大鼠脊髓压迫伤后PMN浸润的变化及MPS的治疗作用
作者：袁涛 鞠明兵
单位：袁涛(第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所肝胆外科)；鞠明兵(第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第二研究室；重庆 400042)
关键词：脊髓损伤；多形核白细胞；甲基强的松龙
第三军医大学学报000632 中图法分类号： R651.2 文献标识码： B
文章编号：1000-5404(2000)06-0526-01
Changes of polymorphonuclear leukocytes infiltration after spinal cord compression injury in rats and the therapeutic effects of methylprednisolone
, 百拇医药
脊髓损伤在战时和平时的创伤发生率中均占有一定的比例，其原发损伤后继发性损伤是致瘫的重要原因，但确切机制目前尚不清楚。近年来多形核白细胞(PMN)在继发性脊髓损伤中的作用受到重视[1]，研究PMN在脊髓继发性损伤中的作用及其机制具有重要意义。
1 材料与方法
1.1 动物的压迫损伤模型 选用77只Wistar大鼠，体重200～300 g，腹腔麻醉后，俯卧位固定，于L1水平行椎板切除术，暴露脊髓。动物稳定1 h后，用30 g重物压L1节段脊髓20 min。
1.2 实验分组1.2.1 分组 实验共分3组：伤前组、损伤组和甲基强的松龙(MPS)治疗组：①损伤组(n=35)：以30 g重物压迫L1脊髓20 min复制损伤模型。②治疗组(n=35)：复制损伤模型后，于伤后30 min首次给予MPS 30 mg.kg-1.h-1剂量维持、持续23 h。③伤前组(n=7)：行椎板切除术，但不以重物压迫脊髓。
, 百拇医药
1.2.2 时相点 损伤组及治疗组，设伤后2、4、6、12、24 h共5个时相点；伤前组设椎板切除后60 min一个点，每时相点7只大鼠。
1.3 观察指标
1.3.1用紫外分光光度法测损伤脊髓组织髓质过氧化物酶(MPO)活性。
1.3.2 改良TBA比色法测脊髓组织丙二醛(MDA)含量。
1.3.3 病理学观察 取得各时相点损伤脊髓后，于多聚甲醛液中固定。光镜标本经石蜡包埋，切片，HE染色，用OLYMPUS显微照像系统观察并照像；电镜标本作常规包埋、定位、切片、染色，用JEM-2000型透射电子显微镜观察并照像。
1.4 统计学处理
数据资料均以
±s表示。组间比较用Students′s t进行统计分析，指标的变化趋势间行相关分析。
, http://www.100md.com
2 结果
2.1 脊髓压迫伤后组织MPO的变化，见表1
2.2 脊髓压迫伤后组织MDA的变化，见表2
2.3 病理学观察 脊髓损伤后，从光镜可观察到组织水肿，神经元肿胀及核固缩，弥漫性出血，多形核白细胞浸润组织。电镜证实伤后6 h可见微血管内有PMN粘附，浸润。治疗组则血管损伤明显减轻。表1 脊髓组织MPO活性的变化(±s，V/g)
伤前
t/h
2
4
, http://www.100md.com
6
12
24
伤前组
0.14±0.023
损伤组
0.71±0.06* *
0.88±0.06* *
0.79±0.05* *
0.73±0.05**
0.49±0.02**
, http://www.100md.com
治疗组
0.63±0.05* * #
0.78±0.07* * #
0.66±0.06**##
0.61±0.07**##
0.44±0.05**#
* *：P<0.01与伤前组比较;#：P<0.05，# #：P<0.01与损伤组比较
表2 脊髓组织MDA含量变化(±s，CB/nmol.ml-1)
, 百拇医药
伤前
t/h
2
4
6
12
24
伤前组
36.47±3.91
损伤组
138.05±2.74* *
147.68±3.52* *
, 百拇医药
168.04±4.34* *
155.44±3.49* *
108.38±3.41* *
治疗组
115.41±3.33* *
123.16±5.53* * # #
150.70±3.22* * # #
139.07±3.8* * # #
90.81±5.06* * # #
, http://www.100md.com
* *：P<0.01与伤前组比较；# #：P<0.01与损伤组比较
3 讨论
近年来的实验研究表明[2，3]，炎性反应是导致机体组织继发性损伤的重要原因。多种脏器的急慢性损伤，疾病与炎性反应，与PMNLS浸润密切相关。研究证实，在中枢神经系统创伤，缺血后，损伤脑或脊髓组织MPO活性显著升高[4]。但目前尚未见同步动态检测脊髓损伤后浸润PMNLS和MDA变化以探索白细胞在脊髓损伤中作用机理的报道。本实验同步检测了大鼠脊髓压迫损伤后组织MPO活性及MDA含量的变化，探索脊髓损伤后PMNLS浸润的变化规律及其可能作用机制。
