重庆地区HGV感染的分子流行病学
作者：刘建平 李亚斐
单位：中国人民解放军第三军医大学流行病学教研室 重庆市 400038
关键词：庚型肝炎病毒；肝炎；庚型；流行病学；序列分析；同源性；献血员；血液透析
摘 要摘 要：目的 探讨重庆地区HGV感染和基因型特征，了解致病性和传播途径。方法 用RT-PCR和ELlSA方法检测685例献血员和76例血液透析患者HGV感染状况，比较肝功能和重叠感染情况并进行部分病例随访；进行HGV 5-NCR测序。结果 本地存在HGV感染.血液透析患者HGV RNA阳性率(36%)明显高于献血员抗-HGV阳性率(3%)，约半数透析患者HGV合并HCV和HBV感染；基因分型表明属于第3组3b亚型。结论 HGV主要经血传播，感染HGV透析患者未发现有明显致病性；基因分型有助于深入探讨病毒致病性和变异。
Study on molecular epidemiology of hepatitis G virus infection in Chongqing
, http://www.100md.com
Jian Ping Liu ,Ya Fei Li
(Department of Epidemiology,Third Military Medical University,Chongqing 400038,China)
Abstract：AIM To understand the prevalence of HGV infection in Chongqing and mode of transmission as well as molecular biological characteristics of HGV.MIETHODS HGV RNA was detected by RT-PCR and anti-HGV antibody by ELISA. 5-NCR nucleotide sequences of some HGV RNA positive samples were determined and analyzed by molecular evolutionary methods. Four hemodialysis patients and one blood donor with HGV RNApositive were followed up.RESCLTS HGV RNA was positive in 36% (27/76) and anti-HGV in 20% (15/76) with hemodialysis patients, only3% (23/685) of anti-HGV in blood donors. Frequency of blood donating and plasmapheresis were risk factors for HGV infection in blood donors. Of HGV RNA positive patients, 13 (48%) and 18 (67%) were observed to be co-infected with HCV and HBV respectively. HGV isolates from Chongqing belonged to 3b subtype of genotype 3.CONCLUSION HGV infection may be spread through nosocomial infection besides blood transmission. Follow-up of one year to dialysis patients did not showpathogenicity of HGV.
, 百拇医药
Keywords：hepatitis G virus; hepatitis G/epidemiology; prevalence; sequence analysis;blood donor; hemodialysis
0引言庚型肝炎病毒(HGV)是近年来发现的与肝炎有关的新型人类病毒，属黄病毒科，为单股正链RNA病毒，基因组全长9.2kb～9.4kb，编码约2900个氨基酸残基的蛋白体.流行病学研究表明，HGV感染呈世界性分布，有关其致病性尚有争论.为了解重庆地区HGV感染情况，我们对献血员和血液透析患者进行了HGV感染的分子流行病学调查研究。1材料和方法1.1材料献血员685例为本校附属二院供血中心健康献血员，其中男541例，女144例，平均年龄30岁.血液透析患者76例为该院肾病中心血液透析室门诊和住院透析患者，其中男43例，女33例，平均年龄35岁.上述对象均为本地居住4a以上.标本采集：全血3mL分离血清，置-70°C保存，待检。1.2方法所有对象均行肝功能指标(全自动生化分析仪)、乙肝两对半、抗-HCV、抗-HGV(均用ELISA)检测.RT-PCR检测HGVRNA.