三种方法检测淋球菌的结果分析
朱江 李丽华 向秀华 詹学良 刘永明 李琼兰 杨凤美
关键词：淋病奈瑟氏菌 淋球菌 纸片法 涂片镜检 细菌培养
淋病奈瑟氏菌(N.gonoyyhoeac 简称淋球菌)，淋病快速纸片法和涂片革兰染色镜检操作简便、快速、价廉。从定性反应和形态上观察疑诊淋病，要确诊尚需细菌培养。本文就疑诊淋病患者标本在纸片法，涂片镜检的同时进行细菌培养，现报道如 下。
1 材料与方法
1.1 病例选择 随机选择拟诊淋病患者150例，其中，男性101例，最小年龄3月，最大45岁，女性49例，最小年龄1月，最大41岁。尿道口有刺激症状或分泌物者96 例，白带增多伴腥臭味者42例，睑结膜红肿伴脓性分泌物者12例。均在未使用任何药物前采 集标本进行检测。涂片革兰染色均查到典型G-双球菌或淋病快速纸片法阳性反应。
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1.2 淋病快速诊断试纸片 由福建省三强生化化工有限公司提供(批号94 133，有效期为18个月)，方法按照试剂盒提供的方法使用。
1.3 培养基 淋球菌分离培养基(购于上海市医学化验所，批号901209) ，按使用说明配制好后，15磅15min消毒灭菌，待冷至60℃左右时以无菌手续加入羊血6%v/ v(先用灭菌馏水溶解羊红血球)，混匀后倾注平板(φ6cm)，冷凝后装食品塑料袋4℃冰箱保 存备用(两周内使用效果较好)。
1.4 方 法
1.4.1 标本采集 男性则排小便2h后用无菌棉试子取尿道口内0.3cm分 泌物，若采集不到标本可用前列腺按摩法取分泌物。女性则暴露子宫颈，用无菌棉拭子插入 宫颈管内1cm，轻轻转动1周，取出后用滚动法将棉拭涂布于预温的培养基上。眼分泌物的采 集：先用生理盐水清洗外表粘液，再轻轻按压采集标本所取新鲜标本立即(≤10min)接种 淋球菌培养基一角，再以无菌接种环曲线划种后，于划线头贴多粘菌素β药敏纸片一张，置 35℃，CO2烛缸孵育48h，生长菌涂片染色后，再按文献[1]进行系统生化鉴定到 种。
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1.4.2 快速纸片法 新鲜标本立即涂擦于药纸上，于2分钟内观察棉拭 子和药纸的颜色反应，如出现兰、紫兰或黑色判为阳性，不变色为阴性。
1.4.3 涂片染色 新鲜标本立即涂于洁净玻片上，自然干燥后行革兰染 色，油镜(10×100)下仔细观察如红色、肾形成对排列，两菌接触面平坦或稍内凹细菌判为 淋球菌。
1.4.4 已知菌株 取自卫生部临床检验中心发放的年度考核菌株和质控 菌株：ATCC25922、25923、27853，共13株。将其分别制成相当于麦氏管第1、2、3、4管4个 浓度的菌悬液，然后用无菌棉拭子分别蘸取菌悬液涂擦于药纸上，原始菌落涂擦药纸后还需 滴加润湿液，立即记录药纸片和棉拭子出现颜色的时间。
2 结果
在150份受检标本中，应用快速纸片法检出阳性标本133份，阳性率88.7%；涂片革兰染色均 检出G-双球菌(100%)；经细菌培养生化鉴定确诊淋菌者21份，阳性率14.0%，其中非淋菌 34份，占22.7%，见表1，其它菌80份，占53.3%，15份标本培养阴性。
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表1 疑诊淋病标本分离菌构成比
菌 种
株 数
%
淋球菌
21
14.0
干燥奈瑟氏菌
9
6.0
金黄奈瑟菌
7
4.7
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浅黄奈氏菌
7
4.7
粘膜奈氏菌
6
4.0
卡他布兰氏菌
5
3.3
其它
80
53.3
13株已知菌与药纸片均能产生颜色反应，见表2。 表2 已知菌株与药纸片反应情况
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菌株
15″
30″
60″
90 ″
120″
铜绿假单胞菌
++
++++
洋葱假单胞菌
++
++++
脑膜败血黄杆菌
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+
++
++++
大肠埃希菌
+
++
++++
迟缓爱德华菌
+
++
++++
产酸克雷伯菌
+
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++
++++
奇异变形杆菌
+
++
++++
志贺痢疾杆菌
-
-
±
+
+
金黄色葡萄球菌
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-
+
++
++
+++
溶血葡萄球菌
±
+
++
+++
卡他布兰氏菌
±
+
+
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++++
白色念珠菌
-
±
+
+++
++++
高里氏念珠菌
+
+
+
++++
+++++
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注：″秒钟。“-”不变色；±：微变色；+变兰色；++++变深兰色.