实验观察到、伤前组MPO，MDA水平较低，脊髓损伤后2 h即见MPO、MDA增高，分别于4 h、6 h达高峰。光镜、电镜组织观察进一步证实，多形核白细胞确于损伤早期即浸润聚于损伤节段脊髓组织。MDA与MPO相关性统计分析结果表明，脊髓损伤后PMNLS浸润与损伤脊髓组织的脂质过氧化反应显著相关。此结果提示，大鼠脊髓重度压迫损伤后早期，激活的多形核白细胞大量浸润，聚集于受损脊髓组织，可能是导致脊髓损伤的继发性损伤的一个重要原因，其可能的一个作用机制是加速损伤脊髓组织的脂质过氧化反应。应用甲基强的松龙后，MPO，MDA水平显著低于损伤后水平，可能与抑制多形核白细胞浸润，减轻脂质过氧化的作用有关。
, 百拇医药
作者简介：袁涛(1968-)，男，河南省信阳市人，主治医师，讲师，主要从事胆道肿瘤的诊断与治疗方面的研究。电话：(023)68757247
参考文献：
[1] Katch S, Ikata T, Tsubo M, et al. Possible implication of leukocytes in secondary pathological changes after spinal cord injury[J]. Injury,1997,28(3):215-217.
[2] Elneiboum A M, Falkep, Axelssonl, et al. Leukocyte activation detected by increased plasma levels of inflammatory mediators in patients with ischemic cerebrovascular disease[J]. Stroke,1996,27(10):1 734-1 738.
, 百拇医药
[3] Nakauchi K, Ikata T, Katohs, et al. Effects of lecithinized superoxide dismutase on rat spinal card injury[J]. J Neurotrauma,1996,13(10):573-582.
[4] Yanakak, Camarata P T, Spellman S R, et al. Laminin peptide ameliorates brain injury by inhibiting leukocyte accumulation in a rat model of transient focal cerebral ischemia[J]. J Cereb Blood Flow Metab,1997,17(3):605-611.
收稿日期：1999-02-03；修回日期：1999-12-22, 百拇医药
单位：袁涛(第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所肝胆外科)；鞠明兵(第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第二研究室；重庆 400042)
关键词：脊髓损伤；多形核白细胞；甲基强的松龙
第三军医大学学报000632 中图法分类号： R651.2 文献标识码： B
文章编号：1000-5404(2000)06-0526-01
Changes of polymorphonuclear leukocytes infiltration after spinal cord compression injury in rats and the therapeutic effects of methylprednisolone
, 百拇医药
脊髓损伤在战时和平时的创伤发生率中均占有一定的比例，其原发损伤后继发性损伤是致瘫的重要原因，但确切机制目前尚不清楚。近年来多形核白细胞(PMN)在继发性脊髓损伤中的作用受到重视[1]，研究PMN在脊髓继发性损伤中的作用及其机制具有重要意义。
1 材料与方法
1.1 动物的压迫损伤模型 选用77只Wistar大鼠，体重200～300 g，腹腔麻醉后，俯卧位固定，于L1水平行椎板切除术，暴露脊髓。动物稳定1 h后，用30 g重物压L1节段脊髓20 min。
1.2 实验分组1.2.1 分组 实验共分3组：伤前组、损伤组和甲基强的松龙(MPS)治疗组：①损伤组(n=35)：以30 g重物压迫L1脊髓20 min复制损伤模型。②治疗组(n=35)：复制损伤模型后，于伤后30 min首次给予MPS 30 mg.kg-1.h-1剂量维持、持续23 h。③伤前组(n=7)：行椎板切除术，但不以重物压迫脊髓。
, 百拇医药
1.2.2 时相点 损伤组及治疗组，设伤后2、4、6、12、24 h共5个时相点；伤前组设椎板切除后60 min一个点，每时相点7只大鼠。
1.3 观察指标
1.3.1用紫外分光光度法测损伤脊髓组织髓质过氧化物酶(MPO)活性。
1.3.2 改良TBA比色法测脊髓组织丙二醛(MDA)含量。
1.3.3 病理学观察 取得各时相点损伤脊髓后，于多聚甲醛液中固定。光镜标本经石蜡包埋，切片，HE染色，用OLYMPUS显微照像系统观察并照像；电镜标本作常规包埋、定位、切片、染色，用JEM-2000型透射电子显微镜观察并照像。
1.4 统计学处理
数据资料均以
