液，用Fura-2/AM负载后进行荧光测定，由下式计算出胞浆内游离钙([Ca2+]i)浓度：[Ca2+]i=kd×sf2/sb2×[(R-Rmin)/(Rmax-R)]
2 结 果
2.1 国产与进口丁咯地尔对去甲肾上腺素(NE)引起的[Ca2+]i增高影响的比较 在细胞外Ca2+为1.3mmol/L,加入0.1μmmol/L NE时，[Ca2+]i能升至280.3±9.6nmol/L，而国产与进口丁咯地尔0.1、1、10μmol/L对NE诱导的脑细胞[Ca2+]i增高均能明显抑制，且各相应剂量组间比较均无明显差异。
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2.2 国产与进口丁咯地尔对组胺引起的[Ca2+]i增高影响的比较 加入100μmol/L组胺 ， [Ca2+]i升至223.5±6.3nmol/L,国产与进口丁咯地尔0.1、1μmol/L对组胺引起的[Ca2+]i增高无明显抑制，而10μmol/L有明显的抑制作用，两者比较均无明显差异。
2.3 国产与进口丁咯地尔对氯化钾(KCl)引起的[Ca2+]i增高影响的比较 加入50mmol/L KCl后[Ca2+]i明显增高 ， 达到289.8±7.8nmol/L。国产与进口丁咯地尔0.1、1、10μmol/L对KCl引起的[Ca2+]i增高无明显抑制作用。
3 讨 论
脑缺血时，存在严重Ca2+内流紊乱，大量Ca2+蓄积在神经组织内产生严重的毒性作用，诱发一系列病理反应，是神经细胞死亡的最后共同通路[1]。
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丁咯地尔是一种新型的血管活性药物，因其对循环系统有舒张血管和改变血流量的作用，已广泛用于临床治疗脑缺血、血管性痴呆及周围血管病[2，3]。本实验观察其对脑细胞游离钙含量的影响，揭示其在减轻钙超载方面的作用。
NE引起细胞内钙增高的机制现已基本阐明[4]，一方面激活受体调控的钙通道引起外钙内流，另一方面作用于内质网上的IP3受体，使细胞内钙释放。实验发现，丁咯地尔0.1、1、10μmol/L均能明显抑制NE引起的[Ca2+]i增高，提示丁咯地尔有阻断α-肾上腺素能受体作用，与文献报道相符。
组胺引起细胞内钙增高主要是通过受体活化使外钙内流。实验发现，丁咯地尔0.1、1μmol/L无明显抑制作用，10μmol/L抑制作用明显，证明丁咯地尔对组胺受体依赖性钙通道有一定的阻滞作用。
已经知道高K+是通过打开神经细胞膜电压敏感性钙通道，引起外钙内流，导致细胞内钙增高。实验结果表明，丁咯地尔0.1、1、10μmol/L均对高K+诱导的外钙内流无明显抑制，证明丁咯地尔以对脑细胞电压依赖性通道无明显阻滞作用。
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本研究证明，丁咯地尔作用于肾上腺素能受体，抑制NE引起的[Ca2+]i增加，对组胺引起的[Ca2+]i增高有一定的拮抗作用，而对高K+引起的[Ca2+]i增高无抑制作用。且国产与进口丁咯地尔各相应剂量组间作用均无明显差异。
参考文献
[1]Siesjo BK,Wieloch T. Cerebral metabolism in ischaemia:neurochemical basis for therapy[J]. Br J Anaeth,1985,57:47.
[2]Balas P,Pagratis N. Experience with buflonedil in peripheral arterical occlusive disease[J]. Angiology,1981,32:679-88.
, 百拇医药
[3]Genesio MAD,Sanz MC. Evaluation of buflomdiel in geriatric patients suffering vascular cerebral insufficiency[J]. Angiology,1981,32:717-28.
[4]Lepretre N,Mironneau J,Arnaudeau S,et al. Activation of alpha-IA adrenoceptors mobilizes calcium from the intracelular stores in myocytes from rat portal vein[J]. J Pharmacol Exp Ther,1994,268:167-174.
收稿日期：1999-09-22
修订日期：2000-02-10, 百拇医药