乙草胺致癌病理学试验的评价
作者：姚宝玉 王捷 于峰 王薏 张静 吴宝田
单位：化学工业农药安全评价质量监督检验中心，沈阳 110021
关键词：
卫生毒理学杂志000409 乙草胺(Acetochlor)是选择性旱田芽前除草剂，主要用于玉米、大豆、棉花、甘蔗及多种菜田，每亩一次施药50～80 g可控制整个生长期无杂草危害，是有推广价值的新型除草剂。急性毒性经口、经皮LD50分别为2 148 mg/kg、4 166 mg/kg，SD大鼠亚慢性90 d喂喟试验的最大无作用剂量为12 mg.kg-1..d-1,Ames、微核及睾丸染色体试验结果均为阴性。我们又进一步作了两年致癌试验，现报告如下。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 供试样品 95%乙草胺由江苏省昆山化工厂、南通化工厂、辽宁省大连农药厂、河北省宣化农药厂分批提供。
1.2 实验动物 清洁级5周龄SD健康大鼠，由上海BK公司提供，动物检疫驯化1周开始给药。设1个对照组，200、700、2 000 mg/kg.饲料3个投药组，按鼠日均进食量折算剂量相当于12、42、120 mg.kg-1..d-1。应用计算机随机分组，每组雌雄各48只，共384只。
1.3 动物饲养 试验在全封闭屏障系统内进行。其系统内平均温度(22±4)℃，湿度(55±10)%，光照200 lx左右，空气经初、中、高三级过滤(过滤率为99.97%)，换气12～16次/h，系统保持微正压，噪音60 dB以下，氨浓度20 mg/kg以下。采用自动饮水装置供动物饮用。动物在悬挂式铝合金笼内单笼饲养。饲料经60Co照射为无菌粉料。试验期间动物自由摄食饮水。
, 百拇医药
1.4 临床观察 体重称量0～13周每周1次，14～26周每2周1次，27～104周每4周1次。耗食称量：每周1次。每天观察1次，濒死动物每天观察两次。
1.5 病理检查 试验期间濒死或自然死亡动物随时解剖检查，于第52周做阶段解剖，每组雄雌动物各5只，其余均在活体试验终期(第104周)全部解剖。取出脑、脑垂体、甲状腺、甲状旁腺、胸腺、气管、肺、心、肝、脾、肾、肾上腺、食道、胃、十二指肠、空肠、回肠、结肠、盲肠、直肠、肛门、胰腺、膀胱、前列腺、精囊腺、睾丸、卵巢、附睾、子宫、乳腺、皮肤、大腿骨、胸骨、淋巴结、眼球、唾液腺及所有肉眼认为异常的组织及脏器。称重脏器包括心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、脑、睾丸、卵巢。标本经体积分数为10%的中性福尔马林缓冲液固定5～7 d，取材之后再次固定12 h。组织以乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片，HE染色，树胶封固。光镜检查。记录病变的种类及程度。
1.6 数据处理 体重、耗食等用t检验。肿瘤发生率、死亡率等用χ2检验。
, http://www.100md.com
2 实验结果
2.1 肿瘤发生率 本试验384只动物其中222只出现肿瘤，雄性95只(42.97%)，雌性127只(57.21%)，雄雌比1∶1.3，这种差异与雌鼠脑垂体和乳腺肿瘤的自然发生率较高有关。基中垂体肿瘤高剂量与低剂量分别为25%和37.5%，雌性分别为54%和62.5%。乳腺肿瘤雄性各组只是偶发1～2例，雌性对照组为33.33%，高剂量组为35.41%。白血病雄性对照组1例，而高剂量组未发现，雌性对照组1例。高剂量组2例。肺腺瘤雄性对照组及中、高剂量组各1例，雌性仅高剂量组出现1例。肝癌雄性对照组和高剂量组各1例，雌性各剂量组均未发生。甲状腺瘤雄性剂量组发生率较高，低剂量组2例，中、高剂量组各1例，而雌性仅高剂量组有1例。甲状腺癌雄性对照组、高剂量组各1例，雌性仅高剂量组有1例，这些差异均无显著性(表1)。
