九制大黄蒽醌衍生物对动物高血脂及血液流变学的影响
作者：胡昌江 马烈 何学梅 瞿燕 禹玉洪 胥云
单位：胡昌江 马烈 何学梅 瞿燕(成都中医药大学 药学院，四川 成都 610075)；禹玉洪 胥云(中国医药研究开发中心)
关键词：九制大黄；蒽醌衍生物；高血脂；血液流变学
成都中医药大学学报000410 摘 要： 九制大黄蒽醌衍生物有降低实验性高血脂大白鼠血液TC、TG的作用和改善血液流变学的作用(P<0.01)，在1～4 g/kg范围内，随着剂量增大，其降血脂作用和改变血液流变学作用有增强的趋势。
中图分类号： R282.710.5；R589.2 文献标识码：A 文章编号：1004-0668(2000)04-0025-02
九制大黄由九蒸九晒大黄衍变而来[1]，是大黄众多传统炮制品的一种。现代临床研究表明，大黄具有明显的降血脂作用[2～4]，高脂血症属于中医痰浊、瘀血病证范畴，这适合于大黄的化湿消浊、利胆退黄、活血化瘀的功效。但生大黄的剧烈泻下、腹痛的副作用也比较突出，在临床应用时，有一定的局限性。九制大黄在炮制过程中，其结合性蒽醌衍生物有部分转化为游离性蒽醌衍生物，因而除留生大黄降血脂、改善血液流变学的作用外，其强烈泻下、腹痛的副作用也降低到较小程度，故历代医药学家认为九制大黄疗效高，副作用低，因而倍受推崇和肯定[5]。我们首先用小白鼠高脂血症模型对九制大黄降血脂有效部位进行了筛选，研究结果表明，其降血脂的有效部位为蒽醌衍生物(包括结合性蒽醌衍生物和游离性蒽醌衍生物)，而鞣质、多糖则无明显的降血脂作用。在此基础上，进一步观察了九制大黄蒽醌衍生物对实验性高脂血症大白鼠的降血脂作用和对血液流变学的影响。现将实验结果如下。
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1 材料
1.1 实验药材
(1)大黄：掌叶大黄(Rheum palmatum L.)的干燥根及根茎。采自四川省理县米亚罗国有牧场，经本校中药鉴定教研室贾敏如教授鉴定。
(2)九制大黄：生大黄片加10%黄酒密闭闷润后，在常压下蒸2 h，取出，晒至七八成干时，把药汁拌入，晒干如此反复9次即得[5，6]。
1.2 实验动物
Wistar大鼠，雌雄各半，体重140～160 g，由本校动物中心提供。
1.3 试药与仪器
(1)吉非罗齐：湖南省株湘江制药厂生产，批号：960502；(2)甲基硫氧嘧啶(片)：广光华制药厂，批号：940302；(3)生理盐水：本校附属医院药剂科提供，批号：961019；(4)其它化学试剂：AR级。
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胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)法测定试剂盒：卫生部临床诊断剂实验中心生产，批号：960801；LIANG-100型血液流变测定仪：上海医科大学仪器厂生产。
1.4 高脂饲料的配制[7]
胆固醇80 g，蛋黄、去氧胆酸盐各16 g，鱼粉、甲基硫氧嘧啶各8 g，以上物质混合、研匀后，加入到熔化状态下的猪油160 g中，混匀后，再与基础饲料400 g混匀，干燥，备用。
1.5 供试品溶液的制备[8]
九制大黄粗颗粒用85%乙醇回流提取3次(12倍2 h、10倍1.5 h、8倍1 h)，合并醇提液，放至室温，调至pH8，静置1夜(冷藏)，过滤，回收乙醇至无醇味后，调至pH5，快搅慢加10%明胶溶液至不再继续产生沉淀为止，静置2 h，加95%乙醇至含醇量85%，静置1夜(冷藏)，过滤，回收乙醇至无味(用明胶氯化钠溶液检测应不含鞣质)，加适量吐温-80助溶，得供试品溶液。
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1.6 九制大黄及供试品溶液的成分检测