3 讨论
淋病逐年呈蔓延趋势，已成公害，性乱是传播的主要原因，婴幼儿为父母垂直传染。临床表 现具备了淋病特征，虽然涂片染色检出G-双球菌或快速纸片法阳性为目前简便、快速的辅 助诊断手段，又具备了上述条件，尚不能诊断淋病，由表1可见，淋菌的检出为14.0%，非 淋菌(干燥奈氏菌、金黄奈瑟菌、浅黄奈氏菌、粘膜奈氏菌和卡他布兰汉菌)的检出为22.7% ，这些菌革兰染色后镜下仍为G-球菌，且多为成双成对排列，其貌与淋球菌相差无几。其 二，由于制片不当和革兰染色中第3步(95%酒精)脱色过度或第4步(0.25%沙黄)染色过分，将革兰阳性球菌染成革兰 阴性球菌，而我们的检验工作者往往只要见到G-球菌，就盲目报告淋球菌。其三只要快速 药纸片呈现兰色、兰紫色时就报告淋病，临床医生就凭这张有误的报告单和临床“表现”轻 易地作出淋病判断，常使患者承受不必要的精神负担仍至更严重的恶果，以往的教训应引以 为戒。
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试验中我们发现快速试纸片能与许多菌株在15秒钟即呈现兰色反应，有的菌株由淡兰(±)渐 变兰(+)、深兰(++)、紫兰(+++～++++)，详见表2，这些菌株均能在2分钟内与药纸片发生颜 色反应。但是随着稀释度增大时，呈色反应变慢，并且颜色(兰色)变浅变谈。另外，发现当标本呈硷性时能与药纸片立即发生强阳性反应(深兰色紫兰色：++++)，如滴虫、霉菌性阴道炎时，临床常使用冰硼散，洁尔阴，或外洗肥皂等强硷性药物。其次是药纸片批间差，片 间差或保存不当，或使用失效，过期药纸片均能导致假阳性结果，应注意。
本组试验表明，淋病的确诊还需常规作细菌培养，同时应用光学显微镜镜辨认经染色后的微 生 物形态，特征是医学检验技师的基本功，为了更快、更好地为临床提供有价值的资料，我们自身必须具备准确而熟练地制片、革兰染色4步染色法等技能和镜下各类微生物的形态、特征、特点，以及所使用的药纸片的性能、特点和注意事项，严格把握每一个细小环节，才能 作出正确判断，这些可贵经验和能力的获得，除以上方面还需熟习细菌生长，生活环境，特 征和经常不间断地反复制作大量涂片、染色、镜检标本外，从书本上接受别人经验也是非常 重要的。■
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作者简介：朱 江(1949～)，女，主管检验师，主要从事临床检验。
作者单位：朱 江 云南省玉溪市医院检验科，玉溪 653100
李丽华 云南省玉溪市医院检验科，玉溪 653100
向秀华 云南省玉溪市医院检验科，玉溪 653100
詹学良 云南省玉溪市医院检验科，玉溪 653100
刘永明 云南省玉溪市医院检验科，玉溪 653100
李琼兰 云南省玉溪市医院检验科，玉溪 653100
杨凤美 云南省江川县医院
参考文献
[1]全国临床检验操作规程.中华人民共和国卫生部医政司编.南京：东南大学出版社，1991，401～441., 百拇医药
关键词：淋病奈瑟氏菌 淋球菌 纸片法 涂片镜检 细菌培养
淋病奈瑟氏菌(N.gonoyyhoeac 简称淋球菌)，淋病快速纸片法和涂片革兰染色镜检操作简便、快速、价廉。从定性反应和形态上观察疑诊淋病，要确诊尚需细菌培养。本文就疑诊淋病患者标本在纸片法，涂片镜检的同时进行细菌培养，现报道如 下。
1 材料与方法
1.1 病例选择 随机选择拟诊淋病患者150例，其中，男性101例，最小年龄3月，最大45岁，女性49例，最小年龄1月，最大41岁。尿道口有刺激症状或分泌物者96 例，白带增多伴腥臭味者42例，睑结膜红肿伴脓性分泌物者12例。均在未使用任何药物前采 集标本进行检测。涂片革兰染色均查到典型G-双球菌或淋病快速纸片法阳性反应。
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1.2 淋病快速诊断试纸片 由福建省三强生化化工有限公司提供(批号94 133，有效期为18个月)，方法按照试剂盒提供的方法使用。
1.3 培养基 淋球菌分离培养基(购于上海市医学化验所，批号901209) ，按使用说明配制好后，15磅15min消毒灭菌，待冷至60℃左右时以无菌手续加入羊血6%v/ v(先用灭菌馏水溶解羊红血球)，混匀后倾注平板(φ6cm)，冷凝后装食品塑料袋4℃冰箱保 存备用(两周内使用效果较好)。