2.2 肿瘤检出数 在222只发生肿瘤的大鼠中共检出298个肿瘤，其中每只有1、2、3、4、6个肿瘤的大鼠分别为166、41、6、8、1只。平均肿瘤数对照组、低、中、高剂量组雄性依次为1.0、1.45、1.11、1.18个；雌性依次为1.43、1.43、1.41、1.81个。各组均无明显的剂量-反应关系。
, 百拇医药
2.3 不同时期肿瘤发生数 各剂量组大鼠肿瘤发生时间，除雄性低剂量组1例脑垂体肿瘤发生于第10个月外，其余都在1年半以后发生，在发生时间上各剂量组和对照组差异无显著性。
2.4 动物自然死亡累积、时间及死因分析 中途自然死亡动物的累积数，对照组与高剂量组雄性分别为18只(37.50%)、15只(31.31%)；雌性分别为19只(39.58%)、16只(33.33%)，无统计学意义。动物死亡时间各剂量组间差异亦无显著性。中途死亡动物主要死因为脑垂体肿瘤、乳腺肿瘤、白血病等，各剂量组无明显差异。
3 讨论
本试验结果高剂量组出现轻度中毒现象，与对照组比较体重受到抑制7%，各剂量组104周生存率均在50%以上。而且死亡大鼠自溶不能进行病理检查者不超过5%，这些都符合国际致癌试验的设计要求[1]。表1 各剂量组肿瘤类型及发生数(只) 肿瘤
, 百拇医药
雄性
雌性
0(mg/kg)
200(mg/kg)
700(mg/kg)
2 000(mg/kg)
0(mg/kg)
200(mg/kg)
700(mg/kg)
2 000(mg/kg)
肺腺瘤
1
, http://www.100md.com
0
1
1
0
0
0
1
心纤维瘤
0
1
0
0
0
0
, http://www.100md.com
0
0
肝癌
1
0
0
1
0
0
0
0
胆管瘤
0
0
, http://www.100md.com
0
0
0
0
1
0
肾胚胎瘤
0
0
2
0
0
0
0
, http://www.100md.com
0
胰岛细胞瘤
1
0
2
0
0
0
0
0
胰腺瘤
0
0
0
, http://www.100md.com
1
0
0
0
0
胰腺癌
0
0
1
1
0
0
0
0
, 百拇医药
甲状腺腺瘤
0
2
1
1
0
0
0
1
甲状腺腺癌
1
0
0
1
, 百拇医药
0
0
0
1
脑垂体腺瘤
18
17
16
12
28
23
26
24
脑垂体腺癌
, http://www.100md.com
0
0
1
0
2
5
3
2
乳腺腺瘤
0
1
0
0
2
, 百拇医药
5
2
1
乳腺纤维腺瘤
0
3
1
1
13
9
13
12
乳腺癌
0
, 百拇医药
0
2
0
1
0
0
4
肾上腺嗜铬细胞瘤
1
1
0
1
1
0
, 百拇医药
0
0
胃乳头状瘤
0
0
1
0
0
1
0
0
胃恶纤组
0
0
, 百拇医药
0
0
0
1
0
0
脑血管瘤
0
0
1
0
0
0
0
, 百拇医药
0
脑腺瘤
0
1
0
0
0
0
0
0
脾网织细胞瘤
0
1
0
, 百拇医药
0
0
0
0
1
白血病
2
2
1
0
1
0
1
2
, 百拇医药
子宫血管纤维瘤
0
0
0
0
1
0
0
0
子宫肌瘤
0
0
0
0
, 百拇医药
0
0
1
0
皮下纤维瘤
0
1
0
0
0
0
0
0
纤维肉瘤
, http://www.100md.com
0
0
0
1
0
0
0
0
血管瘤
0
0
0
0
0
, http://www.100md.com
1
0
1
血管恶纤组
0
0
0
1
0
0
2
0
皮肤鳞癌
0
, 百拇医药
1
0
0
0
0
0
0
腹腔纤维瘤
0
0
0
1
0
0
, http://www.100md.com
0
0
肠系膜淋巴囊肿
0
0
0
0
0
0
0
1
每组实验动物数为48只
