HPLC法测定汉丹肝乐胶囊中芍药苷的含量
作者：冯艳明 叶丽梅 杨继红
单位：冯艳明 叶丽梅(贵阳制药厂 550004)；杨继红(贵阳医学院)
关键词：汉丹肝乐胶囊；芍药苷；HPLC法
中草药000513摘 要 采用HPLC法测定汉丹肝乐胶囊中芍药苷的含量。色谱柱C18柱，流动相甲醇-水(28∶72)，检测波长230 nm，流速1 mL/min，柱温室温，灵敏度0.04 AUFS。结果芍药苷在0.049～0.868 μg范围线性良好，r=0.999 9，平均回收率为99.3%(n=5)，RSD=2.09%。
汉丹肝乐胶囊系由汉防己、丹参、赤芍、黄芪、银杏叶等5 味中药制成的复方制剂，具有活血化瘀、舒肝理气的功能，用于治疗各种病因所致的肝纤维化及肝硬化。为了更好地控制质量，我们采用HPLC法对君药之一的赤芍主要成分芍药苷进行含量测定。经方法学考察，认为本法简便、准确、无干扰，可用于本品质量控制。
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1 仪器、试剂与药品
IC-9A高效液相色谱仪(日本岛津)，SPD-6AV检测器，C-R6A积分仪；GQ250 超声波清洗器(上海超声仪器厂)；751紫外分光光度计(日本岛津)。
芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所0736-9608，HPLC归一化法测得含量为97.06%)；汉丹肝乐胶囊及其缺赤芍空白样品(自制)；试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：YWG-C18柱(4.6 mm×250 mm，粒径10 μm)，流动相甲醇-水(28∶72)，检测波长230 nm，柱温室温，流速1 mL/min，灵敏度0.04 AUFS，进样量10 μL。此条件下，样品中芍药苷与其他组分峰达到基线分离，理论塔板数按芍药苷峰计算为4 619，芍药苷保留时间为14.44 min，空白试验表明无干扰。
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2.2 实验条件选择：①检测波长：据文献值[1]，并对芍药苷的50%乙醇溶液进行紫外波长扫描，结果表明芍药苷在230 nm处呈最大吸收，以此为检测波长，经HPLC试验，图谱分离效果好。②流动相：据文献值[2，3]，大都采用甲醇-水系统，我们采用不同比例的甲醇-水进行试验，结果表明选用甲醇-水(28∶72)为流动相，分离效果好。③提取溶剂与方法：曾采用水和50%乙醇为溶剂，分别以浸润后提取与直接提取、回流法与超声波振动法进行对比试验，结果差异不明显，以50%乙醇超声波振荡提取法较为简便，效果好。④提取时间：将供试品用50%乙醇进行超声波振荡，分别对15，30，45，60，90 min进行考察，结果表明用50%乙醇对供试品进行超声波振荡15 min，可将芍药苷提取完全。
2.3 供试品溶剂制备：①对照品溶液：精密称取芍药苷对照品，加50%乙醇制成每1 mL含芍药苷248 μg的溶液。②供试品溶液：取汉丹肝乐胶囊内容物适量，研细，精密称取0.05 g，置25 mL容量瓶中，加50%乙醇20 mL，超声波振荡15 min，冷后加50%乙醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。③空白溶液：取缺赤芍空白对照品研细，按供试品溶液制备方法进行制备，得空白对照品溶液。
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2.4 线性考察：精密吸取芍药苷对照品溶液(248 μg/mL)0.2，0.5，1.0，1.5，2.5，3.5 mL，分别置10 mL量瓶中，加50%乙醇至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μL，注入高效液相色谱仪，依法测定峰面积，以峰面积对芍药苷进样量进行回归处理，得回归方程Y=44 513X-168,r=0.999 9，表明芍药苷在0.049～0.868 μg范围内具有良好线性关系。
2.5 精密度试验：①对照品试验：精密吸取对照品溶液5 μL，重复进样，依法测定峰面积，求得RSD=2.29%(n=6)。②供试品试验：精密吸取供试品溶液10 μL，同上法试验，求得RSD=0.55%(n=5)。
2.6 稳定性试验：①日内稳定性试验：精密吸取供试品溶液于0，1，2.5，4，6，8 h各进样一次，求得8 h内RSD=0.8%(n=6)。②日间稳定性试验：精密吸取供试品溶液，于0，24，48，72 h进样测定，求得RSD=1.14%(n=4)。
, 百拇医药
2.7 重复性试验：取同一批号汉丹肝乐胶囊内容物适量，研细，按供试品溶液制备方法平行处理数份，依法测定，求得RSD=1.75%(n=6)。
