黄疸因素对Coulter Maxm血细胞分析仪白细胞分类的影响
作者：朱红军 费选文 陈书裕
单位：515031 广东省汕头市中心医院检验科
关键词：黄疸；血细胞计数；白细胞
实用医学杂志000542 摘 要 目的：探讨黄疸因素对Coulter Maxm血细胞分析仪白细胞分类结果的影响和消除方法。方法：用Coulter Maxm血细胞分析仪和手工分类方法测定50例血浆总胆红素浓度大于150 μ mol/L标本的离心洗涤前后的白细胞分类结果。同时用该仪器测定68例正常人的白细胞分类结果。结果：(1)离心洗涤前的黄疸样本有32份用Coulter Maxm血细胞分析仪测定白细胞分类失败。其余18份白细胞分类结果与正常人对照组结果比较差异有显著意义(P<0.01)。(2)离心洗涤后黄疸样本用Coulter Maxm血细胞分析仪的白细胞分类结果，与离心洗涤前后手工分类结果比较均差异无显著意义(P>0.05)。结论：重度黄疸(即总胆红素浓度大于150 μ mol/L)对Coulter Maxm血细胞分析仪的白细胞分类结果有很大影响，而离心洗涤可作为消除黄疸因素影响的有效方法。
, http://www.100md.com
各种自动化分析仪在提高工作效率和工作质量的同时，也给我们带来一些新的问题。重度黄疸样本可对Coulter Maxm血细胞分析仪的白细胞分类结果造成影响，我们对黄疸等因素产生干扰的原因和消除干扰的方法进行初步探讨，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料 正常对照组：在本院门诊体检的68例健康人。实验组：50例，为本院门诊和住院病人，经生化检查总胆红素浓度大于150 μ mol/L的患者。两组均无血液病、中毒、外伤等，无放疗、化疗史。
1.2 方法
1.2.1 仪器与试剂 Coulter Maxm全自动白细胞分析仪，试剂采用进口Coulter试剂。质控物为美国产5c-plus。按说明书操作。用一次性EDTA*K2抗凝的真空管采取静脉血2 ml。
, 百拇医药
1.2.2 手工分类 按《全国临床检验操作规程》操作。
1.2.3 患者样本的离心洗涤 样本经1 500 r/min离心5 min，吸取上层血浆，并补充同等量的ISOTON Ⅲ稀释液。
1.3 统计学处理 以均数±标准差(
±s)表示，统计学用方差齐性检验后t检验处理。
2 结果
总胆红素浓度大于150 μ mol/L的样本用Coul-ter Maxm血细胞分析仪测定白细胞分类结果，有32例无法分类。其他18例的结果见表1。黄疸样本离心洗涤后用Coulter Maxm血细胞分析仪白细胞分类结果与离心洗涤前后手工分类结果见表2。
表1 黄疸样本与正常人的仪器分类结果比较(±s，%) 组别
, 百拇医药
例
数
嗜中性
粒细胞
淋巴细胞
单核细胞
嗜酸性
粒细胞
嗜碱性
粒细胞
黄疸组
18
30.3±35.2*
, 百拇医药
54.4±34.1*
11.3±5.8*
3.2±1.7
1.2±0.5
正常组
68
55.2±24.6
31.1±18.6
6.2±4.1
1.5±0.8
0.6±0.3
注：与正常组比较*P<0.01表2 重度黄疸样本离心洗涤后的仪器分类与离心洗涤前后手工分类结果比较(n=32，±s，%) 样本处理
, 百拇医药
嗜中性
粒细胞
淋巴
细胞
单核
细胞
嗜酸性
粒细胞
嗜碱性
粒细胞
离心后仪器
51.2±27.3
33.8±26.1
, 百拇医药
8.2±5.2
3.4±3.2
0.5±0.6
离心前手工
50.1±26.8
35.7±22.1
7.4±6.1
3.0±2.8
0.4±0.5
离心后手工
52.5±28.8
35.1±21.4
, http://www.100md.com
7.8±5.4
3.1±2.9
0.4±0.6
表1显示，重度黄疸样本有32例用Coulter Maxm血细胞分析仪无法测定白细胞分类，其他18例样本白细胞分类结果与正常人对照组结果比较，嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞结果均差异有显著意义(P<0.01)；表2示离心洗涤后的黄疸样本用Coulter Maxm血细胞分析仪白细胞分类结果与离心前后手工法分类结果比较，嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞结果均差异无显著意义(均P>0.05)。离心洗涤前的Coulter Maxm血细胞分析仪的白细胞分类出现了不正常的分类图形(图1)，与离心洗涤后白细胞分类图形(图2)比较有显著改变。
图1 黄疸样本离心洗涤
