睡眠呼吸暂停综合征患者T细胞、NK细胞功能的研究
作者：卢红霞 宋静 侯桂华 石文转
单位：卢红霞(卫生部耳鼻喉科学重点实验室，250012)；宋静(山东医科大学微生物学教研室)；侯桂华(卫生部耳鼻喉科学重点实验室，250012)；石文转(卫生部耳鼻喉科学重点实验室，250012)
关键词：睡眠呼吸暂停综合征；免疫活性；细胞表型
山东医大基础医学院学报000401 摘要：目的:检测睡眠呼吸暂停综合征(SAS)患者外周血T 淋巴细胞、NK细胞的变化，探讨SAS对细胞免疫 功能的影响。方法:应用APAAP桥联酶标法测定外周血淋巴细胞表型。结果:SAS患者组CD3+细胞与正常对照组差异无显著性(P>0.05)[ WTBZ〗,CD4+、CD4+/CD8+、CD16+、CD25+细胞SAS组均低于正常对照组,而CD8+ 细胞高于正常对照组(P<0.05,P<0.01)。结论:SAS 患者免疫功能明显降低。
, 百拇医药
中图分类号：R 766.5 文献标识码：A
文章编号：1008-8202(2000)04-0193-02
Function of Tcelland NK cell in sleep apnea syndromes (SAS)
Lu Hongxia Hou Guihua,et al
(The State Otolaryngology Institute of P.R.China,250012)
Song Jing
(Dept.of Microbiology,Shandong Medical University)
, 百拇医药 Abstract：Objective:To evaluate the changes of peripheral blood Tlymphocytes and NK cell in SAS,to explore the effect on cellular immune function of ASA.Method: T he phenotypes of peripheral blood T lymphocytes were measured by APAAP.Result:There was no significant difference for CD3+ cell in SAS group and in the normal group(P>0.05).The levels of CD4+,CD4+/CD8+,CD16 +,CD25+ were lower in SAS group than that in normal group,but the level of C D8+ was higher than that in normal group (P<0.05,P<0.01).Conclusion:Immunologic function of patients with SAS is obviously lowered.
, 百拇医药
Key words：Sleep apnea syndromes;Immunocompetence;Cellular phenotype
SAS患者由于长期慢性缺氧可以引起多系统、多 器官的慢性损伤[1],但是，对人体免疫系统的影响尚未引起高度重视。我们对56 例SAS患者及30例同龄组正常人外周血的T淋巴细胞,NK细胞的表型进行了检测分析,以探讨SA S对患者细胞免疫功能的影响及在致病、病程和预后中的作用。
1 资料与方法
1.1 临床资料 56例SAS患者系经本实验室睡眠检测后确诊者。取早晨空腹静 脉血,肝素防凝,分离单个核细胞。正常对照组选自经健康查体,确诊无心、肺、肝、肾等疾 病者,采血方法同上。两组均为男性,SAS组患者30～60岁,平均45岁,正常对照组28～59岁, 平均44岁。
, 百拇医药 1.2 试剂 外周血T细胞亚群检测试剂盒及CD3+/CD4+/CD8+/CD25+/ CD16 +单克隆抗体 由北京中山生物技术有限公司提供。淋巴细胞分离液由上海试剂二厂提供。
1.3 方法 分离单个核细胞，取静脉血2ml,肝素防凝,用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,用PBS洗涤2次 后留取沉淀,涂片,吹干备用。单个核细胞的化学染色:在已标好的细胞片上分别滴加鼠抗人 CD3+、CD4+、CD8+、CD25+、CD16+单抗,37℃30min,PBS洗3次,吹干。滴加生物素 标记的抗鼠IgG适量,37℃30min,PBS洗3次,吹干。滴加碱性磷酸酶标记的链酶卵白素适量,37 ℃45min，PBS洗3次,吹干。加显色剂,室温20～40min,PBS冲洗。以上反应均在湿盒中进行, 加苏木素核染液,30s,水冲洗,吹干,封片,油镜计数淋巴细胞200个,计算阳性率(%)。
, 百拇医药
1.4 统计学方法 采用t检验,计算P值。
2 结 果
