胰岛素对人Hep G2细胞合成PAI-1的刺激作用
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中国糖尿病杂志 2000年第4期第8卷 短篇报道
程树群(第二军医大学肝胆外科研究所)；张遂一浙江省嘉兴市第一人民医院 邮政编码 314000)；翁小鸽(浙江省嘉兴市第一人民医院 邮政编码 314000) 潘建新 程树群 张遂一 翁小鸽
关键词：
摘要：
中国糖尿病杂志000420 血浆纤溶酶原激活剂抑制物(PAI-1)活性水平升高可出现在冠心 病、外周血管栓塞、手术后等情况，PAI活性升高可预测心肌梗塞的复发。PAI-1是血浆中t PA的主要生理抑制剂，由内皮细胞、肝细胞合成[1]。近年研究显示血浆胰岛素水 平与PAI水平相关。本实验观察胰岛素对体外培养肝癌细胞系Hep G2合成PAI的作用，报道如 下。
材料与方法
人Hep G2细胞：由第二军医大学肝胆外科研究所提供。人胰岛素：由Novo Nordisk提供。He p G2细胞培养基：DMEM，含10%加热灭活小牛血清。培养细胞在9.6cm2多孔培养板中长成 单层汇合，而后更换成含1%小牛血清培养基，并加入不同浓度胰岛素，经24小时培养后，将 细胞培养液离心，取上清液置-20℃保存待测。
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细胞提取液制备：培养的单层细胞与1ml 0.5% Triton×100在室温培育1小时，置-20℃保存 待测。
PAI-1活性采用发色底物显色法测定。
统计分析：采用Student’s t检验，数据以
±s表示。
结 果
观察到Hep G2培养基及细胞提取液受胰岛素刺激后，PAI-1活性增强，与对照组比较，最大 值增加近2倍，见附表。
讨 论
血浆PAI-1来自内皮细胞、肝细胞、血小板。本研究观察到胰岛素对Hep G2细胞合成PAI-1 具有刺激作用，胰岛素浓度为(0.6～10)×10-9mol/L范围，此浓度与大鼠餐后门静脉 血浆胰岛素浓度接近[2]。
, 百拇医药
肥胖及2型糖尿病多存在高胰岛素血症，慢性高胰岛素血症对肝脏合成PAI-1的刺激作用导 致血浆PAI-1升高。据报道[3，4]，PAI-1合成的增加是在mRNA水平，PAI-1增 加伴随PAI-1mRNA同步增加，且胰岛素对PAI-1的作用具特异性。Hep G2细胞存在胰岛素受 体缺陷，能模拟体内胰岛素抵抗状态，是研究高胰岛素血症调节PAI-1合成的理想模型。胰 岛素可介导HepG2 PAI-1 mRNA过度表达，二甲双胍可改善胰岛素抵抗，对胰岛素介导的PAI -1 mRNA过度表达有明显抑制作用。临床研究显示糖尿病病人血浆胰岛素水平与PAI水平呈 正相关[5]，高胰岛素血症及高PAI-1水平是大血管病如冠心病、外周血管病的危 险因素。
附表 Hep G2培养基及细胞提取液PAI-1活性变化
对照组
胰岛素浓度(10-9mol/L)
, 百拇医药
0
0.6
1.2
2. 5
5
10
例数
6
6
6
6
6
6
培养基PAI-1(aU/ml)
, 百拇医药
提取液PAI-1(aU/ml)
26.2±2.9
31.1±5.2
36.3±2.6*
49.7±4.2*
41.35±3.0*
51.9±4.2*
42.1±3.1 *
50.5±5.1*
45.4±2.9**
, http://www.100md.com
58.6±7.5* *
43.2±3.5*
58.8±7.6**
与对照组比较 * P<0.01，** P<0.001
浙江省卫生厅优秀青年人才基金资助课题
参 考 文 献
1，潘建新综述.血浆纤溶酶原激活剂抑制物与糖尿病.国外医学内科分册 ，1996，23：104.
2，Juhan-Vague L,Alessi MC,Vague P.Increased plasma plasminogen activator inhib itor l levels:a possible link between insulin resistance and atherothrombosis.Di abetologia,1991,34:457.
, 百拇医药
3，Samad F,Loskutoff DJ.Tissue distribution and regulaton of plasminogen activato r inhibitor-l in obese mice.Mol Med，1996,2:568.
4，Juhan-Vague L,Alessi MC.Plasminogen activator inhibitor l and atherothrombos es.Thromhosis and haemostasis.1993,70:138.
