HPLC法测定消核片中丹参素的含量
作者：陈延清
单位：四川光大制药有限公司彭州市 611930
关键词：
中草药000416 消核片收载于卫生部药品标准第16册，是我公司的中药保护品种，由丹参、浙贝母、夏枯草、昆布等中药组成，临床用于治疗女性乳腺小叶增生和乳痛症。为控制产品质量，我们建立了HPLC法测定本品中丹参药材的主要活性成分丹参素的含量。所建立的方法快速，准确，简便，重现性好，结果满意。
1 仪器和试药
Alltech 426 HPLC Pump，Alltech UVIS 200 Detector，Chromtek 色谱工作站;
Turner Kromasil C18 5 μm 150 mm×4.6 mm，SSB2200 超声震荡仪。
, 百拇医药
丹参素钠对照品由上海医科大学天然药物化学教研室提供，乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：Turner Kromasil C18 5 μm 150 mm×4.6 mm，流动相乙腈-水-36%醋酸(5∶160∶1)，流速：1 mL/min，检测波长280 nm，柱温：室温。
2.2 线性关系考察：称取丹参素钠适量，加50%甲醇制成0.712 μg/mL的溶液，进样不同量，测定积分值，计算得回归方程Y=360 733.1X+385 5.6，r=0.999 7，线性范围0.217～1.86 μg，几乎通过原点，故采用一点法测定。
2.3 精密度考察：分别进样同一对照品测定，结果RSD=1.2%(<1.5%)，符合要求。
, 百拇医药
2.4 提取条件选择
2.4.1 提取方法的选择：常用的提取方法有：超声法和热回流法，将二者比较见表1。从表可知，超声法较好。
表1 不同提取方法比较表 方法
超声法
热回流法
取样量(g)
1.745 1
1.739 9
溶剂
甲醇
甲醇
, 百拇医药
提取时间(h)
1
1
测得值(mg/g)
1.84
0.56
2.4.2 溶剂的选择：筛选不同的溶剂，结果见表2。表2 不同溶剂的提取效果 编号
1
2
3
4
称样量(g)
, http://www.100md.com
0.424 9
0.420 4
0.409 8
0.425 5
溶剂
甲醇
50%甲醇
95%乙醇
50%乙醇
超声时间(min)
30
30
30
, 百拇医药
30
测得值(mg/g)
1.57
2.128
2.068
备注
不成峰形
分离不够好
从以上结果可知，采用50%甲醇作溶剂较好。2.4.3 超声时间选择：不同时间的超声效果见表3。
表3 不同时间超声效果比较 编号
1
2
, 百拇医药
3
4
5
6
7
称样量(g)
0.405
0.419
0.412
0.410
0.418
0.414
0.402
, 百拇医药
超声(min)
10
20
30
40
50
60
70
测得(mg/g)
2.96
2.53
2.95
2.94
, 百拇医药
2.35
2.67
2.24
从上表可知，1，3，4号的值比较接近，选择超声40 min时间为宜。2.5 测定波长的选择：查文献[1]，丹参素在280 nm处有最大吸收，故选用该波长作为测定波长。
2.6 流动相的选择：文献报道[1～3]有多种方法，经过比较以乙腈-水-36%醋酸(5∶160∶1)较好，用在该品中有较好的分离。
2.7 重复性测定：对同一批样品，分别测定5 次，结果平均2.501 毫克/片，RSD=5.5%，符合要求。
2.8 回收率测定：加入丹参素钠对照品，重复测定5 次，结果平均回收率为97.3%(n=5)。
, http://www.100md.com
2.8 样品测定：对照品溶液的制备：取丹参素钠对照品适量，加50%甲醇制成0.04 mg/mL的溶液。
供试品溶液的制备：取本品20片，精密称定重量，研细，精密称取细粉0.35 g，置50 mL量瓶中，加50%甲醇25 mL，超声处理40 min，取出放冷，加水至刻度，摇匀，离心(10 000 r/min)15 min，取出，取上清液作为供试品溶液。
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。测定样品3 批，结果(毫克/片)990701批为2.41，990702批为2.35，990703批为2.47。本品以丹参素钠(C6H9O5Na)计算，不得少于每片1.0 mg。
参考文献
1，袁俊贤，等.中成药，1996，18(1)：15
2，朱宝珠，等.中草药，1997，28(6)：345
3，李元智，等.华西药学杂志，1996，11(4)：28