2.8 回收率试验：采用加样回收法。精密称取已测知含量的样品数份，分别精密加入适量的芍药苷对照品，按供试品溶液制备方法进行处理，依法测定，计算回收率为99.30%，RSD=2.09%(n=5)。
2.9 样品含量测定：分别取不同批号样品，按供试品溶液制备方法进行处理，依法测定，结果见表1。
表1 样品中芍药苷含量测定 批号
含 量(%)
%
980201
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1.55
1.52
1.54
980501
1.54
1.56
1.55
980901
2.15
2.14
2.15
980201
1.68
, 百拇医药
1.66
1.67
990401
2.13
2.10
2.12
2.10 药材含量测定：分别取3 批赤芍药材，干燥，粉碎(60 目)，取细粉按供试品溶液制备方法进行处理，依法测定，结果见表2。表2 赤芍中芍药苷含量测定 购买时间(年-月)
含 量(%)%
1998-08
2.70
, http://www.100md.com
2.71
2.71
1998-02
2.99
3.03
3.01
1999-09
3.77
3.84
3.80
3 讨论
3.1 据中华人民共和国药典[1]要求赤芍中含芍药苷不得少于2.0%，本文所测定药材含量均达到规定，为产品质量控制奠定了良好的基础。
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3.2 据不同批号样品芍药苷含量测定结果表明，各批号之间有较大差异，揭示在保证药材质量的前题下生产过程中需要进一步优化，稳定生产工艺，保证产品质量稳定可控。
3.3 本文测定方法经各项试验考察，结果表明方法灵敏、可靠、重现性好，可用于本品质量控制。
Address: Feng Yanming, Guiyang Phrmaceutical Factory, Guiyang
贵州省摼拧の鍞攻关项目，黔科合计字(1996)1028号
冯艳明 女，工程师。1982年毕业于华西医科大学化学制药专业，学士学位。从 事制药工程工艺设计、生产技术管理及天然药物开发研制。曾在《中国中药杂志》、《中成 药》等杂志上刊登论文数篇。
参 考 文 献
1，中华人民共和国药典(95版一部).广州：广东科技出版社，1995：142
2，张世勤，等.中国中药杂志，1994，19(9)：549
3，王春明，等.药物分析杂志，1995，15(2)：52
收稿1999-04-02, http://www.100md.com
单位：冯艳明 叶丽梅(贵阳制药厂 550004)；杨继红(贵阳医学院)
关键词：汉丹肝乐胶囊；芍药苷；HPLC法
中草药000513摘 要 采用HPLC法测定汉丹肝乐胶囊中芍药苷的含量。色谱柱C18柱，流动相甲醇-水(28∶72)，检测波长230 nm，流速1 mL/min，柱温室温，灵敏度0.04 AUFS。结果芍药苷在0.049～0.868 μg范围线性良好，r=0.999 9，平均回收率为99.3%(n=5)，RSD=2.09%。
汉丹肝乐胶囊系由汉防己、丹参、赤芍、黄芪、银杏叶等5 味中药制成的复方制剂，具有活血化瘀、舒肝理气的功能，用于治疗各种病因所致的肝纤维化及肝硬化。为了更好地控制质量，我们采用HPLC法对君药之一的赤芍主要成分芍药苷进行含量测定。经方法学考察，认为本法简便、准确、无干扰，可用于本品质量控制。
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1 仪器、试剂与药品
IC-9A高效液相色谱仪(日本岛津)，SPD-6AV检测器，C-R6A积分仪；GQ250 超声波清洗器(上海超声仪器厂)；751紫外分光光度计(日本岛津)。
芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所0736-9608，HPLC归一化法测得含量为97.06%)；汉丹肝乐胶囊及其缺赤芍空白样品(自制)；试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：YWG-C18柱(4.6 mm×250 mm，粒径10 μm)，流动相甲醇-水(28∶72)，检测波长230 nm，柱温室温，流速1 mL/min，灵敏度0.04 AUFS，进样量10 μL。此条件下，样品中芍药苷与其他组分峰达到基线分离，理论塔板数按芍药苷峰计算为4 619，芍药苷保留时间为14.44 min，空白试验表明无干扰。
