急性白血病并发骨髓纤维化患者网硬蛋白纤维含量分析
作者：常建华 马越
单位：广西桂林市，桂林医学院附属医院血液科 541001
关键词：白血病；骨髓检查；活组织检查；网硬蛋白
实用医学杂志000418 摘 要 目的：观察网硬蛋白含量在急性白血病骨髓活检切片中的变化情况。方法：对195例初诊的急性白血病患者，其中急性非淋巴细胞白血病(ANLL)105例，急性淋巴细胞白血病(ALL)90例的骨髓活检切片进行观察。结果：78% ALL及47% ANLL患者网硬蛋白阳性，其中33% ALL及5.6% ANLL合并骨髓纤维化。结论：急性白血病的患者骨髓网硬蛋白纤维含量明显增加；网硬蛋白纤维含量与白血病化疗疗效有关，合并骨髓纤维化者预后较差。
骨髓活检技术与骨髓涂片相结合可增强某些血液病诊断的准确性，其中用Gomori银染法检测骨髓网硬蛋白方法简便、准确，对骨髓纤维化的确诊有重要意义。张启国等[1]报道30%～75%未经治疗的急性白血病患者，常可伴有骨髓活组织切片内网硬蛋白纤维的局限性或弥散性增多。本文对195例首诊急性白血病患者骨髓切片内网硬蛋白含量的观察结果作一分析。
, 百拇医药
1 对象与方法
1.1 观察对象 我院1993年12月～1999年10月收治的急性白血病首诊患者195例，男115例，女80例，年龄1.5～69岁，平均45.23岁，其中急性淋巴细胞白血病(ALL)90例(L1 37例，L2 46例，L3 7例)，急性非淋巴细胞白血病(ANLL)105例(M1 9例，M2 49例，M3 29例，M4 6例，M5 4例 ，M6 6例，M7 2例)，均经临床、血常规化验及骨髓涂片检查，按张之南《血液病诊断及疗效标准》确诊。
1.2 取材与处理 以B65-01型骨髓活检针于患者髂后上棘作活检取材，组织块在Bouin液中固定1 h，不经脱钙处理，直接脱水后常规作塑料包埋，包埋块切成厚度3 μ m作HGF染色，厚度5 μ m作Gomori染色，必要时作Masson三色染色。
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1.3 方法
1.3.1 造血细胞面积与增生程度 取HGF染色的切片，用网形测微计的计点法算出造血组织与脂肪组织之容量百分比(Vol%)，进而判定增生度。
1.3.2 观察造血组织和基质的病理变化
1.3.3 网硬蛋白纤维染色 采用Gomori染色法，按改良的Mono-haran氏法算积分[2]：分为(±)～(++++)，(±)为正常，(+)以上为阳性，(+++)以上诊断为继发性骨髓纤维化。
2 结果
195例骨髓活检标本中造血细胞所占比例为62%～96%，即增生度为明显活跃到极度活跃；白血性原始细胞成簇或弥散性分布于小梁间区及小梁旁区，部分可见静脉窦及骨小梁被破坏，包含核碎片的巨噬细胞增多，骨髓坏死区易见。基质水肿、出血，在Gomori染色网硬蛋白(+++)的标本中，HGF染色的切片中亦可见纤维细胞及纤维组织弥散性增生，交织在白血病细胞间，部分纤维可覆盖在细胞上。具体见表1。
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表1 195例急性白血病继发骨髓纤维化的Gomori染色结果(例) 病种
n
Gomori染色
-
+
++
+++
++++
ALL
90
6
13
38
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23
10
ANLL
105
19
37
43
6
0
表1可见，ALL继发骨髓纤维化33例，占37%，其中9例治疗后达完全缓解(CR)，以后又复发。复发例数中，8例死亡，1例治疗后2次CR，见表2。ANLL继发骨髓纤维化6例，占5.7%，均未达到CR，最后全部死亡。表2中9例ALL合并骨髓纤维化的患者，治疗前骨髓网硬蛋白的积分均达(+++)～(++++)，治疗后全部达CR，且骨髓网硬蛋白积分均下降1～2个等级。其中8例复发时网硬蛋白积分再次上升，且均在短期内死亡。表2 9例ALL合并骨髓纤维化患者化疗前后网硬蛋白纤维含量 病例
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号
亚
型
网硬蛋白纤维积分
疗
效
复发时网硬
蛋白积分