1.4 方 法
1.4.1 标本采集 男性则排小便2h后用无菌棉试子取尿道口内0.3cm分 泌物，若采集不到标本可用前列腺按摩法取分泌物。女性则暴露子宫颈，用无菌棉拭子插入 宫颈管内1cm，轻轻转动1周，取出后用滚动法将棉拭涂布于预温的培养基上。眼分泌物的采 集：先用生理盐水清洗外表粘液，再轻轻按压采集标本所取新鲜标本立即(≤10min)接种 淋球菌培养基一角，再以无菌接种环曲线划种后，于划线头贴多粘菌素β药敏纸片一张，置 35℃，CO2烛缸孵育48h，生长菌涂片染色后，再按文献[1]进行系统生化鉴定到 种。
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1.4.2 快速纸片法 新鲜标本立即涂擦于药纸上，于2分钟内观察棉拭 子和药纸的颜色反应，如出现兰、紫兰或黑色判为阳性，不变色为阴性。
1.4.3 涂片染色 新鲜标本立即涂于洁净玻片上，自然干燥后行革兰染 色，油镜(10×100)下仔细观察如红色、肾形成对排列，两菌接触面平坦或稍内凹细菌判为 淋球菌。
1.4.4 已知菌株 取自卫生部临床检验中心发放的年度考核菌株和质控 菌株：ATCC25922、25923、27853，共13株。将其分别制成相当于麦氏管第1、2、3、4管4个 浓度的菌悬液，然后用无菌棉拭子分别蘸取菌悬液涂擦于药纸上，原始菌落涂擦药纸后还需 滴加润湿液，立即记录药纸片和棉拭子出现颜色的时间。
2 结果
在150份受检标本中，应用快速纸片法检出阳性标本133份，阳性率88.7%；涂片革兰染色均 检出G-双球菌(100%)；经细菌培养生化鉴定确诊淋菌者21份，阳性率14.0%，其中非淋菌 34份，占22.7%，见表1，其它菌80份，占53.3%，15份标本培养阴性。
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表1 疑诊淋病标本分离菌构成比
菌 种
株 数
%
淋球菌
21
14.0
干燥奈瑟氏菌
9
6.0
金黄奈瑟菌
7
4.7
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浅黄奈氏菌
7
4.7
粘膜奈氏菌
6
4.0
卡他布兰氏菌
5
3.3
其它
80
53.3
13株已知菌与药纸片均能产生颜色反应，见表2。 表2 已知菌株与药纸片反应情况
, 百拇医药
菌株
15″
30″
60″
90 ″
120″
铜绿假单胞菌
++
++++
洋葱假单胞菌
++
++++
脑膜败血黄杆菌
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+
++
++++
大肠埃希菌
+
++
++++
迟缓爱德华菌
+
++
++++
产酸克雷伯菌
+
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++
++++
奇异变形杆菌
+
++
++++
志贺痢疾杆菌
-
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金黄色葡萄球菌
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-
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++
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溶血葡萄球菌
±
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卡他布兰氏菌
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++++
白色念珠菌
-
±
+
+++
++++
高里氏念珠菌
+
+
+
++++
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注：″秒钟。“-”不变色；±：微变色；+变兰色；++++变深兰色.