2.1 T细胞亚群的变化 检测标本中T淋巴细胞亚群的水平,SAS患者组与 正常对照组比较,除CD 3+外,其余指标都有明显差异(P<0.05,P<0.01)。CD4+、CD4+/C D8+ SAS患者组明显低于正常组,CD8+则明显高于正常组,见表1。
表1 SAS组与对照组T淋巴细胞亚群的比较(x±s ) 组别
n
CD3+
CD4+
, 百拇医药
CD8+
CD4+/CD8+
SAS组
正常对照组
P值
56
30
62.63±3.40
65.52±5.41
>0.05
40.72 ±6.12
45.21±4.52
, http://www.100md.com
<0.05
31.57±5.68
25.87±6.01
<0.01
1.30±0.27
1 .75±0.35
<0.05
2.2 T活化状态和NK细胞活 性的改变 见表2。表2 SAS组和正常对照组活化T细胞
和NK细胞阳 性率的比较(x±s) 组别
n
CD16+
, 百拇医药
CD25+
SAS组
56
20.23±4.87
22.03±3.05
正常对照组
30
27.50±5.21
29.21±2.05
P值
<0 .01
<0.01
, http://www.100md.com
由表2可见,SAS患者 外周血中,活化T细胞的比例(CD25+)明显降低,由29.21%降至22.03%,NK细胞(CD16+)也 明显减少(P<0.01)。
3 讨 论
T细胞是重 要的免疫活性细胞,除 直接介导 细胞免疫功能外,对机体免疫应答的调节起关键作用,其表面有多种膜分子[6],是 该细胞识别抗原,与其他免疫细胞相互作用接受信号刺激等的分子基础,也是其亚群分类的基 础。其中CD3+分布于成熟T细胞的表面,CD4+和CD8+分别与MHC Ⅰ、Ⅱ类分子结合增 强淋巴细胞与APC或其他靶细胞的结合,与刺激信号的传导有关。CD4+主要代表辅助性细胞 ,CD8+主要代表抑制性细胞。CD25+是IL-2受体,T细胞只有在活化时才表达该受体。CD1 6+是NK细胞的标志。这些细胞在机体免疫反应中起着重要的作用,其数量及相互关系时反 映着机体细胞免疫水平及免疫调节状态。当不同淋巴细胞或其亚群的数量和功能发生异常时 ,就可导致机体的免疫紊乱,并发生一系列的病理生理变化。
, http://www.100md.com
本研究通过对SAS患者外 周 血T淋巴细胞亚群,NK细胞的测定,提示SAS患者外周血中CD3+数量与正常对照无显著变化, 但CD8 +明显高于对照组,而CD4+、CD4+/CD8+均低于正常组。CD8+升高,CD4+降低,可 使具有外周血成熟T淋巴细胞共同标志的CD3+无明显变化。CD4+降低和CD8+升高表 明SAS患者的免疫功能明显下降。CD25+的表达是辅助性T淋巴细胞活化和细胞免疫反应启 动的重要标志[4],SAS患者的CD25+细胞明显减少表明其T细胞不仅数量减少,功 能也有明显损害,CD16+(NK细胞)减少说明SAS患者的非特异免疫功能也明显降低。SAS 病因有多种,对人体的损伤也是多方面的。SAS患者的主要症状是上呼吸道阻塞,充血,水 肿,体内长期慢性缺氧,长期的鼾声刺激,使上呼吸道防御功能降低,体内白细胞升高(本实验 室检测表明,20%的患者体内白细胞数大于10×109/L)。长期的慢性缺氧,局部病理损 伤可明显影响机体免疫功能。可能由于SAS患者非特异免疫功能降低,使机体易受细菌、病毒 等病原微生物的侵害,造成体内经常处于感染状态,最终使机体细胞免疫紊乱,罹患其他疾病 的机会增多。本研究结果证实,SAS患者机体的细胞免疫功能及非特异免疫功能均受到明显影响,功能明显降低,由此可能诱发其他并发症,值得临床重视并进行深入研究。
, http://www.100md.com
作者简介：卢红霞(1963—)女，山东章丘人，卫生部耳鼻喉科学重点实验室 ，主管技师，主要从事耳鼻喉科疾病的病理学研究。
参考文献
1，慈书平,江时森.睡眠呼吸暂停 与多 系统器官损害研究进展 [J] .中华结核和呼吸杂志,1997,20(1):39-41
2，费瑜,陈丽娟.老年高血压患者外周血T淋巴细胞亚群及红细胞免疫功能的临床研究 [J ] .临床心血管病杂志,1998,14(1):32-33
3，吴静,徐锦堂.异体角膜上皮细 胞 诱导外周血T淋巴细胞CD69+和CD25+表达 [J] .眼科研究,1998,16(3):171-172
4，Russel SM,Keegan AD,Haracla N,et al.Interleukin-2 receptor gamma obtain: A functional component of the interleukin-4 receptor [J] .Science,1993,262(514 1)：1880
5，吴镇风,王铁君.大剂量胸腺肽对肿瘤放疗病人T细胞亚群的影响 [ J]，.中 国免疫学杂志,1998,14(6):438-439
6，金泊朱主编.细胞和分子免疫学 [M] .西安: 世界图书出版公司,1995.4-25
