阿米洛利与依那普利对大鼠左室压力负荷致心肌肥厚与血小板聚集率的影响
作者：盛燕辉 陆凤翔 季勇 饶曼人
单位：盛燕辉(210029 南京医科大学第一附属医院)； 陆凤翔(210029 南京医科大学第一附属医院)； 季勇(南京医科大学)； 饶曼人(南京医科大学)
关键词：阿米洛利；依那普利；左室肥厚；血小板聚集率
江苏医药000409 摘 要：目的 观察钠氢交换抑制剂阿米洛利与血管紧张素转换酶抑制剂依那普利预防大鼠腹主动脉部分缩窄致左室肥厚作用和对血小板聚集率的影响。方法 (1)建立大鼠腹主动脉部分缩窄致左室肥厚模型。(2)观察阿米洛利与依那普利对大鼠左室肥厚和血小板聚集率的影响。结果 (1)大鼠腹主动脉部分缩窄后，左心室重量与体重的比值，血小板聚集率均高于正常对照组。(2)在肥厚形成前，预防性给予阿米洛利与依那普利，连续4周，可显著降低左心室重量与体重的比值，抑制血小板聚集率。结论 阿米洛利与依那普利均可预防大鼠腹主动脉部分缩窄后左室肥厚的形成，抑制血小板聚集率。
, 百拇医药
阿米洛利(Amiloride，Ami)为一保钾利尿剂，具有Na-H交换抑制作用。研究表明Ami在心血管系统中具有保护缺血重灌损伤、抗心律失常[1]、抑制血小板聚集的作用[2]，还能抑制结扎大鼠心脏冠状动脉左前降支后的左室重构。依那普利(Enalapril，Ena)为一种不含巯基的血管紧张素转换酶抑制剂，临床上广泛用于抗高血压病，有降压、预防和逆转左室肥厚作用，并可抑制二肾一夹肾性高血压左室肥厚大鼠的血小板聚集。但Ami对大鼠压力超负荷心肌肥厚以及血小板聚集率的影响未见报道。本研究观察了Ami与Ena预防压力超负荷左室肥厚的形成以及对血小板聚集率的影响。
材料和方法
一、药物
Ami、腺苷二磷酸钠(ADP)购自Sigma公司，Ena由常州制药厂提供，凝血酶(Thr)由珠海生物制品公司生产，其它试剂为市售分析纯。
, 百拇医药
二、方法
1.大鼠心肌肥厚模型建立：成年雄性Sprague-Dawley大鼠共24只，体重212±17 g，由中国药科大学动物中心提供。按文献[3]方法：大鼠行腹正中切口，分离肾动脉上方约1 cm长腹主动脉，用7号针头紧贴腹主动脉，平行放置，并将二者一起结扎，然后抽出针头，即使腹主动脉部分狭窄。假手术组仅分开腹主动脉，但不予结扎，术后大鼠给予青霉素5万单位，连续一周，预防感染。术后3～5天大鼠心肌即开始肥厚，术后2～3周达到稳定。
2.实验分组：共分4组(每组6只)。Ami预防组，大鼠术后第2周起灌服Ami(5 mg*kg-1*d-1)，连续4周；Ena预防组，大鼠术后第2周起灌服Ena(6 mg*kg-1*d-1)，连续4周；假手术对照组与左心室肥厚对照组(LVH组)从术后第2周起，灌服同体积蒸馏水，连续4周。
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3.血小板聚集率测定：从颈总动脉放血，加3.8%枸椽酸钠(1∶9)抗凝，离心两次，分离出富血小板血浆(PRP)与贫血小板血浆(PPP)。按比浊法[4]，用TYXN-91智能血小板聚集仪，测定血小板聚集反应。诱导剂为Thr和ADP，终浓度分别4 U/ml，4 μmol/L。
4.左心室称重：从颈总动脉取血完毕后，开胸取出心脏，剪去大血管，心房、右心室，吸干水分，分别称左、右心室重量，计算左室重和右室重与体重的比值。
5.统计学方法：将整理后数据输入计算机，用SPSS for WIN95统计软件行t检验。
结 果
一、Ami和Ena对压力超负荷大鼠心肌肥厚的影响
LVH组大鼠左室重量与体重的比值(LVWW/BW)较假手术对照组LVWW/BW增加了31.7%(P<0.01)；而右室重量与体重的比值(RVWW/BW)各组之间均无差异。结果显示：部分缩窄大鼠腹主动脉可形成明显的心肌肥厚，且以左室肥厚为主。Ami预防组和Ena预防组的LVWW/BW与相应的LVH对照组相比，分别下降了18.8%和24.3%(P<0.01)，表明Ami和Ena均可预防大鼠腹主动脉部分缩窄后的心肌肥厚的形成。Ami组的作用和Ena组的作用相近(P>0.05)，且LVWW/BW比值与假手术组无差异。结果见表1。