结果
化疗前
化疗后
1
L1
, http://www.100md.com
+++
++
CR
+++
死亡
2
L1
++++
+
CR
++
死亡
3
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L3
+++
+
CR
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死亡
4
L2
+++
+
CR
+++
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5
L1
+++
-
CR
++
死亡
6
L2
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CR
+
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死亡
7
L2
+++
+
CR
+
死亡
8
L2
++++
+
CR
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++
死亡
9
L1
+++
-
CR
-
2次CR
3 讨论
骨髓纤维组织增生是骨髓基质反应中的一种，在骨髓活组织切片中所见的纤维可分为网硬蛋白纤维丝(reticulin fibrosis)和胶原纤维丝(collagenous fibrosis)两类。前者是一种较为纤细的胶原纤维，必须用Gomori银染法才能观察到，网硬蛋白纤维一般集中在血管与骨小梁周围；而胶原纤维则通常见于骨髓纤维化晚期，胶原性物质相互交织，呈嗜酸性，用Masson三色染色可观察到。
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本组90例ALL患者中，网硬蛋白染色阳性78%，其中33%达到骨髓纤维化标准，11%为胶原蛋白纤维。105例ANLL患者中，47%患者网硬蛋白染色阳性，其中5.6%达到骨髓纤维化标准。Winfield等[3]报道在70%的急淋患者骨髓标本中，网硬蛋白含量增高，与原淋巴细胞表达B细胞系标记密切相关。我们的结果与此相符。Dilly等[4]报道80%的急性白血病患者入院时骨髓组织切片内可显示不同程度的纤维增生现象，且其量的变化与白血病增长密切相关，骨髓网状纤维增多的急性白血病患者，与未增多的病例相比，前者对化疗的反应及预后均比后者差。在我们的资料中，6例继发骨髓纤维化的ANLL患者化疗后均未达到CR，全部死亡，而其余网硬蛋白积分≤(++)的患者，目前仍有8例达CR；33例继发骨髓纤维化的ALL患者中，只有9例化疗后达到CR，且网硬蛋白的积分也随之下降，但均复发，网硬蛋白再次升高，其中8例死亡，1例治疗后再次达CR。值得一提的是，一位12岁的男性急淋患者，入院时骨髓活检网硬蛋白阴性，经治疗后达到完全缓解，但骨髓切片网硬蛋白积分却达到(+++)，患者短期内复发死亡。提示网硬蛋白积分在某种程度上与急性白血病预后有一定关系。可作为急性白血病疗效判断的一个参考指标。目前，急性白血病合并骨髓纤维化的发病机制仍未明确，Hassan等[5]报道可能与急性白血病时某些体液因素的释放有关，如血小板原生长因子(PDGF)，纤维母细胞生长因子，血小板因子-4(PF-4)，转化生长因子(TGF-β)及β-血栓球蛋白等。此外，骨髓网硬蛋白纤维的增加还与细胞发育异常有一定关系，但明确的机制仍有待进一步研究。
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4 参考文献
1，张启国，浦 权，杨梅如，等. 白血病继发网硬蛋白纤维化的骨髓活检研究. 临床血液学杂志，1998，11(4)：158～160.
2，浦 权，编. 骨髓活组织的检查与诊断. 桂林：广西师范大学出版社，1988.
3， Winfield DA,Polacarz SV. Bone marrow histology 3:value of bone marrow core biosy in acute leukaemia,myelodysplastic syndromes,and chronic myeloid leukaemic. Clin Pathol,1992,45:855～859.