从血清标本中提取HGVRNA，参照文献[1]方法进行PCR扩增，扩增产物用20g/L琼脂糖凝胶电泳与对照进行鉴定.HGVCdna序列测定，将PCR扩增产物按dsDNACycleSeqeuncingSystemKit(购自Gibco公司)说明进行纯化、测序引物末端同位素(32P)标记、测序、聚丙烯酰胺凝胶电泳、放射自显影读取DNA序列.测得序列用DNASTSV2.1软件进行校正、排列和同源性分析，根据序列间的同源性行系统树(PhylogeneticTree)分析，应用以下已报道的病毒株进行比较：GBV-C(西非，GeneBankaccessionNo.U36380)，GBV-CEA(东非，U63715)，HGV-JC(美国，U45966)，GT110(日本，D90600)，GT230(日本，D90601)，HGVC964(中国河北，U75356)，SE-ASIA(东南亚，U59539)，GBV-CWA(西非，U59544)，Europe12(欧洲，U59529)，5Hl，SH2，Nl，NJ2，LZ1，L73(上海、南京、兰州U89148～U89158).统计学处理应用Epilnfo(V5.0)软件对资料进行统计分析，计量资料用±S表示，用ANOVA(方差齐性)或KrusKal-Wallis(方差非齐性)检验分析；计数资料用X2检验或Fiser'sexact检验分析。2结果2.1献血员HGV感染情况用ELISA检测685例职业献血员(其HBV，HCV及HIV各项血清学标志物均阴性，体检合格者)抗-HGV，阳性率3.4%(23/685).比较其人口统计学资料、既往献血次数和单采浆史(表1)，抗-HGV阳性献血员中39%有单采浆史，明显高于抗-HGV阴性者(12%，P<0.01)；随献血次数增加阳性率也逐渐增高，且有显著意义。2.2血液透析患者HGV染用RT-PCR和ELISA分别检测患者血清中的HGVRNA和抗-HGV(表2)，HGVRNA阳性率为36%(27/76)，抗-HGV阳性率20%(15/76).两种方法检测的阳性符合率为44%(12/27)，总符合率为55%(42/76).表1献血员抗-HGV及相关因素比较a献血次数1～10次，b11～20次，c≥21次。表2血液透析患者HGVRNA和抗-HGV检测结果P<0.001，Fishersexacttest。HGVRNA阳性透析患者48%合并HCV感染(抗-HCV阳性)，67%合并HBV感染，仅7例(9%)为HGV单独感染.HGVRNA阳性患者中抗-HCV阳性率明显高于HGVRNA阴性者(分别为48%和16%，P<0.01).透析患者中，HGVRNA阳性和阴性者的各项肝功能指标比较未见显著性差异(P>0.05)，且均值均在正常范围内。2.3HGVRNA阳性者的随访对5例HGVRNA单项阳性者(4例透析患者，1例献血员)进行随访，2例患者和献血员在1a随访中，HGVRNA持续阳性，ALT水平均在正常范围；另l例患者随访至2mo出现HBsAg阳性，2wk后ALT水平升高(2150IU/L)，升高持续6mo后降至正常，抗-HBs转为阳性，随访期间HGVRNA仍持续阳性；第4例患者随访开始时ALT稍有升高(817IU/L)，后降至正常，HGVRNA及抗-HGV持续阳性。2.4HGV5'-NCR核苷酸同源性比较选取HGVRNA阳性透析患者7例(编号CQ01～07)和献血员1例(编号Cqox)进行核苷酸序列测定，结果表明各病毒株之间的同源性均在95%以上.与国内其他地区流行株(LZ1，SH1，NJ1，和HGVC964)之间的同源性为90%～95%，与日本的GT230毒株同源性为95%～98%，与国外其他流行毒株之间的同源性为79%～89%.2.5HGV的基因型分析用DNASTS软件对本研究分离的毒株和已发表的参考毒株进行进化分析，根据核苷酸同源性推导出进化树(图1).可将HGV基因型分为3组：第1组主要是西非流行株；第2组包括美国、欧洲流行株及日本的GT110毒株；第3组主要包括中国大陆及东南亚流行株和日本GT230毒株。图1由5'-NCR核苷酸同源性推导的HGV进化树。3讨论除甲一戊型肝炎病毒外，HGV被认为是一新的肝炎相关病毒，人群对其普遍易感.献血员及血液透析患者是感染HGV的高危人群.本文的研究结果表明，重庆地区存在HGV感染，献血员中感染率高于国内文献报道的1%～2%[2,3]；相关因素分析表明献血次数增多，有单采浆史为献血员HGV感染的危险因素.血液透析患者HGVRNA阳性率为36%，高于日本20%阳性率[4]，且其中半数以上合并有HBV感染，近半数合并抗-HCV阳性，表明HGV与HBV和HCV有共同的传播途径，即经血或其他肠道外传播.我们对7例血液透析患者的HGV5’-NCR基因序列分析，发现有3例患者HGV基因序列完全相同，回顾追踪其相应供血者，未发现其接受过相同献血员的供血.因此，不排除HGV医源性传播的可能.