, 百拇医药
二、Ami和Ena对血小板聚集率的影响
对ADP和Thr诱导的血小板聚集，LVH组大鼠ADP和Thr诱导的血小板聚集率与相应的假手术组相比，分别增加了37.7%和35.7%(P<0.01)，表明部分缩窄腹主动脉心肌肥厚大鼠，其血小板聚集率有明显增加。Ami预防组ADP和Thr诱导的血小板聚集率与LVH组相比，分别下降了15.7%和16.1%；Ena预防组ADP和Thr诱导的血小板聚集率与LVH组相比，下降了23.8%和28.0%。表明Ami和Ena预防性给药均能抑制大鼠压力超负荷心肌肥厚时的血小板聚集率。Ami和Ena作用相近，(P>0.05)。结果见表2。
表1 阿米洛利与依那普利对腹主动脉部分缩窄大鼠(均n＝6)心室湿重的影响(
±s)
假手术组
, 百拇医药
LVH组
Ami组
Ena组
LVWW/BW(g/kg)
2.87±0.07
3.78±0.25**
3.07±0.26＃＃
2.86±0.08＃＃
RVWW/BW(g/kg)
1.31±0.04
1.34±0.07
, 百拇医药
1.30±0.12
1.34±0.05
与假手术组比，**P<0.01；与LVH组比，＃＃P<0.01表2 阿米洛利与依那普利对腹主动脉部分缩窄大鼠(均n＝6)血小板聚集率的影响(±s)
假手术组
LVH组
Ami组
Ena组
ADP(%)
67.3±6.0
87.5±3.6**
, 百拇医药
75.6±3.5＃＃
70.7±4.2＃＃
Thr(%)
76.1±4.1
92.0±5.8**
81.3±6.9＃
77.9±4.1＃＃
与假手术组比，**P<0.01；与LVH组比＃P<0.05，＃＃P<0.01讨 论
左室肥厚是心脏对压力负荷过重及神经体液因子的一种应答反应，它包括心肌细胞的肥大和心肌间质细胞的增殖两个基本过程。本实验采用部分缩窄大鼠腹主动脉形成压力超负荷心肌肥厚模型，术后大鼠左心室湿重/体重比值较假手术组明显增加，而右心室湿重/体重比值则变化不大，表明此模型所形成的肥厚以左心室肥厚为主，与文献报道相一致[3]。在尚未形成心肌肥厚之前，预防性给予Ami和Ena可防止左室肥厚形成，其左心室湿重/体重已接近假手术对照组。这一结果表明，Ami和Ena可以预防大鼠压力超负荷心肌肥厚的形成。其作用机理可能是：由于心肌肥厚时心血管组织细胞内Ca2+浓度增加[5]，而Ca2+作为细胞内信息传递的关键物质，参与多种致肥厚因子如Ang-Ⅱ等所致的左室肥厚。Ami可抑制Na-H交换，间接抑制Na+-Ca2+交换，以及阻断L-型Ca2+通道[6]，而减轻细胞内Ca2+超载。Ena降低血液和心肌中的Ang-Ⅱ含量，其长期给药可以抑制电压依赖性Ca2+通道，减少病理况状下的Ca2+内流[7]，降低细胞内Ca2+浓度，达到预防大鼠压力超负荷心肌肥厚的形成。
, 百拇医药
部分缩窄腹主动脉大鼠由ADP和Thr诱导的血小板聚集率明显高于假手术对照组。在尚未形成肥厚前，预防性给予Ami和Ena，与LVH组相比，可显著降低血小板聚集率。两药作用机理可能是(1)减弱了左室肥厚。(2)高血压和/或左室肥厚时，血小板内Na-H交换活性增加[8]，胞内游离pH值下降，Ca2+浓度增加，而Ca2+是参与血小板聚集的中心第二信使[9]，Ami和Ena通过抑制血小板内Na-H交换和Ca2+内流，使血小板内Ca2+浓度下降，抑制了血小板聚集。
钠氢交换抑制剂Ami和血管紧张素转换酶抑制剂Ena均有预防左室压力超负荷所致心肌肥厚的作用，并抑制血小板聚集率，为临床高血压单一或联合应用上述药物提供了依据。
参考文献：
1，Dennis SC，Coetzee WA，Cragoe EJ，et al.Effects of proton buffering and of amiloride derivatives on reperfusion arrhythmias in isolated rat heart.Cir Res，1990，66：1156-1159.