4，Dilly SA,Jagger CJ. Bone marrow stromal cell changes in haematological malignancies. J Clin Pathol,1990,43:942～946.
5，Hassan HT,Hanauske AR,Lux E，et al. A new fibroblast growth stimulating activity from the human megakaryoblastic lenkemia cell line ELF-153:in vitro and vivo findings. Int J Exp Pathol,1995,76(5):361～365., http://www.100md.com
单位：广西桂林市，桂林医学院附属医院血液科 541001
关键词：白血病；骨髓检查；活组织检查；网硬蛋白
实用医学杂志000418 摘 要 目的：观察网硬蛋白含量在急性白血病骨髓活检切片中的变化情况。方法：对195例初诊的急性白血病患者，其中急性非淋巴细胞白血病(ANLL)105例，急性淋巴细胞白血病(ALL)90例的骨髓活检切片进行观察。结果：78% ALL及47% ANLL患者网硬蛋白阳性，其中33% ALL及5.6% ANLL合并骨髓纤维化。结论：急性白血病的患者骨髓网硬蛋白纤维含量明显增加；网硬蛋白纤维含量与白血病化疗疗效有关，合并骨髓纤维化者预后较差。
骨髓活检技术与骨髓涂片相结合可增强某些血液病诊断的准确性，其中用Gomori银染法检测骨髓网硬蛋白方法简便、准确，对骨髓纤维化的确诊有重要意义。张启国等[1]报道30%～75%未经治疗的急性白血病患者，常可伴有骨髓活组织切片内网硬蛋白纤维的局限性或弥散性增多。本文对195例首诊急性白血病患者骨髓切片内网硬蛋白含量的观察结果作一分析。
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1 对象与方法
1.1 观察对象 我院1993年12月～1999年10月收治的急性白血病首诊患者195例，男115例，女80例，年龄1.5～69岁，平均45.23岁，其中急性淋巴细胞白血病(ALL)90例(L1 37例，L2 46例，L3 7例)，急性非淋巴细胞白血病(ANLL)105例(M1 9例，M2 49例，M3 29例，M4 6例，M5 4例 ，M6 6例，M7 2例)，均经临床、血常规化验及骨髓涂片检查，按张之南《血液病诊断及疗效标准》确诊。
1.2 取材与处理 以B65-01型骨髓活检针于患者髂后上棘作活检取材，组织块在Bouin液中固定1 h，不经脱钙处理，直接脱水后常规作塑料包埋，包埋块切成厚度3 μ m作HGF染色，厚度5 μ m作Gomori染色，必要时作Masson三色染色。
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1.3 方法
1.3.1 造血细胞面积与增生程度 取HGF染色的切片，用网形测微计的计点法算出造血组织与脂肪组织之容量百分比(Vol%)，进而判定增生度。
1.3.2 观察造血组织和基质的病理变化
1.3.3 网硬蛋白纤维染色 采用Gomori染色法，按改良的Mono-haran氏法算积分[2]：分为(±)～(++++)，(±)为正常，(+)以上为阳性，(+++)以上诊断为继发性骨髓纤维化。
2 结果
195例骨髓活检标本中造血细胞所占比例为62%～96%，即增生度为明显活跃到极度活跃；白血性原始细胞成簇或弥散性分布于小梁间区及小梁旁区，部分可见静脉窦及骨小梁被破坏，包含核碎片的巨噬细胞增多，骨髓坏死区易见。基质水肿、出血，在Gomori染色网硬蛋白(+++)的标本中，HGF染色的切片中亦可见纤维细胞及纤维组织弥散性增生，交织在白血病细胞间，部分纤维可覆盖在细胞上。具体见表1。
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表1 195例急性白血病继发骨髓纤维化的Gomori染色结果(例) 病种
n
Gomori染色
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表1可见，ALL继发骨髓纤维化33例，占37%，其中9例治疗后达完全缓解(CR)，以后又复发。复发例数中，8例死亡，1例治疗后2次CR，见表2。ANLL继发骨髓纤维化6例，占5.7%，均未达到CR，最后全部死亡。表2中9例ALL合并骨髓纤维化的患者，治疗前骨髓网硬蛋白的积分均达(+++)～(++++)，治疗后全部达CR，且骨髓网硬蛋白积分均下降1～2个等级。其中8例复发时网硬蛋白积分再次上升，且均在短期内死亡。表2 9例ALL合并骨髓纤维化患者化疗前后网硬蛋白纤维含量 病例