收稿日期：2000-04-29, 百拇医药
单位：卢红霞(卫生部耳鼻喉科学重点实验室，250012)；宋静(山东医科大学微生物学教研室)；侯桂华(卫生部耳鼻喉科学重点实验室，250012)；石文转(卫生部耳鼻喉科学重点实验室，250012)
关键词：睡眠呼吸暂停综合征；免疫活性；细胞表型
山东医大基础医学院学报000401 摘要：目的:检测睡眠呼吸暂停综合征(SAS)患者外周血T 淋巴细胞、NK细胞的变化，探讨SAS对细胞免疫 功能的影响。方法:应用APAAP桥联酶标法测定外周血淋巴细胞表型。结果:SAS患者组CD3+细胞与正常对照组差异无显著性(P>0.05)[ WTBZ〗,CD4+、CD4+/CD8+、CD16+、CD25+细胞SAS组均低于正常对照组,而CD8+ 细胞高于正常对照组(P<0.05,P<0.01)。结论:SAS 患者免疫功能明显降低。
, 百拇医药
中图分类号：R 766.5 文献标识码：A
文章编号：1008-8202(2000)04-0193-02
Function of Tcelland NK cell in sleep apnea syndromes (SAS)
Lu Hongxia Hou Guihua,et al
(The State Otolaryngology Institute of P.R.China,250012)
Song Jing
(Dept.of Microbiology,Shandong Medical University)
, 百拇医药 Abstract：Objective:To evaluate the changes of peripheral blood Tlymphocytes and NK cell in SAS,to explore the effect on cellular immune function of ASA.Method: T he phenotypes of peripheral blood T lymphocytes were measured by APAAP.Result:There was no significant difference for CD3+ cell in SAS group and in the normal group(P>0.05).The levels of CD4+,CD4+/CD8+,CD16 +,CD25+ were lower in SAS group than that in normal group,but the level of C D8+ was higher than that in normal group (P<0.05,P<0.01).Conclusion:Immunologic function of patients with SAS is obviously lowered.
, 百拇医药
Key words：Sleep apnea syndromes;Immunocompetence;Cellular phenotype
SAS患者由于长期慢性缺氧可以引起多系统、多 器官的慢性损伤[1],但是，对人体免疫系统的影响尚未引起高度重视。我们对56 例SAS患者及30例同龄组正常人外周血的T淋巴细胞,NK细胞的表型进行了检测分析,以探讨SA S对患者细胞免疫功能的影响及在致病、病程和预后中的作用。
1 资料与方法
1.1 临床资料 56例SAS患者系经本实验室睡眠检测后确诊者。取早晨空腹静 脉血,肝素防凝,分离单个核细胞。正常对照组选自经健康查体,确诊无心、肺、肝、肾等疾 病者,采血方法同上。两组均为男性,SAS组患者30～60岁,平均45岁,正常对照组28～59岁, 平均44岁。
, 百拇医药 1.2 试剂 外周血T细胞亚群检测试剂盒及CD3+/CD4+/CD8+/CD25+/ CD16 +单克隆抗体 由北京中山生物技术有限公司提供。淋巴细胞分离液由上海试剂二厂提供。
1.3 方法 分离单个核细胞，取静脉血2ml,肝素防凝,用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,用PBS洗涤2次 后留取沉淀,涂片,吹干备用。单个核细胞的化学染色:在已标好的细胞片上分别滴加鼠抗人 CD3+、CD4+、CD8+、CD25+、CD16+单抗,37℃30min,PBS洗3次,吹干。滴加生物素 标记的抗鼠IgG适量,37℃30min,PBS洗3次,吹干。滴加碱性磷酸酶标记的链酶卵白素适量,37 ℃45min，PBS洗3次,吹干。加显色剂,室温20～40min,PBS冲洗。以上反应均在湿盒中进行, 加苏木素核染液,30s,水冲洗,吹干,封片,油镜计数淋巴细胞200个,计算阳性率(%)。
, 百拇医药
1.4 统计学方法 采用t检验,计算P值。
2 结 果
