血管紧张素转换酶基因多态性与原发性高血压的关系
作者：周雪艳 杨海淼 窦铁华
单位：周雪艳(白求恩医科大学第三临床学院心内科，长春 130031)；杨海淼(长春中医学院附属医院内四科)；窦铁华(吉林省德惠市医院内科)
关键词：血管紧张素转换酶(ACE)；基因多态性；原发性高血压
中国老年学杂志000510摘 要 目的 探讨中国人血管紧张素转换酶(ACE)基因的插入/缺失(I/D)多态性与原发性高血压(EH)发病的相关性。方法 按WHO标准确诊的EH患者68例，正常对照组62例。用多聚酶链式反应(PCR)和琼脂糖电泳技术，检测两组个体ACE基因的I/D多态性。结果 高血压组与正常对照组检测出3种基因型II、ID和DD，频率分布分别为0.48、0.37、0.15和0.39、0.48、0.13，I、D等位基因频率分别为0.67、0.33和0.65、0.35，两组间无显著差别。结论 中国汉族人ACE基因I/D多态性与EH发病无关，等位基因出现频率与西方人不同。
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Relationship between polymorphism of Angiotensin converting enzyme gene and essential hypertension
Zhou Xueyan,Dou Tiehua,Yang Haimiao
(The Third Clinical Hospital,Norman Bethune University of Medical Sciences,Changchun 130031)
Abstract：Objective In order to explore the intrinsic relationship between polymorphism of ACE gene and occurrence of essential hypertension in Chinese people.Methods We studied total of 130 cases,68 cases were diagnosed as essential hypertension according to the diagnostic standard of WHO,62 cases were normal control. Polymerase Chain Reaction(PCR) and DNA electrophoresis techniques were applied to study ACE gene polymorphism.Results Statistic analysis of experimental results indicated that occurring frequency of ID gene was not different in the group of patients with essential hypertension from the group of normal control.Conclusions From this study we concluded that polymorphism ACE gene I/D is not related to the occurrence of essential hypertension in native Chinese people and the occurring frequency of alleles in native Chinese people is different from it in the Europeans.
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Key words Essential hypertension Angiotensin converting enzyme(ACE) Gene polymorphism
原发性高血压病的确切发病机制还未完全阐明，目前认为凡是能影响血管平滑肌细胞增生和表型变化的因素和基因均可能与高血压病的发生有关。本研究旨在观察中国汉族人ACE基因多态性与原发性高血压发病的相关性，并结合国外报道资料，对ACE基因多态性的出现频率在人种间的差别也进行了对比。
1 材料与方法
1.1 研究对象 1998年6月～1999年1月于白求恩医科大学第三临床学院就诊的高血压患者68例，其中男32例，女36例，年龄38～68岁(平均42.5±11.5岁)，病史2～15年。按WHO高血压标准确诊，无心肌梗死、脑梗塞等并发症，正常对照组62例，男30例，女32例，年龄40～60岁(平均43.1±9.5岁)，为门诊体检者，排除高血压病史，无高血压家族史。
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1.2 方法
1.2.1 脱氧核糖核酸(DNA)提取 每位被研究者均肝素采血10 ml，分离白细胞，用酚氯仿抽提基因组脱氧核糖核酸(DNA)。
1.2.2 聚合酶链式反应(PCR) 以聚合酶链式反应扩增对象基因组DNA中ACE基因。反应引物为正向5′-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3′反向5′-GATGTGACCATCACA-
TTCGTCAGAT-3′，由美国宝泰克公司合成。用PCR仪(军事医学科学院生产)进行扩增50 μl，反应体系中包括10×PCR缓冲液5 μl，MgCl2(2 mmol/L)4 μl,dNTP(10 mmol/L)2 μl，去离子水34.5 μl,Taq聚合酶0.5 μl,100 pmol/L sense引物1 μl，100 pmol/L antisense引物1 μl。模板DNA(1 μg/μl)1 μl。多聚合酶链式反应自动循环仪上按下列条件进行反应：94℃变性60 s，58℃退火60 s，72℃延伸60 s，完成30个循环反应后72℃再延伸5 min。取扩增产物10 μl加载样缓冲液1 μl加入2%琼脂糖凝胶中进行电泳分析。凝胶干燥后覆盖X光片进行放射自显影。
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对立基因出现频度按下式计算：
I型等位基因出现频度＝〔2(II患者数+ID患者数)〕/2患者总数
D型等位基因出现频度＝〔2(D患者数+ID患者数)〕/2患者总数
1.3 统计学分析 ACE基因各型在原发性高血压与正常对照组的出现频率采用χ2检验。
2 结 果