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亚
型
网硬蛋白纤维积分
疗
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蛋白积分
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化疗前
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3 讨论
骨髓纤维组织增生是骨髓基质反应中的一种，在骨髓活组织切片中所见的纤维可分为网硬蛋白纤维丝(reticulin fibrosis)和胶原纤维丝(collagenous fibrosis)两类。前者是一种较为纤细的胶原纤维，必须用Gomori银染法才能观察到，网硬蛋白纤维一般集中在血管与骨小梁周围；而胶原纤维则通常见于骨髓纤维化晚期，胶原性物质相互交织，呈嗜酸性，用Masson三色染色可观察到。
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本组90例ALL患者中，网硬蛋白染色阳性78%，其中33%达到骨髓纤维化标准，11%为胶原蛋白纤维。105例ANLL患者中，47%患者网硬蛋白染色阳性，其中5.6%达到骨髓纤维化标准。Winfield等[3]报道在70%的急淋患者骨髓标本中，网硬蛋白含量增高，与原淋巴细胞表达B细胞系标记密切相关。我们的结果与此相符。Dilly等[4]报道80%的急性白血病患者入院时骨髓组织切片内可显示不同程度的纤维增生现象，且其量的变化与白血病增长密切相关，骨髓网状纤维增多的急性白血病患者，与未增多的病例相比，前者对化疗的反应及预后均比后者差。在我们的资料中，6例继发骨髓纤维化的ANLL患者化疗后均未达到CR，全部死亡，而其余网硬蛋白积分≤(++)的患者，目前仍有8例达CR；33例继发骨髓纤维化的ALL患者中，只有9例化疗后达到CR，且网硬蛋白的积分也随之下降，但均复发，网硬蛋白再次升高，其中8例死亡，1例治疗后再次达CR。值得一提的是，一位12岁的男性急淋患者，入院时骨髓活检网硬蛋白阴性，经治疗后达到完全缓解，但骨髓切片网硬蛋白积分却达到(+++)，患者短期内复发死亡。提示网硬蛋白积分在某种程度上与急性白血病预后有一定关系。可作为急性白血病疗效判断的一个参考指标。目前，急性白血病合并骨髓纤维化的发病机制仍未明确，Hassan等[5]报道可能与急性白血病时某些体液因素的释放有关，如血小板原生长因子(PDGF)，纤维母细胞生长因子，血小板因子-4(PF-4)，转化生长因子(TGF-β)及β-血栓球蛋白等。此外，骨髓网硬蛋白纤维的增加还与细胞发育异常有一定关系，但明确的机制仍有待进一步研究。
, 百拇医药
4 参考文献
1，张启国，浦 权，杨梅如，等. 白血病继发网硬蛋白纤维化的骨髓活检研究. 临床血液学杂志，1998，11(4)：158～160.
2，浦 权，编. 骨髓活组织的检查与诊断. 桂林：广西师范大学出版社，1988.
3， Winfield DA,Polacarz SV. Bone marrow histology 3:value of bone marrow core biosy in acute leukaemia,myelodysplastic syndromes,and chronic myeloid leukaemic. Clin Pathol,1992,45:855～859.
4，Dilly SA,Jagger CJ. Bone marrow stromal cell changes in haematological malignancies. J Clin Pathol,1990,43:942～946.
5，Hassan HT,Hanauske AR,Lux E，et al. A new fibroblast growth stimulating activity from the human megakaryoblastic lenkemia cell line ELF-153:in vitro and vivo findings. Int J Exp Pathol,1995,76(5):361～365., http://www.100md.com