5，潘建新，俞 华，朱禧星，等.NIDDM病人血浆组织型纤溶酶原激活剂抑制物活性水平的 临床观察.中国糖尿病杂志.1996，4：231.
收稿：1999-09-13
修回：2000-04-10, http://www.100md.com
关键词：
摘要：
中国糖尿病杂志000420 血浆纤溶酶原激活剂抑制物(PAI-1)活性水平升高可出现在冠心 病、外周血管栓塞、手术后等情况，PAI活性升高可预测心肌梗塞的复发。PAI-1是血浆中t PA的主要生理抑制剂，由内皮细胞、肝细胞合成[1]。近年研究显示血浆胰岛素水 平与PAI水平相关。本实验观察胰岛素对体外培养肝癌细胞系Hep G2合成PAI的作用，报道如 下。
材料与方法
人Hep G2细胞：由第二军医大学肝胆外科研究所提供。人胰岛素：由Novo Nordisk提供。He p G2细胞培养基：DMEM，含10%加热灭活小牛血清。培养细胞在9.6cm2多孔培养板中长成 单层汇合，而后更换成含1%小牛血清培养基，并加入不同浓度胰岛素，经24小时培养后，将 细胞培养液离心，取上清液置-20℃保存待测。
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细胞提取液制备：培养的单层细胞与1ml 0.5% Triton×100在室温培育1小时，置-20℃保存 待测。
PAI-1活性采用发色底物显色法测定。
统计分析：采用Student’s t检验，数据以
±s表示。结 果
观察到Hep G2培养基及细胞提取液受胰岛素刺激后，PAI-1活性增强，与对照组比较，最大 值增加近2倍，见附表。
讨 论
血浆PAI-1来自内皮细胞、肝细胞、血小板。本研究观察到胰岛素对Hep G2细胞合成PAI-1 具有刺激作用，胰岛素浓度为(0.6～10)×10-9mol/L范围，此浓度与大鼠餐后门静脉 血浆胰岛素浓度接近[2]。
, 百拇医药
肥胖及2型糖尿病多存在高胰岛素血症，慢性高胰岛素血症对肝脏合成PAI-1的刺激作用导 致血浆PAI-1升高。据报道[3，4]，PAI-1合成的增加是在mRNA水平，PAI-1增 加伴随PAI-1mRNA同步增加，且胰岛素对PAI-1的作用具特异性。Hep G2细胞存在胰岛素受 体缺陷，能模拟体内胰岛素抵抗状态，是研究高胰岛素血症调节PAI-1合成的理想模型。胰 岛素可介导HepG2 PAI-1 mRNA过度表达，二甲双胍可改善胰岛素抵抗，对胰岛素介导的PAI -1 mRNA过度表达有明显抑制作用。临床研究显示糖尿病病人血浆胰岛素水平与PAI水平呈 正相关[5]，高胰岛素血症及高PAI-1水平是大血管病如冠心病、外周血管病的危 险因素。
附表 Hep G2培养基及细胞提取液PAI-1活性变化
对照组
胰岛素浓度(10-9mol/L)
, 百拇医药
0
0.6
1.2
2. 5
5
10
例数
6
6
6
6
6
6
培养基PAI-1(aU/ml)
, 百拇医药
提取液PAI-1(aU/ml)
26.2±2.9
31.1±5.2
36.3±2.6*
49.7±4.2*
41.35±3.0*
51.9±4.2*
42.1±3.1 *
50.5±5.1*
45.4±2.9**
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58.6±7.5* *
43.2±3.5*
58.8±7.6**
与对照组比较 * P<0.01，** P<0.001
浙江省卫生厅优秀青年人才基金资助课题
参 考 文 献
1，潘建新综述.血浆纤溶酶原激活剂抑制物与糖尿病.国外医学内科分册 ，1996，23：104.
2，Juhan-Vague L,Alessi MC,Vague P.Increased plasma plasminogen activator inhib itor l levels:a possible link between insulin resistance and atherothrombosis.Di abetologia,1991,34:457.
, 百拇医药
3，Samad F,Loskutoff DJ.Tissue distribution and regulaton of plasminogen activato r inhibitor-l in obese mice.Mol Med，1996,2:568.
4，Juhan-Vague L,Alessi MC.Plasminogen activator inhibitor l and atherothrombos es.Thromhosis and haemostasis.1993,70:138.
5，潘建新，俞 华，朱禧星，等.NIDDM病人血浆组织型纤溶酶原激活剂抑制物活性水平的 临床观察.中国糖尿病杂志.1996，4：231.
收稿：1999-09-13
修回：2000-04-10, http://www.100md.com