在原发性高血压和正常对照组中检测出3种基因型，二个490 bp等位基因构成的II，二个190 bp等位基因构成的DD及一个490 bp和190 bp等位基因杂合子基因型ID。两组基因型及等位基因型频率两组间无显著差别(表1)。
表1 两组ACE基因型及等位基因型频率比较 组别
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n
基因型频率
等位基因频率
II
ID
DD
I
D
高血压组
68
0.48(33)
0.37(25)
0.15(10)
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0.67
0.33
正常对照组
62
0.39(24)
0.48(30)
0.13(8)
0.65
0.35
注：与正常对照组比较基因型频率χ2＝1.873，P>0.05；等位基因型频率χ2＝0.648，P>0.05；扩号内为例数
3 讨 论
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目前原发性高血压(EH)分子生物学研究主要是在特定人种中找到与EH相关的候选基因，然后从中筛选出某一人种中与EH真正相关的基因。肾素-血管紧张素系统(RAS)是参与血压调控的主要神经体液系统，血管紧张素转换酶(ACE)是血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)产生和缓激肽(BK)降解中的关键酶，ACE抑制剂有良好的降压效果，均提示ACE基因与EH发病可能有关。ACE基因16内含子由于存在或丢失一个287 bp DNA片断，而有插入(insertion I)和丢失(deletion D)多态性的存在，ACE基因多态性与高血压发病有否关系尚无定论。
本研究结果表明，ACE基因多态性与EH发病无相关性，ACE基因I/D多态性不能作为预测EH易感性的标志，与国外Iwai〔1〕及Schmidt〔2〕报道一致。而许多研究者已证实高血压时ACE基因表达增加，结合ACE抑制剂可以降低血压，逆转血管再塑，能否推测ACE基因结构的变化可能不是高血压发生机制中的主要物质基础，而与其表达的变化有关。本研究等位基因的频率分布与西方人(法国、澳大利亚、荷兰)〔3～6〕不同，与东方人(日本、朝鲜)〔7，8〕相似，也有人报道美国白人与黑人间ACE基因型出现频率也有差别〔9〕，说明ACE基因型频率分布有种族差别存在。EH为多基因疾病，本研究仅为ACE基因16内含子insertion/deletion的基因多态，随着今后对ACE基因的研究，原发性高血压与ACE基因的关系会进一步得到认识。 作者简介：周雪艳，女，38岁，主治医师，医学硕士，主要从事高血压及心力衰竭的研究
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参考文献
1，Iwai N,Ohmichi N,Nakamnra Y et al.DD genotypt of the angiotensin-converting enzyme gene is a risk factor left ventricular hypertrophy.Circulation，1994；90：2 622
2，Schmidt S,Van Hooft IMS,Grobbee DE et al.Polymorphism of the angiotensin I converting enzyme gene is apparently not related to high blood pressure: Dutch hypertension and offspring study.J Hypertens，1993；11：345
3，Rigat B,Hubert C,Cambie F et al.An insertion/deletion polymorphism in the angiotensin I-converting enzyme gene accounting for half the variance of serum enzyme levels.J Clin Invest，1990：86
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4，Zee RYL,Lo Y,Griffiths LR et al.Association of a polymorphism of the angiotensin I-converting enzyme gene with essental hypertension.Biochem Biophys Res Commun，1992；184：9
5，Schunkert H,Hense HW,Holmer SR et al.Assciation between a deletion polymorphism of the angiotensin-converting-enzyme gene and left ventricular hypertrophy.N Engl J Med，1994；300：1634
6，Lindpaintner K,Pfeffer MA,Kreutj R et al.A prospective evaluation of an angiotensin-converting-enzyme gene polymorphism and the risk of ischemic heart disease.N Engl J Med，1995；332：706
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7，Friedl W,Krempler F.A delation polymorphism in the angiotensin converting heart disease in an Austrian population.Atherosclerososis，1995；112：137
8，Yoneya K.Angiotensin-converting-enzyme gene polymorphism in Japanese patients with hypertrophic cardiomyopathy.Am Heart J，1995；130：1089
9，Bloem LJ,Manatunga AK,Boatright E et al.Relation of race and a polymorphism in the angiotensin converting enzyme gene to enzyme levels.Hypertension，1993；22：407