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2.2 实验条件选择：①检测波长：据文献值[1]，并对芍药苷的50%乙醇溶液进行紫外波长扫描，结果表明芍药苷在230 nm处呈最大吸收，以此为检测波长，经HPLC试验，图谱分离效果好。②流动相：据文献值[2，3]，大都采用甲醇-水系统，我们采用不同比例的甲醇-水进行试验，结果表明选用甲醇-水(28∶72)为流动相，分离效果好。③提取溶剂与方法：曾采用水和50%乙醇为溶剂，分别以浸润后提取与直接提取、回流法与超声波振动法进行对比试验，结果差异不明显，以50%乙醇超声波振荡提取法较为简便，效果好。④提取时间：将供试品用50%乙醇进行超声波振荡，分别对15，30，45，60，90 min进行考察，结果表明用50%乙醇对供试品进行超声波振荡15 min，可将芍药苷提取完全。
2.3 供试品溶剂制备：①对照品溶液：精密称取芍药苷对照品，加50%乙醇制成每1 mL含芍药苷248 μg的溶液。②供试品溶液：取汉丹肝乐胶囊内容物适量，研细，精密称取0.05 g，置25 mL容量瓶中，加50%乙醇20 mL，超声波振荡15 min，冷后加50%乙醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。③空白溶液：取缺赤芍空白对照品研细，按供试品溶液制备方法进行制备，得空白对照品溶液。
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2.4 线性考察：精密吸取芍药苷对照品溶液(248 μg/mL)0.2，0.5，1.0，1.5，2.5，3.5 mL，分别置10 mL量瓶中，加50%乙醇至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μL，注入高效液相色谱仪，依法测定峰面积，以峰面积对芍药苷进样量进行回归处理，得回归方程Y=44 513X-168,r=0.999 9，表明芍药苷在0.049～0.868 μg范围内具有良好线性关系。
2.5 精密度试验：①对照品试验：精密吸取对照品溶液5 μL，重复进样，依法测定峰面积，求得RSD=2.29%(n=6)。②供试品试验：精密吸取供试品溶液10 μL，同上法试验，求得RSD=0.55%(n=5)。
2.6 稳定性试验：①日内稳定性试验：精密吸取供试品溶液于0，1，2.5，4，6，8 h各进样一次，求得8 h内RSD=0.8%(n=6)。②日间稳定性试验：精密吸取供试品溶液，于0，24，48，72 h进样测定，求得RSD=1.14%(n=4)。
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2.7 重复性试验：取同一批号汉丹肝乐胶囊内容物适量，研细，按供试品溶液制备方法平行处理数份，依法测定，求得RSD=1.75%(n=6)。
2.8 回收率试验：采用加样回收法。精密称取已测知含量的样品数份，分别精密加入适量的芍药苷对照品，按供试品溶液制备方法进行处理，依法测定，计算回收率为99.30%，RSD=2.09%(n=5)。
2.9 样品含量测定：分别取不同批号样品，按供试品溶液制备方法进行处理，依法测定，结果见表1。
表1 样品中芍药苷含量测定 批号
含 量(%)
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2.10 药材含量测定：分别取3 批赤芍药材，干燥，粉碎(60 目)，取细粉按供试品溶液制备方法进行处理，依法测定，结果见表2。表2 赤芍中芍药苷含量测定 购买时间(年-月)
含 量(%)
%1998-08
2.70
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2.71
2.71
1998-02
2.99
3.03
3.01
1999-09
3.77
3.84
3.80
3 讨论
3.1 据中华人民共和国药典[1]要求赤芍中含芍药苷不得少于2.0%，本文所测定药材含量均达到规定，为产品质量控制奠定了良好的基础。
, 百拇医药
3.2 据不同批号样品芍药苷含量测定结果表明，各批号之间有较大差异，揭示在保证药材质量的前题下生产过程中需要进一步优化，稳定生产工艺，保证产品质量稳定可控。
3.3 本文测定方法经各项试验考察，结果表明方法灵敏、可靠、重现性好，可用于本品质量控制。
Address: Feng Yanming, Guiyang Phrmaceutical Factory, Guiyang
贵州省摼拧の鍞攻关项目，黔科合计字(1996)1028号
冯艳明 女，工程师。1982年毕业于华西医科大学化学制药专业，学士学位。从 事制药工程工艺设计、生产技术管理及天然药物开发研制。曾在《中国中药杂志》、《中成 药》等杂志上刊登论文数篇。
参 考 文 献
1，中华人民共和国药典(95版一部).广州：广东科技出版社，1995：142
2，张世勤，等.中国中药杂志，1994，19(9)：549
3，王春明，等.药物分析杂志，1995，15(2)：52
收稿1999-04-02, http://www.100md.com