经TLC检识，在大黄素、大黄酸、大黄素甲醚以及生大黄的蒽醌甙元相应位置显相同颜色的主斑点；经明胶氯化钠溶液检测不含鞣质；经Fehling试剂反应检测不含糖类。采用HPLC法检测，九制大黄中总大黄素含量为0.102%，供试品溶液中总大黄素含量(占总固形物比例)为0.989%，用比色法测定，九制大黄中总蒽醌衍生物含量为0.903%，其中游离蒽醌衍生物含量为0.370%，结合蒽醌衍生物含量为0.533%，供试品溶液中总大黄素含量(占总固形物比例)为87.540%，其中游离蒽醌衍生物含量(占总固形物比例)为51.671%，结合蒽醌衍生物含量(占总固形物比例)为35.869%。
2 方法与结果
取大白鼠60只，雌雄各半，体重140～160 g，随机分为6组，每组10只。除生理盐水对照组(10只)给普通饲料外，其余50只均给高脂饲料，20天后随机分为5组，称重，标记。1组为高脂血症模型组，灌胃生理盐水(4 mL/只)；2组为阳性药对照组，灌胃吉非罗齐(0.024 g/kg)；其余3组分别为供试品溶液低、中、高剂量组(大黄蒽醌衍生物1 g/kg、2 g/kg、4 g/kg)，均灌胃给药，连续灌饲20天，第21天禁食不禁水12 h后断头取血，加肝素钠抗凝，一半血液测定TC、TG，结果见表1；另一半用血液流变测定仪测定全血比粘度、血浆比粘度，结果见表2。
, 百拇医药
表1 九制大黄蒽醌衍生物对高脂血症大白鼠TC、TG的影响 组 别
n
TC(mg%)
TG(mg%)
±s
下降率(%)±s
下降率(%)
生理盐水对照组
10
2.17±0.25
, 百拇医药 —
0.530±0.14
—
高脂血症模型组
10
5.34±0.50★★★
—
0.75±0.21★
—
阳性药对照组
10
4.28±0.37**
, 百拇医药
19.85
0.65±0.14
13.33
低剂量药物组
10
3.91±0.45***
26.78
0.61±0.35
18.67
中剂量药物组
10
3.58±0.56***
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32.96
0.48±0.10**※※
36.00
高剂量药物组
10
3.51±0.46***※★
34.27
0.45±0.19**※
40.00
与生理盐水对照组比较：★ P<0.05，★★P<0.01，★★★P<0.001；与高脂血症模型组比较：*P<0.05，P<0.01，***P<0.001；与阳性药对照组比较：※P<0.05，※※P<0.01，※※※P<0.001表2 九制大黄蒽醌衍生物对高脂血症大白鼠血液流变学的影响 组别
, 百拇医药
n
全血比粘度(±s)
血浆比粘度
100(切变速率 /秒)
10
1±s
生理盐水对照组
10
4.97±0.35
7.63±0.88
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16.73±1.58
1.81±0.07
高脂血症模型组
10
7.53±0.41★★★
11.31±1.45★★★
27.21±1.01★★★
1.90±0.06★
阳性药对照组
10
5.82±0.42***
, http://www.100md.com
7.47±1.16***
15.12±3.01***
1.56±0.10***
低剂量药物组
10
6.86±0.58**※※※
9.19±0.93**※※
18.83±2.95***※
1.76±0.12**※※※
, 百拇医药 中剂量药物组
10
6.96±0.45**※※※
8.55±1.76**
7.82±5.16***
1.73±0.12**※※
高剂量药物组
10
5.89±0.64***
7.71±1.23***
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16.25±2.33***
1.63±0.13***