, 百拇医药
2，Borin M，Pinelis VG，Azizova OA，et al.Na+-H+ exchange in PAF-stimulate platelets.J Lipid Med，1989，1：257-272.
3，Desjarding S，Mueller RW，Cauchy MJ，et al.A pressure overloud model of congestive heart failure in rats.Gardiovasc Res，1988，22：696-702.
4，Born GVR.Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal.Nature，1962，194：927.
5，Inoue I，Matsuura H，Shinggu T，et al.Role of intracellullar cation abnormalities in development of left ventricular hypertrophy.J Cardiovasc pharmocol，1991，17(supple 2)：S107-109.
, 百拇医药
6，Garcia ML，King VF，Shevell JL，et al.Amiloride anologs inhibit L-type calcium channels and display calcium entry blocker activity.J Bio Chem，1990，265：3763-3771.
7，Pahor M，Gambassi G，Carbonin P，et al.Antiarrhythmic effects of ACE inhibitors：a matter of faith or reality.Cardiovasc Res，1994，28：173-182.
8，Astarie C，Levenson J，Simon A et al.Platelet cytosolic proton and free calcium concentrations in essential hypertension. J hypertens，1989，7：485-491.
9，喻晶.血小板中的信息转导系统.国外医学生理病理科学临床分册，1996，16：212-214.
收稿日期：1999-06-15
修稿日期：1999-09-10, http://www.100md.com
单位：盛燕辉(210029 南京医科大学第一附属医院)； 陆凤翔(210029 南京医科大学第一附属医院)； 季勇(南京医科大学)； 饶曼人(南京医科大学)
关键词：阿米洛利；依那普利；左室肥厚；血小板聚集率
江苏医药000409 摘 要：目的 观察钠氢交换抑制剂阿米洛利与血管紧张素转换酶抑制剂依那普利预防大鼠腹主动脉部分缩窄致左室肥厚作用和对血小板聚集率的影响。方法 (1)建立大鼠腹主动脉部分缩窄致左室肥厚模型。(2)观察阿米洛利与依那普利对大鼠左室肥厚和血小板聚集率的影响。结果 (1)大鼠腹主动脉部分缩窄后，左心室重量与体重的比值，血小板聚集率均高于正常对照组。(2)在肥厚形成前，预防性给予阿米洛利与依那普利，连续4周，可显著降低左心室重量与体重的比值，抑制血小板聚集率。结论 阿米洛利与依那普利均可预防大鼠腹主动脉部分缩窄后左室肥厚的形成，抑制血小板聚集率。
, 百拇医药
阿米洛利(Amiloride，Ami)为一保钾利尿剂，具有Na-H交换抑制作用。研究表明Ami在心血管系统中具有保护缺血重灌损伤、抗心律失常[1]、抑制血小板聚集的作用[2]，还能抑制结扎大鼠心脏冠状动脉左前降支后的左室重构。依那普利(Enalapril，Ena)为一种不含巯基的血管紧张素转换酶抑制剂，临床上广泛用于抗高血压病，有降压、预防和逆转左室肥厚作用，并可抑制二肾一夹肾性高血压左室肥厚大鼠的血小板聚集。但Ami对大鼠压力超负荷心肌肥厚以及血小板聚集率的影响未见报道。本研究观察了Ami与Ena预防压力超负荷左室肥厚的形成以及对血小板聚集率的影响。
材料和方法
一、药物
Ami、腺苷二磷酸钠(ADP)购自Sigma公司，Ena由常州制药厂提供，凝血酶(Thr)由珠海生物制品公司生产，其它试剂为市售分析纯。
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二、方法