从单纯感染HGV透析患者和献血员随访观察来看，虽然有较长时间持续HGV病毒血症，但并未发现有肝炎的临床表现和肝功能异常，推测可能HGV致病性较弱，或病毒本身无细胞致病性，血液透析患者多有不同程度免疫功能低下，因此导致机体对病毒感染呈现免疫无应答或弱应答.对HGV的致病性尚需要进行长期的前瞻性研究并寻找肝脏组织病理学的证据。我们首次从重庆地区分离出HGV流行毒株，并对HGV5’-NCR基因序列分析发现，本地区流行毒株之间有非常高的同源性(>95%)，与国内其他地区(兰州、上海、南京和河北地区)流行毒株的同源性较高(90%～95%)；与国外(美国、欧洲和非洲)流行毒株的同源性相对稍低(79%～89%).分别对不同带毒者的HGV基因序列分析表明，从HBsAg、抗-HCV阳性者和正常献血员中分离的毒株之间具有较高的同源性，未发现特异性的序列特征。目前对病毒的基因分型多借助计算机软件对其基因组某一区段或全序列进行同源性比较和种系进化分析[5，6]，我们用DNASTS软件根据HGV5’-NCR基因序列对HGV进行种系进化分析，与GeneBank中编码注册的不同地区的代表性毒株比较，将HGV基因型分为3个组，我国的流行毒株属于第3组，包括3个亚型，重庆地区分离的毒株可归为其中3b亚型，兰州、南京和上海的可归为3c亚型，河北地区的流行株与东非毒株较接近，归为3a亚型.表明我国HGV基因型分布有明显地域特征，分型有助于了解病毒起源和传播途径；有助于探讨不同基因型病毒的毒力和致病性。
, http://www.100md.com
作者简介：刘建平，男，1961年12月20日出生，山东省莱西市人，汉族。1983年遵义医学院医疗系本科毕业，1986年第三军医大学硕士研究生毕业，1992年中山大学传染病学博士毕业，副教授，教研室主任，主要从事传染病流行病学、循证医学研究，第一作者发表论文40篇，主编、合编著作3部。
参考文献：
[1]Li BA,Cheng Y,Luo QH,Guo RF,Ma HB,Zhang JZ,Cao Y,Fu TQ,Xue J,Li J.Detection of hepatitis G virus (HGV)by reverse transcriptase nested polymerase chain reaction and its pre-liminary aplication.Zhonghua Shiyan He Linchuang Bingduxue Zazhi,1996;10:251-253
, 百拇医药
[2]Wu RR. Mizokami M,Cao K,Nakano T,Ge XM,Wang SS,Orito E,Ohba KI,Mukaide M,Hikiji K,Lau JYN,Iino S.GB virus C/hepatitis G virus infection in southem China.J Infect Dis,19997;175:168-171
[3]Wang Y, Chen HS, Fan MH, Liu HL, An P, Sawada N, Tanaka T, Tsuda F,Okamoto H. Infection with GB virns C and hepatitis C virus in hemodialysis patients and blood donors in Beijing.J Med Virol,1997;52:26-30
[4]Masuko K,Mitsui T,Iwano K,Yamazaki C,Okuda K,Mecuro T,Murayama N,Inoue T,Tsuda F,Okamoto H,Miyakawa Y,Mayumi M.Infection with hepatitis GB virus C in patients on maintenance hemodialysis.N Engl J Med,1996;334:1485-1490
, http://www.100md.com
[5]Simmonds P,Smith DB,McOmish F,Yap PL,Kolberg J,Urdea MS,Holmes EC.Identification of genotypes of hepatitis C virus by sequence comparisons in the core,E1 and NS-5regions.J Gen Virol,199
[6]Huelsenbeck JP,Rannala B.Phylogenetic methodsw come of age:testing hypothesis in an evolutionary contest.Science,1997;276:227-232
收稿日期：1999-12-23, http://www.100md.com
单位：中国人民解放军第三军医大学流行病学教研室 重庆市 400038