3 讨论
淋病逐年呈蔓延趋势，已成公害，性乱是传播的主要原因，婴幼儿为父母垂直传染。临床表 现具备了淋病特征，虽然涂片染色检出G-双球菌或快速纸片法阳性为目前简便、快速的辅 助诊断手段，又具备了上述条件，尚不能诊断淋病，由表1可见，淋菌的检出为14.0%，非 淋菌(干燥奈氏菌、金黄奈瑟菌、浅黄奈氏菌、粘膜奈氏菌和卡他布兰汉菌)的检出为22.7% ，这些菌革兰染色后镜下仍为G-球菌，且多为成双成对排列，其貌与淋球菌相差无几。其 二，由于制片不当和革兰染色中第3步(95%酒精)脱色过度或第4步(0.25%沙黄)染色过分，将革兰阳性球菌染成革兰 阴性球菌，而我们的检验工作者往往只要见到G-球菌，就盲目报告淋球菌。其三只要快速 药纸片呈现兰色、兰紫色时就报告淋病，临床医生就凭这张有误的报告单和临床“表现”轻 易地作出淋病判断，常使患者承受不必要的精神负担仍至更严重的恶果，以往的教训应引以 为戒。
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试验中我们发现快速试纸片能与许多菌株在15秒钟即呈现兰色反应，有的菌株由淡兰(±)渐 变兰(+)、深兰(++)、紫兰(+++～++++)，详见表2，这些菌株均能在2分钟内与药纸片发生颜 色反应。但是随着稀释度增大时，呈色反应变慢，并且颜色(兰色)变浅变谈。另外，发现当标本呈硷性时能与药纸片立即发生强阳性反应(深兰色紫兰色：++++)，如滴虫、霉菌性阴道炎时，临床常使用冰硼散，洁尔阴，或外洗肥皂等强硷性药物。其次是药纸片批间差，片 间差或保存不当，或使用失效，过期药纸片均能导致假阳性结果，应注意。
本组试验表明，淋病的确诊还需常规作细菌培养，同时应用光学显微镜镜辨认经染色后的微 生 物形态，特征是医学检验技师的基本功，为了更快、更好地为临床提供有价值的资料，我们自身必须具备准确而熟练地制片、革兰染色4步染色法等技能和镜下各类微生物的形态、特征、特点，以及所使用的药纸片的性能、特点和注意事项，严格把握每一个细小环节，才能 作出正确判断，这些可贵经验和能力的获得，除以上方面还需熟习细菌生长，生活环境，特 征和经常不间断地反复制作大量涂片、染色、镜检标本外，从书本上接受别人经验也是非常 重要的。■
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作者简介：朱 江(1949～)，女，主管检验师，主要从事临床检验。
作者单位：朱 江 云南省玉溪市医院检验科，玉溪 653100
李丽华 云南省玉溪市医院检验科，玉溪 653100
向秀华 云南省玉溪市医院检验科，玉溪 653100
詹学良 云南省玉溪市医院检验科，玉溪 653100
刘永明 云南省玉溪市医院检验科，玉溪 653100
李琼兰 云南省玉溪市医院检验科，玉溪 653100
杨凤美 云南省江川县医院
参考文献
[1]全国临床检验操作规程.中华人民共和国卫生部医政司编.南京：东南大学出版社，1991，401～441., 百拇医药