农业部农药检定所[2]参考WHO的致癌试验判定标准，制定出我国致癌试验结果出现下列之一，并经统计学处理有显著差异者可以认为致癌阳性结果：(1)肿瘤仅发生在染毒组，对照组无此类肿瘤；(2)染毒组与对照组均发生肿瘤，但染毒组明显高于对照组；(3)染毒组多发生肿瘤多，而对照组无或少数动物有多发性肿瘤；(4)染毒组与对照组肿瘤发生率无明显差异，但染毒动物发生时间较早。本试验结果不具有上述情况，此外从恶性肿瘤、癌前病变发生率来看，染毒组与对照组差异无显著性，而且出现的各类肿瘤其发生率都在SD大鼠自发性肿瘤背景范围之内[3]，林裕造等[1]还提出值得重视的3点补充意见：(1)在染毒组出现该动物品系中很少见的肿瘤，即使个别出现也应引起重视；(2)恶性肿瘤发生率低而良性肿瘤发生率高也是重要指标；(3)即使都属于自发性肿瘤，但染毒组发生早对阳性判定也有一定价值，本试验结果未见类似上述情况。
, 百拇医药
国外有人曾统计通过致癌化学物质制作癌症模型试验结果证明，其诱发肿瘤与自发性肿瘤不同点是大部分在1年以内出现诱发肿瘤，并提出如高剂量组1年半以上出现的肿瘤难以作为致癌指标。本试验中出现的肿癌大部分在1年以上，而且绝大多数在1年半以上，如雌性大鼠乳腺癌高剂量组4例，对照组1例都是在两年终期出现，当属自发性肿瘤。文献报道SD大鼠自发性肿瘤的平均肿瘤数雄性1.6个，雌性2.0个。而本试验中发生肿瘤动物的平均肿瘤数略低，雄性、雌性分别为1～1.45、1.41～1.81个，这可能与检查组织数量多少有关。
综上所述，乙草胺试验结果提示在本中心现有试验条件下，对SD大鼠未出现致癌阳性结果。
(本文部分病理切片承蒙中国预防医学科学院劳动卫生职业病研究所所梁淑蓉教授会诊确定，特此志谢。)
参考文献
[1] 林裕造、高桥道人.动物致癌性试验的评价.病理と临床，1983，1：895-904.
[2] 卫生部，农业部.农药安全性毒理学评价程序.1991，8-9.
[3] 今井清，吉村慎介.Sprague-Dawley系自然发生肿瘤.J Toxicol Pathol,1988,1：7-12.
(收稿日期：2000-01-25), http://www.100md.com
单位：化学工业农药安全评价质量监督检验中心，沈阳 110021
关键词：
卫生毒理学杂志000409 乙草胺(Acetochlor)是选择性旱田芽前除草剂，主要用于玉米、大豆、棉花、甘蔗及多种菜田，每亩一次施药50～80 g可控制整个生长期无杂草危害，是有推广价值的新型除草剂。急性毒性经口、经皮LD50分别为2 148 mg/kg、4 166 mg/kg，SD大鼠亚慢性90 d喂喟试验的最大无作用剂量为12 mg.kg-1..d-1,Ames、微核及睾丸染色体试验结果均为阴性。我们又进一步作了两年致癌试验，现报告如下。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 供试样品 95%乙草胺由江苏省昆山化工厂、南通化工厂、辽宁省大连农药厂、河北省宣化农药厂分批提供。
1.2 实验动物 清洁级5周龄SD健康大鼠，由上海BK公司提供，动物检疫驯化1周开始给药。设1个对照组，200、700、2 000 mg/kg.饲料3个投药组，按鼠日均进食量折算剂量相当于12、42、120 mg.kg-1..d-1。应用计算机随机分组，每组雌雄各48只，共384只。
1.3 动物饲养 试验在全封闭屏障系统内进行。其系统内平均温度(22±4)℃，湿度(55±10)%，光照200 lx左右，空气经初、中、高三级过滤(过滤率为99.97%)，换气12～16次/h，系统保持微正压，噪音60 dB以下，氨浓度20 mg/kg以下。采用自动饮水装置供动物饮用。动物在悬挂式铝合金笼内单笼饲养。饲料经60Co照射为无菌粉料。试验期间动物自由摄食饮水。
, 百拇医药
1.4 临床观察 体重称量0～13周每周1次，14～26周每2周1次，27～104周每4周1次。耗食称量：每周1次。每天观察1次，濒死动物每天观察两次。