关键词：庚型肝炎病毒；肝炎；庚型；流行病学；序列分析；同源性；献血员；血液透析
摘 要摘 要：目的 探讨重庆地区HGV感染和基因型特征，了解致病性和传播途径。方法 用RT-PCR和ELlSA方法检测685例献血员和76例血液透析患者HGV感染状况，比较肝功能和重叠感染情况并进行部分病例随访；进行HGV 5-NCR测序。结果 本地存在HGV感染.血液透析患者HGV RNA阳性率(36%)明显高于献血员抗-HGV阳性率(3%)，约半数透析患者HGV合并HCV和HBV感染；基因分型表明属于第3组3b亚型。结论 HGV主要经血传播，感染HGV透析患者未发现有明显致病性；基因分型有助于深入探讨病毒致病性和变异。
Study on molecular epidemiology of hepatitis G virus infection in Chongqing
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Jian Ping Liu ,Ya Fei Li
(Department of Epidemiology,Third Military Medical University,Chongqing 400038,China)
Abstract：AIM To understand the prevalence of HGV infection in Chongqing and mode of transmission as well as molecular biological characteristics of HGV.MIETHODS HGV RNA was detected by RT-PCR and anti-HGV antibody by ELISA. 5-NCR nucleotide sequences of some HGV RNA positive samples were determined and analyzed by molecular evolutionary methods. Four hemodialysis patients and one blood donor with HGV RNApositive were followed up.RESCLTS HGV RNA was positive in 36% (27/76) and anti-HGV in 20% (15/76) with hemodialysis patients, only3% (23/685) of anti-HGV in blood donors. Frequency of blood donating and plasmapheresis were risk factors for HGV infection in blood donors. Of HGV RNA positive patients, 13 (48%) and 18 (67%) were observed to be co-infected with HCV and HBV respectively. HGV isolates from Chongqing belonged to 3b subtype of genotype 3.CONCLUSION HGV infection may be spread through nosocomial infection besides blood transmission. Follow-up of one year to dialysis patients did not showpathogenicity of HGV.
, 百拇医药
Keywords：hepatitis G virus; hepatitis G/epidemiology; prevalence; sequence analysis;blood donor; hemodialysis
0引言庚型肝炎病毒(HGV)是近年来发现的与肝炎有关的新型人类病毒，属黄病毒科，为单股正链RNA病毒，基因组全长9.2kb～9.4kb，编码约2900个氨基酸残基的蛋白体.流行病学研究表明，HGV感染呈世界性分布，有关其致病性尚有争论.为了解重庆地区HGV感染情况，我们对献血员和血液透析患者进行了HGV感染的分子流行病学调查研究。1材料和方法1.1材料献血员685例为本校附属二院供血中心健康献血员，其中男541例，女144例，平均年龄30岁.血液透析患者76例为该院肾病中心血液透析室门诊和住院透析患者，其中男43例，女33例，平均年龄35岁.上述对象均为本地居住4a以上.标本采集：全血3mL分离血清，置-70°C保存，待检。1.2方法所有对象均行肝功能指标(全自动生化分析仪)、乙肝两对半、抗-HCV、抗-HGV(均用ELISA)检测.RT-PCR检测HGVRNA.