收稿日期：1999-06-29
修回日期：1999-12-31, 百拇医药
单位：周雪艳(白求恩医科大学第三临床学院心内科，长春 130031)；杨海淼(长春中医学院附属医院内四科)；窦铁华(吉林省德惠市医院内科)
关键词：血管紧张素转换酶(ACE)；基因多态性；原发性高血压
中国老年学杂志000510摘 要 目的 探讨中国人血管紧张素转换酶(ACE)基因的插入/缺失(I/D)多态性与原发性高血压(EH)发病的相关性。方法 按WHO标准确诊的EH患者68例，正常对照组62例。用多聚酶链式反应(PCR)和琼脂糖电泳技术，检测两组个体ACE基因的I/D多态性。结果 高血压组与正常对照组检测出3种基因型II、ID和DD，频率分布分别为0.48、0.37、0.15和0.39、0.48、0.13，I、D等位基因频率分别为0.67、0.33和0.65、0.35，两组间无显著差别。结论 中国汉族人ACE基因I/D多态性与EH发病无关，等位基因出现频率与西方人不同。
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Relationship between polymorphism of Angiotensin converting enzyme gene and essential hypertension
Zhou Xueyan,Dou Tiehua,Yang Haimiao
(The Third Clinical Hospital,Norman Bethune University of Medical Sciences,Changchun 130031)
Abstract：Objective In order to explore the intrinsic relationship between polymorphism of ACE gene and occurrence of essential hypertension in Chinese people.Methods We studied total of 130 cases,68 cases were diagnosed as essential hypertension according to the diagnostic standard of WHO,62 cases were normal control. Polymerase Chain Reaction(PCR) and DNA electrophoresis techniques were applied to study ACE gene polymorphism.Results Statistic analysis of experimental results indicated that occurring frequency of ID gene was not different in the group of patients with essential hypertension from the group of normal control.Conclusions From this study we concluded that polymorphism ACE gene I/D is not related to the occurrence of essential hypertension in native Chinese people and the occurring frequency of alleles in native Chinese people is different from it in the Europeans.
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Key words Essential hypertension Angiotensin converting enzyme(ACE) Gene polymorphism
原发性高血压病的确切发病机制还未完全阐明，目前认为凡是能影响血管平滑肌细胞增生和表型变化的因素和基因均可能与高血压病的发生有关。本研究旨在观察中国汉族人ACE基因多态性与原发性高血压发病的相关性，并结合国外报道资料，对ACE基因多态性的出现频率在人种间的差别也进行了对比。
1 材料与方法
1.1 研究对象 1998年6月～1999年1月于白求恩医科大学第三临床学院就诊的高血压患者68例，其中男32例，女36例，年龄38～68岁(平均42.5±11.5岁)，病史2～15年。按WHO高血压标准确诊，无心肌梗死、脑梗塞等并发症，正常对照组62例，男30例，女32例，年龄40～60岁(平均43.1±9.5岁)，为门诊体检者，排除高血压病史，无高血压家族史。
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1.2 方法
1.2.1 脱氧核糖核酸(DNA)提取 每位被研究者均肝素采血10 ml，分离白细胞，用酚氯仿抽提基因组脱氧核糖核酸(DNA)。
1.2.2 聚合酶链式反应(PCR) 以聚合酶链式反应扩增对象基因组DNA中ACE基因。反应引物为正向5′-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3′反向5′-GATGTGACCATCACA-
TTCGTCAGAT-3′，由美国宝泰克公司合成。用PCR仪(军事医学科学院生产)进行扩增50 μl，反应体系中包括10×PCR缓冲液5 μl，MgCl2(2 mmol/L)4 μl,dNTP(10 mmol/L)2 μl，去离子水34.5 μl,Taq聚合酶0.5 μl,100 pmol/L sense引物1 μl，100 pmol/L antisense引物1 μl。模板DNA(1 μg/μl)1 μl。多聚合酶链式反应自动循环仪上按下列条件进行反应：94℃变性60 s，58℃退火60 s，72℃延伸60 s，完成30个循环反应后72℃再延伸5 min。取扩增产物10 μl加载样缓冲液1 μl加入2%琼脂糖凝胶中进行电泳分析。凝胶干燥后覆盖X光片进行放射自显影。
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对立基因出现频度按下式计算：
I型等位基因出现频度＝〔2(II患者数+ID患者数)〕/2患者总数
D型等位基因出现频度＝〔2(D患者数+ID患者数)〕/2患者总数
1.3 统计学分析 ACE基因各型在原发性高血压与正常对照组的出现频率采用χ2检验。
2 结 果