2.1 T细胞亚群的变化 检测标本中T淋巴细胞亚群的水平,SAS患者组与 正常对照组比较,除CD 3+外,其余指标都有明显差异(P<0.05,P<0.01)。CD4+、CD4+/C D8+ SAS患者组明显低于正常组,CD8+则明显高于正常组,见表1。
表1 SAS组与对照组T淋巴细胞亚群的比较(x±s ) 组别
n
CD3+
CD4+
, 百拇医药
CD8+
CD4+/CD8+
SAS组
正常对照组
P值
56
30
62.63±3.40
65.52±5.41
>0.05
40.72 ±6.12
45.21±4.52
, http://www.100md.com
<0.05
31.57±5.68
25.87±6.01
<0.01
1.30±0.27
1 .75±0.35
<0.05
2.2 T活化状态和NK细胞活 性的改变 见表2。表2 SAS组和正常对照组活化T细胞
和NK细胞阳 性率的比较(x±s) 组别
n
CD16+
, 百拇医药
CD25+
SAS组
56
20.23±4.87
22.03±3.05
正常对照组
30
27.50±5.21
29.21±2.05
P值
<0 .01
<0.01
, http://www.100md.com
由表2可见,SAS患者 外周血中,活化T细胞的比例(CD25+)明显降低,由29.21%降至22.03%,NK细胞(CD16+)也 明显减少(P<0.01)。
3 讨 论
T细胞是重 要的免疫活性细胞,除 直接介导 细胞免疫功能外,对机体免疫应答的调节起关键作用,其表面有多种膜分子[6],是 该细胞识别抗原,与其他免疫细胞相互作用接受信号刺激等的分子基础,也是其亚群分类的基 础。其中CD3+分布于成熟T细胞的表面,CD4+和CD8+分别与MHC Ⅰ、Ⅱ类分子结合增 强淋巴细胞与APC或其他靶细胞的结合,与刺激信号的传导有关。CD4+主要代表辅助性细胞 ,CD8+主要代表抑制性细胞。CD25+是IL-2受体,T细胞只有在活化时才表达该受体。CD1 6+是NK细胞的标志。这些细胞在机体免疫反应中起着重要的作用,其数量及相互关系时反 映着机体细胞免疫水平及免疫调节状态。当不同淋巴细胞或其亚群的数量和功能发生异常时 ,就可导致机体的免疫紊乱,并发生一系列的病理生理变化。
, http://www.100md.com
本研究通过对SAS患者外 周 血T淋巴细胞亚群,NK细胞的测定,提示SAS患者外周血中CD3+数量与正常对照无显著变化, 但CD8 +明显高于对照组,而CD4+、CD4+/CD8+均低于正常组。CD8+升高,CD4+降低,可 使具有外周血成熟T淋巴细胞共同标志的CD3+无明显变化。CD4+降低和CD8+升高表 明SAS患者的免疫功能明显下降。CD25+的表达是辅助性T淋巴细胞活化和细胞免疫反应启 动的重要标志[4],SAS患者的CD25+细胞明显减少表明其T细胞不仅数量减少,功 能也有明显损害,CD16+(NK细胞)减少说明SAS患者的非特异免疫功能也明显降低。SAS 病因有多种,对人体的损伤也是多方面的。SAS患者的主要症状是上呼吸道阻塞,充血,水 肿,体内长期慢性缺氧,长期的鼾声刺激,使上呼吸道防御功能降低,体内白细胞升高(本实验 室检测表明,20%的患者体内白细胞数大于10×109/L)。长期的慢性缺氧,局部病理损 伤可明显影响机体免疫功能。可能由于SAS患者非特异免疫功能降低,使机体易受细菌、病毒 等病原微生物的侵害,造成体内经常处于感染状态,最终使机体细胞免疫紊乱,罹患其他疾病 的机会增多。本研究结果证实,SAS患者机体的细胞免疫功能及非特异免疫功能均受到明显影响,功能明显降低,由此可能诱发其他并发症,值得临床重视并进行深入研究。
, http://www.100md.com
作者简介：卢红霞(1963—)女，山东章丘人，卫生部耳鼻喉科学重点实验室 ，主管技师，主要从事耳鼻喉科疾病的病理学研究。
参考文献
1，慈书平,江时森.睡眠呼吸暂停 与多 系统器官损害研究进展 [J] .中华结核和呼吸杂志,1997,20(1):39-41
2，费瑜,陈丽娟.老年高血压患者外周血T淋巴细胞亚群及红细胞免疫功能的临床研究 [J ] .临床心血管病杂志,1998,14(1):32-33
3，吴静,徐锦堂.异体角膜上皮细 胞 诱导外周血T淋巴细胞CD69+和CD25+表达 [J] .眼科研究,1998,16(3):171-172
4，Russel SM,Keegan AD,Haracla N,et al.Interleukin-2 receptor gamma obtain: A functional component of the interleukin-4 receptor [J] .Science,1993,262(514 1)：1880
5，吴镇风,王铁君.大剂量胸腺肽对肿瘤放疗病人T细胞亚群的影响 [ J]，.中 国免疫学杂志,1998,14(6):438-439
6，金泊朱主编.细胞和分子免疫学 [M] .西安: 世界图书出版公司,1995.4-25
收稿日期：2000-04-29, 百拇医药