从血清标本中提取HGVRNA，参照文献[1]方法进行PCR扩增，扩增产物用20g/L琼脂糖凝胶电泳与对照进行鉴定.HGVCdna序列测定，将PCR扩增产物按dsDNACycleSeqeuncingSystemKit(购自Gibco公司)说明进行纯化、测序引物末端同位素(32P)标记、测序、聚丙烯酰胺凝胶电泳、放射自显影读取DNA序列.测得序列用DNASTSV2.1软件进行校正、排列和同源性分析，根据序列间的同源性行系统树(PhylogeneticTree)分析，应用以下已报道的病毒株进行比较：GBV-C(西非，GeneBankaccessionNo.U36380)，GBV-CEA(东非，U63715)，HGV-JC(美国，U45966)，GT110(日本，D90600)，GT230(日本，D90601)，HGVC964(中国河北，U75356)，SE-ASIA(东南亚，U59539)，GBV-CWA(西非，U59544)，Europe12(欧洲，U59529)，5Hl，SH2，Nl，NJ2，LZ1，L73(上海、南京、兰州U89148～U89158).统计学处理应用Epilnfo(V5.0)软件对资料进行统计分析，计量资料用±S表示，用ANOVA(方差齐性)或KrusKal-Wallis(方差非齐性)检验分析；计数资料用X2检验或Fiser'sexact检验分析。2结果2.1献血员HGV感染情况用ELISA检测685例职业献血员(其HBV，HCV及HIV各项血清学标志物均阴性，体检合格者)抗-HGV，阳性率3.4%(23/685).比较其人口统计学资料、既往献血次数和单采浆史(表1)，抗-HGV阳性献血员中39%有单采浆史，明显高于抗-HGV阴性者(12%，P<0.01)；随献血次数增加阳性率也逐渐增高，且有显著意义。2.2血液透析患者HGV染用RT-PCR和ELISA分别检测患者血清中的HGVRNA和抗-HGV(表2)，HGVRNA阳性率为36%(27/76)，抗-HGV阳性率20%(15/76).两种方法检测的阳性符合率为44%(12/27)，总符合率为55%(42/76).表1献血员抗-HGV及相关因素比较a献血次数1～10次，b11～20次，c≥21次。表2血液透析患者HGVRNA和抗-HGV检测结果P<0.001，Fishersexacttest。HGVRNA阳性透析患者48%合并HCV感染(抗-HCV阳性)，67%合并HBV感染，仅7例(9%)为HGV单独感染.HGVRNA阳性患者中抗-HCV阳性率明显高于HGVRNA阴性者(分别为48%和16%，P<0.01).透析患者中，HGVRNA阳性和阴性者的各项肝功能指标比较未见显著性差异(P>0.05)，且均值均在正常范围内。2.3HGVRNA阳性者的随访对5例HGVRNA单项阳性者(4例透析患者，1例献血员)进行随访，2例患者和献血员在1a随访中，HGVRNA持续阳性，ALT水平均在正常范围；另l例患者随访至2mo出现HBsAg阳性，2wk后ALT水平升高(2150IU/L)，升高持续6mo后降至正常，抗-HBs转为阳性，随访期间HGVRNA仍持续阳性；第4例患者随访开始时ALT稍有升高(817IU/L)，后降至正常，HGVRNA及抗-HGV持续阳性。2.4HGV5'-NCR核苷酸同源性比较选取HGVRNA阳性透析患者7例(编号CQ01～07)和献血员1例(编号Cqox)进行核苷酸序列测定，结果表明各病毒株之间的同源性均在95%以上.与国内其他地区流行株(LZ1，SH1，NJ1，和HGVC964)之间的同源性为90%～95%，与日本的GT230毒株同源性为95%～98%，与国外其他流行毒株之间的同源性为79%～89%.2.5HGV的基因型分析用DNASTS软件对本研究分离的毒株和已发表的参考毒株进行进化分析，根据核苷酸同源性推导出进化树(图1).可将HGV基因型分为3组：第1组主要是西非流行株；第2组包括美国、欧洲流行株及日本的GT110毒株；第3组主要包括中国大陆及东南亚流行株和日本GT230毒株。图1由5'-NCR核苷酸同源性推导的HGV进化树。3讨论除甲一戊型肝炎病毒外，HGV被认为是一新的肝炎相关病毒，人群对其普遍易感.献血员及血液透析患者是感染HGV的高危人群.本文的研究结果表明，重庆地区存在HGV感染，献血员中感染率高于国内文献报道的1%～2%[2,3]；相关因素分析表明献血次数增多，有单采浆史为献血员HGV感染的危险因素.血液透析患者HGVRNA阳性率为36%，高于日本20%阳性率[4]，且其中半数以上合并有HBV感染，近半数合并抗-HCV阳性，表明HGV与HBV和HCV有共同的传播途径，即经血或其他肠道外传播.我们对7例血液透析患者的HGV5’-NCR基因序列分析，发现有3例患者HGV基因序列完全相同，回顾追踪其相应供血者，未发现其接受过相同献血员的供血.因此，不排除HGV医源性传播的可能.