1.5 病理检查 试验期间濒死或自然死亡动物随时解剖检查，于第52周做阶段解剖，每组雄雌动物各5只，其余均在活体试验终期(第104周)全部解剖。取出脑、脑垂体、甲状腺、甲状旁腺、胸腺、气管、肺、心、肝、脾、肾、肾上腺、食道、胃、十二指肠、空肠、回肠、结肠、盲肠、直肠、肛门、胰腺、膀胱、前列腺、精囊腺、睾丸、卵巢、附睾、子宫、乳腺、皮肤、大腿骨、胸骨、淋巴结、眼球、唾液腺及所有肉眼认为异常的组织及脏器。称重脏器包括心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、脑、睾丸、卵巢。标本经体积分数为10%的中性福尔马林缓冲液固定5～7 d，取材之后再次固定12 h。组织以乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片，HE染色，树胶封固。光镜检查。记录病变的种类及程度。
1.6 数据处理 体重、耗食等用t检验。肿瘤发生率、死亡率等用χ2检验。
, http://www.100md.com
2 实验结果
2.1 肿瘤发生率 本试验384只动物其中222只出现肿瘤，雄性95只(42.97%)，雌性127只(57.21%)，雄雌比1∶1.3，这种差异与雌鼠脑垂体和乳腺肿瘤的自然发生率较高有关。基中垂体肿瘤高剂量与低剂量分别为25%和37.5%，雌性分别为54%和62.5%。乳腺肿瘤雄性各组只是偶发1～2例，雌性对照组为33.33%，高剂量组为35.41%。白血病雄性对照组1例，而高剂量组未发现，雌性对照组1例。高剂量组2例。肺腺瘤雄性对照组及中、高剂量组各1例，雌性仅高剂量组出现1例。肝癌雄性对照组和高剂量组各1例，雌性各剂量组均未发生。甲状腺瘤雄性剂量组发生率较高，低剂量组2例，中、高剂量组各1例，而雌性仅高剂量组有1例。甲状腺癌雄性对照组、高剂量组各1例，雌性仅高剂量组有1例，这些差异均无显著性(表1)。
2.2 肿瘤检出数 在222只发生肿瘤的大鼠中共检出298个肿瘤，其中每只有1、2、3、4、6个肿瘤的大鼠分别为166、41、6、8、1只。平均肿瘤数对照组、低、中、高剂量组雄性依次为1.0、1.45、1.11、1.18个；雌性依次为1.43、1.43、1.41、1.81个。各组均无明显的剂量-反应关系。
, 百拇医药
2.3 不同时期肿瘤发生数 各剂量组大鼠肿瘤发生时间，除雄性低剂量组1例脑垂体肿瘤发生于第10个月外，其余都在1年半以后发生，在发生时间上各剂量组和对照组差异无显著性。
2.4 动物自然死亡累积、时间及死因分析 中途自然死亡动物的累积数，对照组与高剂量组雄性分别为18只(37.50%)、15只(31.31%)；雌性分别为19只(39.58%)、16只(33.33%)，无统计学意义。动物死亡时间各剂量组间差异亦无显著性。中途死亡动物主要死因为脑垂体肿瘤、乳腺肿瘤、白血病等，各剂量组无明显差异。
3 讨论
本试验结果高剂量组出现轻度中毒现象，与对照组比较体重受到抑制7%，各剂量组104周生存率均在50%以上。而且死亡大鼠自溶不能进行病理检查者不超过5%，这些都符合国际致癌试验的设计要求[1]。表1 各剂量组肿瘤类型及发生数(只) 肿瘤
, 百拇医药
雄性
雌性
0(mg/kg)
200(mg/kg)
700(mg/kg)
2 000(mg/kg)
0(mg/kg)
200(mg/kg)
700(mg/kg)
2 000(mg/kg)
肺腺瘤
1
, http://www.100md.com
0
1
1
0
0
0
1
心纤维瘤
0
1
0
0
0
0
, http://www.100md.com
0
0
肝癌
1
0
0
1
0
0
0
0
胆管瘤
0
0
, http://www.100md.com
0
0
0
0
1
0
肾胚胎瘤
0
0
2
0
0
0
0
, http://www.100md.com
0
胰岛细胞瘤
1
0
2
0
0
0
0
0
胰腺瘤
0
0
0
, http://www.100md.com