(1999-08-23收稿), 百拇医药
单位：四川光大制药有限公司彭州市 611930
关键词：
中草药000416 消核片收载于卫生部药品标准第16册，是我公司的中药保护品种，由丹参、浙贝母、夏枯草、昆布等中药组成，临床用于治疗女性乳腺小叶增生和乳痛症。为控制产品质量，我们建立了HPLC法测定本品中丹参药材的主要活性成分丹参素的含量。所建立的方法快速，准确，简便，重现性好，结果满意。
1 仪器和试药
Alltech 426 HPLC Pump，Alltech UVIS 200 Detector，Chromtek 色谱工作站;
Turner Kromasil C18 5 μm 150 mm×4.6 mm，SSB2200 超声震荡仪。
, 百拇医药
丹参素钠对照品由上海医科大学天然药物化学教研室提供，乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：Turner Kromasil C18 5 μm 150 mm×4.6 mm，流动相乙腈-水-36%醋酸(5∶160∶1)，流速：1 mL/min，检测波长280 nm，柱温：室温。
2.2 线性关系考察：称取丹参素钠适量，加50%甲醇制成0.712 μg/mL的溶液，进样不同量，测定积分值，计算得回归方程Y=360 733.1X+385 5.6，r=0.999 7，线性范围0.217～1.86 μg，几乎通过原点，故采用一点法测定。
2.3 精密度考察：分别进样同一对照品测定，结果RSD=1.2%(<1.5%)，符合要求。
, 百拇医药
2.4 提取条件选择
2.4.1 提取方法的选择：常用的提取方法有：超声法和热回流法，将二者比较见表1。从表可知，超声法较好。
表1 不同提取方法比较表 方法
超声法
热回流法
取样量(g)
1.745 1
1.739 9
溶剂
甲醇
甲醇
, 百拇医药
提取时间(h)
1
1
测得值(mg/g)
1.84
0.56
2.4.2 溶剂的选择：筛选不同的溶剂，结果见表2。表2 不同溶剂的提取效果 编号
1
2
3
4
称样量(g)
, http://www.100md.com
0.424 9
0.420 4
0.409 8
0.425 5
溶剂
甲醇
50%甲醇
95%乙醇
50%乙醇
超声时间(min)
30
30
30
, 百拇医药
30
测得值(mg/g)
1.57
2.128
2.068
备注
不成峰形
分离不够好
从以上结果可知，采用50%甲醇作溶剂较好。2.4.3 超声时间选择：不同时间的超声效果见表3。
表3 不同时间超声效果比较 编号
1
2
, 百拇医药
3
4
5
6
7
称样量(g)
0.405
0.419
0.412
0.410
0.418
0.414
0.402
, 百拇医药
超声(min)
10
20
30
40
50
60
70
测得(mg/g)
2.96
2.53
2.95
2.94
, 百拇医药
2.35
2.67
2.24
从上表可知，1，3，4号的值比较接近，选择超声40 min时间为宜。2.5 测定波长的选择：查文献[1]，丹参素在280 nm处有最大吸收，故选用该波长作为测定波长。
2.6 流动相的选择：文献报道[1～3]有多种方法，经过比较以乙腈-水-36%醋酸(5∶160∶1)较好，用在该品中有较好的分离。
2.7 重复性测定：对同一批样品，分别测定5 次，结果平均2.501 毫克/片，RSD=5.5%，符合要求。
2.8 回收率测定：加入丹参素钠对照品，重复测定5 次，结果平均回收率为97.3%(n=5)。
, http://www.100md.com
2.8 样品测定：对照品溶液的制备：取丹参素钠对照品适量，加50%甲醇制成0.04 mg/mL的溶液。
供试品溶液的制备：取本品20片，精密称定重量，研细，精密称取细粉0.35 g，置50 mL量瓶中，加50%甲醇25 mL，超声处理40 min，取出放冷，加水至刻度，摇匀，离心(10 000 r/min)15 min，取出，取上清液作为供试品溶液。
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。测定样品3 批，结果(毫克/片)990701批为2.41，990702批为2.35，990703批为2.47。本品以丹参素钠(C6H9O5Na)计算，不得少于每片1.0 mg。
参考文献
1，袁俊贤，等.中成药，1996，18(1)：15
2，朱宝珠，等.中草药，1997，28(6)：345
3，李元智，等.华西药学杂志，1996，11(4)：28
(1999-08-23收稿), 百拇医药