从单纯感染HGV透析患者和献血员随访观察来看，虽然有较长时间持续HGV病毒血症，但并未发现有肝炎的临床表现和肝功能异常，推测可能HGV致病性较弱，或病毒本身无细胞致病性，血液透析患者多有不同程度免疫功能低下，因此导致机体对病毒感染呈现免疫无应答或弱应答.对HGV的致病性尚需要进行长期的前瞻性研究并寻找肝脏组织病理学的证据。我们首次从重庆地区分离出HGV流行毒株，并对HGV5’-NCR基因序列分析发现，本地区流行毒株之间有非常高的同源性(>95%)，与国内其他地区(兰州、上海、南京和河北地区)流行毒株的同源性较高(90%～95%)；与国外(美国、欧洲和非洲)流行毒株的同源性相对稍低(79%～89%).分别对不同带毒者的HGV基因序列分析表明，从HBsAg、抗-HCV阳性者和正常献血员中分离的毒株之间具有较高的同源性，未发现特异性的序列特征。目前对病毒的基因分型多借助计算机软件对其基因组某一区段或全序列进行同源性比较和种系进化分析[5，6]，我们用DNASTS软件根据HGV5’-NCR基因序列对HGV进行种系进化分析，与GeneBank中编码注册的不同地区的代表性毒株比较，将HGV基因型分为3个组，我国的流行毒株属于第3组，包括3个亚型，重庆地区分离的毒株可归为其中3b亚型，兰州、南京和上海的可归为3c亚型，河北地区的流行株与东非毒株较接近，归为3a亚型.表明我国HGV基因型分布有明显地域特征，分型有助于了解病毒起源和传播途径；有助于探讨不同基因型病毒的毒力和致病性。
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作者简介：刘建平，男，1961年12月20日出生，山东省莱西市人，汉族。1983年遵义医学院医疗系本科毕业，1986年第三军医大学硕士研究生毕业，1992年中山大学传染病学博士毕业，副教授，教研室主任，主要从事传染病流行病学、循证医学研究，第一作者发表论文40篇，主编、合编著作3部。
参考文献：
[1]Li BA,Cheng Y,Luo QH,Guo RF,Ma HB,Zhang JZ,Cao Y,Fu TQ,Xue J,Li J.Detection of hepatitis G virus (HGV)by reverse transcriptase nested polymerase chain reaction and its pre-liminary aplication.Zhonghua Shiyan He Linchuang Bingduxue Zazhi,1996;10:251-253
, 百拇医药
[2]Wu RR. Mizokami M,Cao K,Nakano T,Ge XM,Wang SS,Orito E,Ohba KI,Mukaide M,Hikiji K,Lau JYN,Iino S.GB virus C/hepatitis G virus infection in southem China.J Infect Dis,19997;175:168-171
[3]Wang Y, Chen HS, Fan MH, Liu HL, An P, Sawada N, Tanaka T, Tsuda F,Okamoto H. Infection with GB virns C and hepatitis C virus in hemodialysis patients and blood donors in Beijing.J Med Virol,1997;52:26-30
[4]Masuko K,Mitsui T,Iwano K,Yamazaki C,Okuda K,Mecuro T,Murayama N,Inoue T,Tsuda F,Okamoto H,Miyakawa Y,Mayumi M.Infection with hepatitis GB virus C in patients on maintenance hemodialysis.N Engl J Med,1996;334:1485-1490
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[5]Simmonds P,Smith DB,McOmish F,Yap PL,Kolberg J,Urdea MS,Holmes EC.Identification of genotypes of hepatitis C virus by sequence comparisons in the core,E1 and NS-5regions.J Gen Virol,199
[6]Huelsenbeck JP,Rannala B.Phylogenetic methodsw come of age:testing hypothesis in an evolutionary contest.Science,1997;276:227-232
收稿日期：1999-12-23, http://www.100md.com