, http://www.100md.com
前白细胞分类图
图2 黄疸样本离心洗涤
后白细胞分类图
3 讨论
Coulter Maxm仪器是运用VCS原理进行白细胞五项分类的。它同时加入溶血剂(erythrolyse)和稳定剂(stabilyse)使白细胞可以基本上保持与体内形态完全相同的自然状态，然后接受体积(volume，V)、电导法(conductivity，C)、光散射(Scatter，S)三种方法的同时检测，从而得出分类结果。我们在临床应用中，绝大部分样本运用VCS法均能很好的进行白细胞五分类。但是VCS法五分类也会受到样本本身因素、标本放置的时间和温度、仪器状态等各种因素的影响。从表1我们看出，当血浆总胆红素浓度高于150 μ mol/L时，对VCS法白细胞分类有很大影响，甚至有一部分在常规操作下分类失败。而且随着胆红素浓度的增高，影响也会越明显。
, 百拇医药
从表2看出，洗涤后的样品用该仪器与显微镜下分类嗜中性粒细胞，淋巴细胞，单核细胞，嗜酸性粒细胞，嗜碱性粒细胞，两者结果差异无显著意义，与李辉[2]报道的正常人血标本两种方法比较的结果有很好的一致性。因而当重度黄疸的样品经过洗涤后，消除原来血浆的干扰之后，运用Coulter Maxm血细胞分析仪重新进行白细胞五项分类计数的结果是准确的、可信的。
通过洗涤前的白细胞分布图形(图1)与洗涤后的白细胞分布图形(图2)比较，我们可以看到，高浓度的胆红素可同时对V、C、S三种方法产生干扰，从而影响分类质量，甚至导致分类失败。我们认为，当高胆红素浓度的样本吸样测定后，虽然经过机器内稀释液的稀释，仍然可以保留一定浓度的胆红素。这部分胆红素极有可能与稳定剂起作用，从而不能使白细胞处于原态下进行测定，影响分类质量。当然，VCS法对白细胞进行分类测定的同时，周围保留的一定浓度的胆红素产生的颜色干扰，也是影响分类质量的另一个重要原因。所以当血浆因素(黄疸，重度溶血等因素)影响VCS法分类结果时，离心洗涤是一种非常理想的消除影响的方法。
参考文献
1，Bulgen A，李红丽，张镇西. 应用VCS技术的白细胞分类和计数. 激光生物学报，1997，6(4)：1247.
2，李 辉，雷汉题，李世新. Coulter Maxm全自动血细胞分析仪白细胞五项分类的评价及应用体会. 实用医学检验杂志，1996，3(4)：18., http://www.100md.com
单位：515031 广东省汕头市中心医院检验科
关键词：黄疸；血细胞计数；白细胞
实用医学杂志000542 摘 要 目的：探讨黄疸因素对Coulter Maxm血细胞分析仪白细胞分类结果的影响和消除方法。方法：用Coulter Maxm血细胞分析仪和手工分类方法测定50例血浆总胆红素浓度大于150 μ mol/L标本的离心洗涤前后的白细胞分类结果。同时用该仪器测定68例正常人的白细胞分类结果。结果：(1)离心洗涤前的黄疸样本有32份用Coulter Maxm血细胞分析仪测定白细胞分类失败。其余18份白细胞分类结果与正常人对照组结果比较差异有显著意义(P<0.01)。(2)离心洗涤后黄疸样本用Coulter Maxm血细胞分析仪的白细胞分类结果，与离心洗涤前后手工分类结果比较均差异无显著意义(P>0.05)。结论：重度黄疸(即总胆红素浓度大于150 μ mol/L)对Coulter Maxm血细胞分析仪的白细胞分类结果有很大影响，而离心洗涤可作为消除黄疸因素影响的有效方法。
, http://www.100md.com
各种自动化分析仪在提高工作效率和工作质量的同时，也给我们带来一些新的问题。重度黄疸样本可对Coulter Maxm血细胞分析仪的白细胞分类结果造成影响，我们对黄疸等因素产生干扰的原因和消除干扰的方法进行初步探讨，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料 正常对照组：在本院门诊体检的68例健康人。实验组：50例，为本院门诊和住院病人，经生化检查总胆红素浓度大于150 μ mol/L的患者。两组均无血液病、中毒、外伤等，无放疗、化疗史。
1.2 方法
1.2.1 仪器与试剂 Coulter Maxm全自动白细胞分析仪，试剂采用进口Coulter试剂。质控物为美国产5c-plus。按说明书操作。用一次性EDTA*K2抗凝的真空管采取静脉血2 ml。
, 百拇医药
1.2.2 手工分类 按《全国临床检验操作规程》操作。
1.2.3 患者样本的离心洗涤 样本经1 500 r/min离心5 min，吸取上层血浆，并补充同等量的ISOTON Ⅲ稀释液。
1.3 统计学处理 以均数±标准差(
±s)表示，统计学用方差齐性检验后t检验处理。2 结果