±s表示。组间比较用Students′s t进行统计分析，指标的变化趋势间行相关分析。, http://www.100md.com
2 结果
2.1 脊髓压迫伤后组织MPO的变化，见表1
2.2 脊髓压迫伤后组织MDA的变化，见表2
2.3 病理学观察 脊髓损伤后，从光镜可观察到组织水肿，神经元肿胀及核固缩，弥漫性出血，多形核白细胞浸润组织。电镜证实伤后6 h可见微血管内有PMN粘附，浸润。治疗组则血管损伤明显减轻。表1 脊髓组织MPO活性的变化(
±s，V/g)伤前
t/h
2
4
, http://www.100md.com
6
12
24
伤前组
0.14±0.023
损伤组
0.71±0.06* *
0.88±0.06* *
0.79±0.05* *
0.73±0.05**
0.49±0.02**
, http://www.100md.com
治疗组
0.63±0.05* * #
0.78±0.07* * #
0.66±0.06**##
0.61±0.07**##
0.44±0.05**#
* *：P<0.01与伤前组比较;#：P<0.05，# #：P<0.01与损伤组比较
表2 脊髓组织MDA含量变化(
±s，CB/nmol.ml-1), 百拇医药
伤前
t/h
2
4
6
12
24
伤前组
36.47±3.91
损伤组
138.05±2.74* *
147.68±3.52* *
, 百拇医药
168.04±4.34* *
155.44±3.49* *
108.38±3.41* *
治疗组
115.41±3.33* *
123.16±5.53* * # #
150.70±3.22* * # #
139.07±3.8* * # #
90.81±5.06* * # #
, http://www.100md.com
* *：P<0.01与伤前组比较；# #：P<0.01与损伤组比较
3 讨论
近年来的实验研究表明[2，3]，炎性反应是导致机体组织继发性损伤的重要原因。多种脏器的急慢性损伤，疾病与炎性反应，与PMNLS浸润密切相关。研究证实，在中枢神经系统创伤，缺血后，损伤脑或脊髓组织MPO活性显著升高[4]。但目前尚未见同步动态检测脊髓损伤后浸润PMNLS和MDA变化以探索白细胞在脊髓损伤中作用机理的报道。本实验同步检测了大鼠脊髓压迫损伤后组织MPO活性及MDA含量的变化，探索脊髓损伤后PMNLS浸润的变化规律及其可能作用机制。
实验观察到、伤前组MPO，MDA水平较低，脊髓损伤后2 h即见MPO、MDA增高，分别于4 h、6 h达高峰。光镜、电镜组织观察进一步证实，多形核白细胞确于损伤早期即浸润聚于损伤节段脊髓组织。MDA与MPO相关性统计分析结果表明，脊髓损伤后PMNLS浸润与损伤脊髓组织的脂质过氧化反应显著相关。此结果提示，大鼠脊髓重度压迫损伤后早期，激活的多形核白细胞大量浸润，聚集于受损脊髓组织，可能是导致脊髓损伤的继发性损伤的一个重要原因，其可能的一个作用机制是加速损伤脊髓组织的脂质过氧化反应。应用甲基强的松龙后，MPO，MDA水平显著低于损伤后水平，可能与抑制多形核白细胞浸润，减轻脂质过氧化的作用有关。
, 百拇医药
作者简介：袁涛(1968-)，男，河南省信阳市人，主治医师，讲师，主要从事胆道肿瘤的诊断与治疗方面的研究。电话：(023)68757247
参考文献：
[1] Katch S, Ikata T, Tsubo M, et al. Possible implication of leukocytes in secondary pathological changes after spinal cord injury[J]. Injury,1997,28(3):215-217.
[2] Elneiboum A M, Falkep, Axelssonl, et al. Leukocyte activation detected by increased plasma levels of inflammatory mediators in patients with ischemic cerebrovascular disease[J]. Stroke,1996,27(10):1 734-1 738.
, 百拇医药
[3] Nakauchi K, Ikata T, Katohs, et al. Effects of lecithinized superoxide dismutase on rat spinal card injury[J]. J Neurotrauma,1996,13(10):573-582.
[4] Yanakak, Camarata P T, Spellman S R, et al. Laminin peptide ameliorates brain injury by inhibiting leukocyte accumulation in a rat model of transient focal cerebral ischemia[J]. J Cereb Blood Flow Metab,1997,17(3):605-611.
收稿日期：1999-02-03；修回日期：1999-12-22, 百拇医药