1.大鼠心肌肥厚模型建立：成年雄性Sprague-Dawley大鼠共24只，体重212±17 g，由中国药科大学动物中心提供。按文献[3]方法：大鼠行腹正中切口，分离肾动脉上方约1 cm长腹主动脉，用7号针头紧贴腹主动脉，平行放置，并将二者一起结扎，然后抽出针头，即使腹主动脉部分狭窄。假手术组仅分开腹主动脉，但不予结扎，术后大鼠给予青霉素5万单位，连续一周，预防感染。术后3～5天大鼠心肌即开始肥厚，术后2～3周达到稳定。
2.实验分组：共分4组(每组6只)。Ami预防组，大鼠术后第2周起灌服Ami(5 mg*kg-1*d-1)，连续4周；Ena预防组，大鼠术后第2周起灌服Ena(6 mg*kg-1*d-1)，连续4周；假手术对照组与左心室肥厚对照组(LVH组)从术后第2周起，灌服同体积蒸馏水，连续4周。
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3.血小板聚集率测定：从颈总动脉放血，加3.8%枸椽酸钠(1∶9)抗凝，离心两次，分离出富血小板血浆(PRP)与贫血小板血浆(PPP)。按比浊法[4]，用TYXN-91智能血小板聚集仪，测定血小板聚集反应。诱导剂为Thr和ADP，终浓度分别4 U/ml，4 μmol/L。
4.左心室称重：从颈总动脉取血完毕后，开胸取出心脏，剪去大血管，心房、右心室，吸干水分，分别称左、右心室重量，计算左室重和右室重与体重的比值。
5.统计学方法：将整理后数据输入计算机，用SPSS for WIN95统计软件行t检验。
结 果
一、Ami和Ena对压力超负荷大鼠心肌肥厚的影响
LVH组大鼠左室重量与体重的比值(LVWW/BW)较假手术对照组LVWW/BW增加了31.7%(P<0.01)；而右室重量与体重的比值(RVWW/BW)各组之间均无差异。结果显示：部分缩窄大鼠腹主动脉可形成明显的心肌肥厚，且以左室肥厚为主。Ami预防组和Ena预防组的LVWW/BW与相应的LVH对照组相比，分别下降了18.8%和24.3%(P<0.01)，表明Ami和Ena均可预防大鼠腹主动脉部分缩窄后的心肌肥厚的形成。Ami组的作用和Ena组的作用相近(P>0.05)，且LVWW/BW比值与假手术组无差异。结果见表1。
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二、Ami和Ena对血小板聚集率的影响
对ADP和Thr诱导的血小板聚集，LVH组大鼠ADP和Thr诱导的血小板聚集率与相应的假手术组相比，分别增加了37.7%和35.7%(P<0.01)，表明部分缩窄腹主动脉心肌肥厚大鼠，其血小板聚集率有明显增加。Ami预防组ADP和Thr诱导的血小板聚集率与LVH组相比，分别下降了15.7%和16.1%；Ena预防组ADP和Thr诱导的血小板聚集率与LVH组相比，下降了23.8%和28.0%。表明Ami和Ena预防性给药均能抑制大鼠压力超负荷心肌肥厚时的血小板聚集率。Ami和Ena作用相近，(P>0.05)。结果见表2。
表1 阿米洛利与依那普利对腹主动脉部分缩窄大鼠(均n＝6)心室湿重的影响(
±s)假手术组
, 百拇医药
LVH组
Ami组
Ena组
LVWW/BW(g/kg)
2.87±0.07
3.78±0.25**
3.07±0.26＃＃
2.86±0.08＃＃
RVWW/BW(g/kg)
1.31±0.04
1.34±0.07
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1.30±0.12
1.34±0.05
与假手术组比，**P<0.01；与LVH组比，＃＃P<0.01表2 阿米洛利与依那普利对腹主动脉部分缩窄大鼠(均n＝6)血小板聚集率的影响(
±s)假手术组
LVH组
Ami组
Ena组
ADP(%)
67.3±6.0
87.5±3.6**
, 百拇医药
75.6±3.5＃＃
70.7±4.2＃＃
Thr(%)
76.1±4.1
92.0±5.8**
81.3±6.9＃
77.9±4.1＃＃
与假手术组比，**P<0.01；与LVH组比＃P<0.05，＃＃P<0.01讨 论