1
0
0
0
0
胰腺癌
0
0
1
1
0
0
0
0
, 百拇医药
甲状腺腺瘤
0
2
1
1
0
0
0
1
甲状腺腺癌
1
0
0
1
, 百拇医药
0
0
0
1
脑垂体腺瘤
18
17
16
12
28
23
26
24
脑垂体腺癌
, http://www.100md.com
0
0
1
0
2
5
3
2
乳腺腺瘤
0
1
0
0
2
, 百拇医药
5
2
1
乳腺纤维腺瘤
0
3
1
1
13
9
13
12
乳腺癌
0
, 百拇医药
0
2
0
1
0
0
4
肾上腺嗜铬细胞瘤
1
1
0
1
1
0
, 百拇医药
0
0
胃乳头状瘤
0
0
1
0
0
1
0
0
胃恶纤组
0
0
, 百拇医药
0
0
0
1
0
0
脑血管瘤
0
0
1
0
0
0
0
, 百拇医药
0
脑腺瘤
0
1
0
0
0
0
0
0
脾网织细胞瘤
0
1
0
, 百拇医药
0
0
0
0
1
白血病
2
2
1
0
1
0
1
2
, 百拇医药
子宫血管纤维瘤
0
0
0
0
1
0
0
0
子宫肌瘤
0
0
0
0
, 百拇医药
0
0
1
0
皮下纤维瘤
0
1
0
0
0
0
0
0
纤维肉瘤
, http://www.100md.com
0
0
0
1
0
0
0
0
血管瘤
0
0
0
0
0
, http://www.100md.com
1
0
1
血管恶纤组
0
0
0
1
0
0
2
0
皮肤鳞癌
0
, 百拇医药
1
0
0
0
0
0
0
腹腔纤维瘤
0
0
0
1
0
0
, http://www.100md.com
0
0
肠系膜淋巴囊肿
0
0
0
0
0
0
0
1
每组实验动物数为48只
农业部农药检定所[2]参考WHO的致癌试验判定标准，制定出我国致癌试验结果出现下列之一，并经统计学处理有显著差异者可以认为致癌阳性结果：(1)肿瘤仅发生在染毒组，对照组无此类肿瘤；(2)染毒组与对照组均发生肿瘤，但染毒组明显高于对照组；(3)染毒组多发生肿瘤多，而对照组无或少数动物有多发性肿瘤；(4)染毒组与对照组肿瘤发生率无明显差异，但染毒动物发生时间较早。本试验结果不具有上述情况，此外从恶性肿瘤、癌前病变发生率来看，染毒组与对照组差异无显著性，而且出现的各类肿瘤其发生率都在SD大鼠自发性肿瘤背景范围之内[3]，林裕造等[1]还提出值得重视的3点补充意见：(1)在染毒组出现该动物品系中很少见的肿瘤，即使个别出现也应引起重视；(2)恶性肿瘤发生率低而良性肿瘤发生率高也是重要指标；(3)即使都属于自发性肿瘤，但染毒组发生早对阳性判定也有一定价值，本试验结果未见类似上述情况。
, 百拇医药
国外有人曾统计通过致癌化学物质制作癌症模型试验结果证明，其诱发肿瘤与自发性肿瘤不同点是大部分在1年以内出现诱发肿瘤，并提出如高剂量组1年半以上出现的肿瘤难以作为致癌指标。本试验中出现的肿癌大部分在1年以上，而且绝大多数在1年半以上，如雌性大鼠乳腺癌高剂量组4例，对照组1例都是在两年终期出现，当属自发性肿瘤。文献报道SD大鼠自发性肿瘤的平均肿瘤数雄性1.6个，雌性2.0个。而本试验中发生肿瘤动物的平均肿瘤数略低，雄性、雌性分别为1～1.45、1.41～1.81个，这可能与检查组织数量多少有关。
综上所述，乙草胺试验结果提示在本中心现有试验条件下，对SD大鼠未出现致癌阳性结果。
(本文部分病理切片承蒙中国预防医学科学院劳动卫生职业病研究所所梁淑蓉教授会诊确定，特此志谢。)
参考文献
[1] 林裕造、高桥道人.动物致癌性试验的评价.病理と临床，1983，1：895-904.
[2] 卫生部，农业部.农药安全性毒理学评价程序.1991，8-9.
[3] 今井清，吉村慎介.Sprague-Dawley系自然发生肿瘤.J Toxicol Pathol,1988,1：7-12.
(收稿日期：2000-01-25), http://www.100md.com