在原发性高血压和正常对照组中检测出3种基因型，二个490 bp等位基因构成的II，二个190 bp等位基因构成的DD及一个490 bp和190 bp等位基因杂合子基因型ID。两组基因型及等位基因型频率两组间无显著差别(表1)。
表1 两组ACE基因型及等位基因型频率比较 组别
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n
基因型频率
等位基因频率
II
ID
DD
I
D
高血压组
68
0.48(33)
0.37(25)
0.15(10)
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0.67
0.33
正常对照组
62
0.39(24)
0.48(30)
0.13(8)
0.65
0.35
注：与正常对照组比较基因型频率χ2＝1.873，P>0.05；等位基因型频率χ2＝0.648，P>0.05；扩号内为例数
3 讨 论
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目前原发性高血压(EH)分子生物学研究主要是在特定人种中找到与EH相关的候选基因，然后从中筛选出某一人种中与EH真正相关的基因。肾素-血管紧张素系统(RAS)是参与血压调控的主要神经体液系统，血管紧张素转换酶(ACE)是血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)产生和缓激肽(BK)降解中的关键酶，ACE抑制剂有良好的降压效果，均提示ACE基因与EH发病可能有关。ACE基因16内含子由于存在或丢失一个287 bp DNA片断，而有插入(insertion I)和丢失(deletion D)多态性的存在，ACE基因多态性与高血压发病有否关系尚无定论。
本研究结果表明，ACE基因多态性与EH发病无相关性，ACE基因I/D多态性不能作为预测EH易感性的标志，与国外Iwai〔1〕及Schmidt〔2〕报道一致。而许多研究者已证实高血压时ACE基因表达增加，结合ACE抑制剂可以降低血压，逆转血管再塑，能否推测ACE基因结构的变化可能不是高血压发生机制中的主要物质基础，而与其表达的变化有关。本研究等位基因的频率分布与西方人(法国、澳大利亚、荷兰)〔3～6〕不同，与东方人(日本、朝鲜)〔7，8〕相似，也有人报道美国白人与黑人间ACE基因型出现频率也有差别〔9〕，说明ACE基因型频率分布有种族差别存在。EH为多基因疾病，本研究仅为ACE基因16内含子insertion/deletion的基因多态，随着今后对ACE基因的研究，原发性高血压与ACE基因的关系会进一步得到认识。 作者简介：周雪艳，女，38岁，主治医师，医学硕士，主要从事高血压及心力衰竭的研究
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参考文献
1，Iwai N,Ohmichi N,Nakamnra Y et al.DD genotypt of the angiotensin-converting enzyme gene is a risk factor left ventricular hypertrophy.Circulation，1994；90：2 622
2，Schmidt S,Van Hooft IMS,Grobbee DE et al.Polymorphism of the angiotensin I converting enzyme gene is apparently not related to high blood pressure: Dutch hypertension and offspring study.J Hypertens，1993；11：345
3，Rigat B,Hubert C,Cambie F et al.An insertion/deletion polymorphism in the angiotensin I-converting enzyme gene accounting for half the variance of serum enzyme levels.J Clin Invest，1990：86
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4，Zee RYL,Lo Y,Griffiths LR et al.Association of a polymorphism of the angiotensin I-converting enzyme gene with essental hypertension.Biochem Biophys Res Commun，1992；184：9
5，Schunkert H,Hense HW,Holmer SR et al.Assciation between a deletion polymorphism of the angiotensin-converting-enzyme gene and left ventricular hypertrophy.N Engl J Med，1994；300：1634
6，Lindpaintner K,Pfeffer MA,Kreutj R et al.A prospective evaluation of an angiotensin-converting-enzyme gene polymorphism and the risk of ischemic heart disease.N Engl J Med，1995；332：706
, http://www.100md.com
7，Friedl W,Krempler F.A delation polymorphism in the angiotensin converting heart disease in an Austrian population.Atherosclerososis，1995；112：137
8，Yoneya K.Angiotensin-converting-enzyme gene polymorphism in Japanese patients with hypertrophic cardiomyopathy.Am Heart J，1995；130：1089
9，Bloem LJ,Manatunga AK,Boatright E et al.Relation of race and a polymorphism in the angiotensin converting enzyme gene to enzyme levels.Hypertension，1993；22：407
收稿日期：1999-06-29
修回日期：1999-12-31, 百拇医药