左室肥厚是心脏对压力负荷过重及神经体液因子的一种应答反应，它包括心肌细胞的肥大和心肌间质细胞的增殖两个基本过程。本实验采用部分缩窄大鼠腹主动脉形成压力超负荷心肌肥厚模型，术后大鼠左心室湿重/体重比值较假手术组明显增加，而右心室湿重/体重比值则变化不大，表明此模型所形成的肥厚以左心室肥厚为主，与文献报道相一致[3]。在尚未形成心肌肥厚之前，预防性给予Ami和Ena可防止左室肥厚形成，其左心室湿重/体重已接近假手术对照组。这一结果表明，Ami和Ena可以预防大鼠压力超负荷心肌肥厚的形成。其作用机理可能是：由于心肌肥厚时心血管组织细胞内Ca2+浓度增加[5]，而Ca2+作为细胞内信息传递的关键物质，参与多种致肥厚因子如Ang-Ⅱ等所致的左室肥厚。Ami可抑制Na-H交换，间接抑制Na+-Ca2+交换，以及阻断L-型Ca2+通道[6]，而减轻细胞内Ca2+超载。Ena降低血液和心肌中的Ang-Ⅱ含量，其长期给药可以抑制电压依赖性Ca2+通道，减少病理况状下的Ca2+内流[7]，降低细胞内Ca2+浓度，达到预防大鼠压力超负荷心肌肥厚的形成。
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部分缩窄腹主动脉大鼠由ADP和Thr诱导的血小板聚集率明显高于假手术对照组。在尚未形成肥厚前，预防性给予Ami和Ena，与LVH组相比，可显著降低血小板聚集率。两药作用机理可能是(1)减弱了左室肥厚。(2)高血压和/或左室肥厚时，血小板内Na-H交换活性增加[8]，胞内游离pH值下降，Ca2+浓度增加，而Ca2+是参与血小板聚集的中心第二信使[9]，Ami和Ena通过抑制血小板内Na-H交换和Ca2+内流，使血小板内Ca2+浓度下降，抑制了血小板聚集。
钠氢交换抑制剂Ami和血管紧张素转换酶抑制剂Ena均有预防左室压力超负荷所致心肌肥厚的作用，并抑制血小板聚集率，为临床高血压单一或联合应用上述药物提供了依据。
参考文献：
1，Dennis SC，Coetzee WA，Cragoe EJ，et al.Effects of proton buffering and of amiloride derivatives on reperfusion arrhythmias in isolated rat heart.Cir Res，1990，66：1156-1159.
, 百拇医药
2，Borin M，Pinelis VG，Azizova OA，et al.Na+-H+ exchange in PAF-stimulate platelets.J Lipid Med，1989，1：257-272.
3，Desjarding S，Mueller RW，Cauchy MJ，et al.A pressure overloud model of congestive heart failure in rats.Gardiovasc Res，1988，22：696-702.
4，Born GVR.Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal.Nature，1962，194：927.
5，Inoue I，Matsuura H，Shinggu T，et al.Role of intracellullar cation abnormalities in development of left ventricular hypertrophy.J Cardiovasc pharmocol，1991，17(supple 2)：S107-109.
, 百拇医药
6，Garcia ML，King VF，Shevell JL，et al.Amiloride anologs inhibit L-type calcium channels and display calcium entry blocker activity.J Bio Chem，1990，265：3763-3771.
7，Pahor M，Gambassi G，Carbonin P，et al.Antiarrhythmic effects of ACE inhibitors：a matter of faith or reality.Cardiovasc Res，1994，28：173-182.
8，Astarie C，Levenson J，Simon A et al.Platelet cytosolic proton and free calcium concentrations in essential hypertension. J hypertens，1989，7：485-491.
9，喻晶.血小板中的信息转导系统.国外医学生理病理科学临床分册，1996，16：212-214.
收稿日期：1999-06-15
修稿日期：1999-09-10, http://www.100md.com