与生理盐水对照组比较：★ P<0.05，★★P<0.01，★★★P<0.001；与高脂血症模型组比较：*P<0.05，P<0.01，***P<0.001；与阳性药对照组比较：※P<0.05，※※P<0.01，※※※P<0.001。
全血比粘度=全血流速(秒)/生理盐水流速(秒)，血浆比粘度=血浆流速(秒)/生理盐水流速(秒)。
3 讨论
3.1 本实验是根据有关大黄的古人用药经验以及现代药理研究结果，在对大黄有效部位初步筛选的基础上进行的。实验结果表明，九制大黄蒽醌衍生物低、中、高3个剂量组对实验性高脂血症大白鼠的TC、TG及血液流变学的影响显著。与高脂血症模型组比较，其TC下降率为26.78%～34.27%，TG下降率为18.67%～40.00%，同时在降低高脂血症大白鼠的全血比粘度、血浆比粘度方面效果明显。表明九制大黄蒽醌衍生物对高脂血症、肥胖症及其并发症具有较好的治疗效果，为进一步开发应用大黄及其炮制品提供了一定的科学依据。
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3.2 生大黄有剧烈的泻下作用，长时间灌饲动物，动物状态极差，甚至出现死亡，故未设定生大黄对照组。
作者简介：胡昌江，1952年11月生；副教授；研究方向：中药炮制研究。
参考文献
1，禹玉洪.九制大黄探源[J].时珍国药研究，1998；9(3)：260
2，赵茹美.大黄的现代研究及临床应用[J].中医药信息，1992，(6)：41
3，王书鸿.大黄治疗肾衰近况[J].中国中医药报，1997，总1028.12，29
4，楼之(山今).大黄研究的回顾与前瞻[J].北京医科大学学报(大黄专辑)，1993，25(5)：1
5，何民.大黄九蒸九晒对蒽醌和鞣质含量的影响[J].中成药，1992，14(12)：19
6，禹玉洪.九制大黄炮制过程中多糖和鞣质的含量变化研究[J].中成药，1999，21(8)：405
7，陈奇主编.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1994.518
8，钱百炎主编.中草药注射剂[M].上海：上海科学技术出版社，1981.16
收稿日期：2000-11-15, 百拇医药
单位：胡昌江 马烈 何学梅 瞿燕(成都中医药大学 药学院，四川 成都 610075)；禹玉洪 胥云(中国医药研究开发中心)
关键词：九制大黄；蒽醌衍生物；高血脂；血液流变学
成都中医药大学学报000410 摘 要： 九制大黄蒽醌衍生物有降低实验性高血脂大白鼠血液TC、TG的作用和改善血液流变学的作用(P<0.01)，在1～4 g/kg范围内，随着剂量增大，其降血脂作用和改变血液流变学作用有增强的趋势。
中图分类号： R282.710.5；R589.2 文献标识码：A 文章编号：1004-0668(2000)04-0025-02
九制大黄由九蒸九晒大黄衍变而来[1]，是大黄众多传统炮制品的一种。现代临床研究表明，大黄具有明显的降血脂作用[2～4]，高脂血症属于中医痰浊、瘀血病证范畴，这适合于大黄的化湿消浊、利胆退黄、活血化瘀的功效。但生大黄的剧烈泻下、腹痛的副作用也比较突出，在临床应用时，有一定的局限性。九制大黄在炮制过程中，其结合性蒽醌衍生物有部分转化为游离性蒽醌衍生物，因而除留生大黄降血脂、改善血液流变学的作用外，其强烈泻下、腹痛的副作用也降低到较小程度，故历代医药学家认为九制大黄疗效高，副作用低，因而倍受推崇和肯定[5]。我们首先用小白鼠高脂血症模型对九制大黄降血脂有效部位进行了筛选，研究结果表明，其降血脂的有效部位为蒽醌衍生物(包括结合性蒽醌衍生物和游离性蒽醌衍生物)，而鞣质、多糖则无明显的降血脂作用。在此基础上，进一步观察了九制大黄蒽醌衍生物对实验性高脂血症大白鼠的降血脂作用和对血液流变学的影响。现将实验结果如下。
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1 材料
1.1 实验药材