总胆红素浓度大于150 μ mol/L的样本用Coul-ter Maxm血细胞分析仪测定白细胞分类结果，有32例无法分类。其他18例的结果见表1。黄疸样本离心洗涤后用Coulter Maxm血细胞分析仪白细胞分类结果与离心洗涤前后手工分类结果见表2。
表1 黄疸样本与正常人的仪器分类结果比较(
±s，%) 组别, 百拇医药
例
数
嗜中性
粒细胞
淋巴细胞
单核细胞
嗜酸性
粒细胞
嗜碱性
粒细胞
黄疸组
18
30.3±35.2*
, 百拇医药
54.4±34.1*
11.3±5.8*
3.2±1.7
1.2±0.5
正常组
68
55.2±24.6
31.1±18.6
6.2±4.1
1.5±0.8
0.6±0.3
注：与正常组比较*P<0.01表2 重度黄疸样本离心洗涤后的仪器分类与离心洗涤前后手工分类结果比较(n=32，
±s，%) 样本处理, 百拇医药
嗜中性
粒细胞
淋巴
细胞
单核
细胞
嗜酸性
粒细胞
嗜碱性
粒细胞
离心后仪器
51.2±27.3
33.8±26.1
, 百拇医药
8.2±5.2
3.4±3.2
0.5±0.6
离心前手工
50.1±26.8
35.7±22.1
7.4±6.1
3.0±2.8
0.4±0.5
离心后手工
52.5±28.8
35.1±21.4
, http://www.100md.com
7.8±5.4
3.1±2.9
0.4±0.6
表1显示，重度黄疸样本有32例用Coulter Maxm血细胞分析仪无法测定白细胞分类，其他18例样本白细胞分类结果与正常人对照组结果比较，嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞结果均差异有显著意义(P<0.01)；表2示离心洗涤后的黄疸样本用Coulter Maxm血细胞分析仪白细胞分类结果与离心前后手工法分类结果比较，嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞结果均差异无显著意义(均P>0.05)。离心洗涤前的Coulter Maxm血细胞分析仪的白细胞分类出现了不正常的分类图形(图1)，与离心洗涤后白细胞分类图形(图2)比较有显著改变。
图1 黄疸样本离心洗涤
, http://www.100md.com
前白细胞分类图
图2 黄疸样本离心洗涤
后白细胞分类图
3 讨论
Coulter Maxm仪器是运用VCS原理进行白细胞五项分类的。它同时加入溶血剂(erythrolyse)和稳定剂(stabilyse)使白细胞可以基本上保持与体内形态完全相同的自然状态，然后接受体积(volume，V)、电导法(conductivity，C)、光散射(Scatter，S)三种方法的同时检测，从而得出分类结果。我们在临床应用中，绝大部分样本运用VCS法均能很好的进行白细胞五分类。但是VCS法五分类也会受到样本本身因素、标本放置的时间和温度、仪器状态等各种因素的影响。从表1我们看出，当血浆总胆红素浓度高于150 μ mol/L时，对VCS法白细胞分类有很大影响，甚至有一部分在常规操作下分类失败。而且随着胆红素浓度的增高，影响也会越明显。
, 百拇医药
从表2看出，洗涤后的样品用该仪器与显微镜下分类嗜中性粒细胞，淋巴细胞，单核细胞，嗜酸性粒细胞，嗜碱性粒细胞，两者结果差异无显著意义，与李辉[2]报道的正常人血标本两种方法比较的结果有很好的一致性。因而当重度黄疸的样品经过洗涤后，消除原来血浆的干扰之后，运用Coulter Maxm血细胞分析仪重新进行白细胞五项分类计数的结果是准确的、可信的。
通过洗涤前的白细胞分布图形(图1)与洗涤后的白细胞分布图形(图2)比较，我们可以看到，高浓度的胆红素可同时对V、C、S三种方法产生干扰，从而影响分类质量，甚至导致分类失败。我们认为，当高胆红素浓度的样本吸样测定后，虽然经过机器内稀释液的稀释，仍然可以保留一定浓度的胆红素。这部分胆红素极有可能与稳定剂起作用，从而不能使白细胞处于原态下进行测定，影响分类质量。当然，VCS法对白细胞进行分类测定的同时，周围保留的一定浓度的胆红素产生的颜色干扰，也是影响分类质量的另一个重要原因。所以当血浆因素(黄疸，重度溶血等因素)影响VCS法分类结果时，离心洗涤是一种非常理想的消除影响的方法。
参考文献
1，Bulgen A，李红丽，张镇西. 应用VCS技术的白细胞分类和计数. 激光生物学报，1997，6(4)：1247.
2，李 辉，雷汉题，李世新. Coulter Maxm全自动血细胞分析仪白细胞五项分类的评价及应用体会. 实用医学检验杂志，1996，3(4)：18., http://www.100md.com