(1)大黄：掌叶大黄(Rheum palmatum L.)的干燥根及根茎。采自四川省理县米亚罗国有牧场，经本校中药鉴定教研室贾敏如教授鉴定。
(2)九制大黄：生大黄片加10%黄酒密闭闷润后，在常压下蒸2 h，取出，晒至七八成干时，把药汁拌入，晒干如此反复9次即得[5，6]。
1.2 实验动物
Wistar大鼠，雌雄各半，体重140～160 g，由本校动物中心提供。
1.3 试药与仪器
(1)吉非罗齐：湖南省株湘江制药厂生产，批号：960502；(2)甲基硫氧嘧啶(片)：广光华制药厂，批号：940302；(3)生理盐水：本校附属医院药剂科提供，批号：961019；(4)其它化学试剂：AR级。
, http://www.100md.com
胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)法测定试剂盒：卫生部临床诊断剂实验中心生产，批号：960801；LIANG-100型血液流变测定仪：上海医科大学仪器厂生产。
1.4 高脂饲料的配制[7]
胆固醇80 g，蛋黄、去氧胆酸盐各16 g，鱼粉、甲基硫氧嘧啶各8 g，以上物质混合、研匀后，加入到熔化状态下的猪油160 g中，混匀后，再与基础饲料400 g混匀，干燥，备用。
1.5 供试品溶液的制备[8]
九制大黄粗颗粒用85%乙醇回流提取3次(12倍2 h、10倍1.5 h、8倍1 h)，合并醇提液，放至室温，调至pH8，静置1夜(冷藏)，过滤，回收乙醇至无醇味后，调至pH5，快搅慢加10%明胶溶液至不再继续产生沉淀为止，静置2 h，加95%乙醇至含醇量85%，静置1夜(冷藏)，过滤，回收乙醇至无味(用明胶氯化钠溶液检测应不含鞣质)，加适量吐温-80助溶，得供试品溶液。
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1.6 九制大黄及供试品溶液的成分检测
经TLC检识，在大黄素、大黄酸、大黄素甲醚以及生大黄的蒽醌甙元相应位置显相同颜色的主斑点；经明胶氯化钠溶液检测不含鞣质；经Fehling试剂反应检测不含糖类。采用HPLC法检测，九制大黄中总大黄素含量为0.102%，供试品溶液中总大黄素含量(占总固形物比例)为0.989%，用比色法测定，九制大黄中总蒽醌衍生物含量为0.903%，其中游离蒽醌衍生物含量为0.370%，结合蒽醌衍生物含量为0.533%，供试品溶液中总大黄素含量(占总固形物比例)为87.540%，其中游离蒽醌衍生物含量(占总固形物比例)为51.671%，结合蒽醌衍生物含量(占总固形物比例)为35.869%。
2 方法与结果
取大白鼠60只，雌雄各半，体重140～160 g，随机分为6组，每组10只。除生理盐水对照组(10只)给普通饲料外，其余50只均给高脂饲料，20天后随机分为5组，称重，标记。1组为高脂血症模型组，灌胃生理盐水(4 mL/只)；2组为阳性药对照组，灌胃吉非罗齐(0.024 g/kg)；其余3组分别为供试品溶液低、中、高剂量组(大黄蒽醌衍生物1 g/kg、2 g/kg、4 g/kg)，均灌胃给药，连续灌饲20天，第21天禁食不禁水12 h后断头取血，加肝素钠抗凝，一半血液测定TC、TG，结果见表1；另一半用血液流变测定仪测定全血比粘度、血浆比粘度，结果见表2。
, 百拇医药
表1 九制大黄蒽醌衍生物对高脂血症大白鼠TC、TG的影响 组 别
n
TC(mg%)
TG(mg%)
±s下降率(%)
±s下降率(%)
生理盐水对照组
10
2.17±0.25
, 百拇医药 —
0.530±0.14
—
高脂血症模型组
10
5.34±0.50★★★
—
0.75±0.21★
—
阳性药对照组
10
4.28±0.37**
, 百拇医药
19.85
0.65±0.14
13.33
低剂量药物组
10
3.91±0.45***
26.78
0.61±0.35
18.67
中剂量药物组
10
3.58±0.56***
, http://www.100md.com
32.96
0.48±0.10**※※
36.00
高剂量药物组
10
3.51±0.46***※★
34.27
0.45±0.19**※
40.00
与生理盐水对照组比较：★ P<0.05，★★P<0.01，★★★P<0.001；与高脂血症模型组比较：*P<0.05，P<0.01，***P<0.001；与阳性药对照组比较：※P<0.05，※※P<0.01，※※※P<0.001表2 九制大黄蒽醌衍生物对高脂血症大白鼠血液流变学的影响 组别
, 百拇医药
n
全血比粘度(
±s)血浆比粘度
100(切变速率 /秒)
10
1
±s生理盐水对照组
10
4.97±0.35
7.63±0.88
, http://www.100md.com
16.73±1.58
1.81±0.07
高脂血症模型组
10
7.53±0.41★★★
11.31±1.45★★★
27.21±1.01★★★
1.90±0.06★
阳性药对照组
10
5.82±0.42***
, http://www.100md.com
7.47±1.16***
15.12±3.01***
1.56±0.10***
低剂量药物组
10
6.86±0.58**※※※
9.19±0.93**※※
18.83±2.95***※
1.76±0.12**※※※
, 百拇医药 中剂量药物组
10
6.96±0.45**※※※
8.55±1.76**
7.82±5.16***
1.73±0.12**※※
高剂量药物组
10
5.89±0.64***
7.71±1.23***
, http://www.100md.com
16.25±2.33***
1.63±0.13***
与生理盐水对照组比较：★ P<0.05，★★P<0.01，★★★P<0.001；与高脂血症模型组比较：*P<0.05，P<0.01，***P<0.001；与阳性药对照组比较：※P<0.05，※※P<0.01，※※※P<0.001。
全血比粘度=全血流速(秒)/生理盐水流速(秒)，血浆比粘度=血浆流速(秒)/生理盐水流速(秒)。
3 讨论
3.1 本实验是根据有关大黄的古人用药经验以及现代药理研究结果，在对大黄有效部位初步筛选的基础上进行的。实验结果表明，九制大黄蒽醌衍生物低、中、高3个剂量组对实验性高脂血症大白鼠的TC、TG及血液流变学的影响显著。与高脂血症模型组比较，其TC下降率为26.78%～34.27%，TG下降率为18.67%～40.00%，同时在降低高脂血症大白鼠的全血比粘度、血浆比粘度方面效果明显。表明九制大黄蒽醌衍生物对高脂血症、肥胖症及其并发症具有较好的治疗效果，为进一步开发应用大黄及其炮制品提供了一定的科学依据。
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3.2 生大黄有剧烈的泻下作用，长时间灌饲动物，动物状态极差，甚至出现死亡，故未设定生大黄对照组。
作者简介：胡昌江，1952年11月生；副教授；研究方向：中药炮制研究。
参考文献
1，禹玉洪.九制大黄探源[J].时珍国药研究，1998；9(3)：260
2，赵茹美.大黄的现代研究及临床应用[J].中医药信息，1992，(6)：41
3，王书鸿.大黄治疗肾衰近况[J].中国中医药报，1997，总1028.12，29
4，楼之(山今).大黄研究的回顾与前瞻[J].北京医科大学学报(大黄专辑)，1993，25(5)：1
5，何民.大黄九蒸九晒对蒽醌和鞣质含量的影响[J].中成药，1992，14(12)：19
6，禹玉洪.九制大黄炮制过程中多糖和鞣质的含量变化研究[J].中成药，1999，21(8)：405
7，陈奇主编.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1994.518
8，钱百炎主编.中草药注射剂[M].上海：上海科学技术出版社，1981.16
收稿日期：2000-11-15, 百拇医药