DNA倍体分析在恶性胸腔积液诊断中的应用
作者：邵宏涛 孙丽华 谷伟 王书奎
单位：邵宏涛(南京医科大学附属第一医院呼吸科，江苏南京 210006)；孙丽华(南京医科大学附属第一医院呼吸科，江苏南京 210006)；谷伟(南京医科大学附属第一医院呼吸科，江苏南京 210006)；王书奎(南京市医学放射免疫检测中心)
关键词：流式细胞术；DNA倍体；胸腔积液
医学研究生学报000606摘要： 目的：应用流式细胞术(FCM)测定胸腔积液细胞DNA倍体，以探讨其在恶性胸腔积液诊断中的价值。 方法：35例胸水分为恶性、良性两组。用FCM检测胸水中DNA倍体，同时测定CEA、Cyfra21-1。 结果：用FCM检测恶性胸水，其敏感性、特异性、准确性与CEA、Cyfra 21-1相比，均有显著差异(P<0.05)。若三种方式合用，则诊断恶性胸水的敏感性达95.7%，特异性达100%。 结论：FCM进行DNA倍体分析是良、恶性胸水鉴别的一项指标，对诊断恶性胸水有重要价值。
, 百拇医药
中图分类号： R446.4 文献标识码： A
文章编号： 1008-8199(2000)06-0369-02
The diagnostic values of DNA analysis for malignant pleural fluids
SHAO Hong-tao,SUN Li-hua,GU Wei
(Department of Respiratology,the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University)
WANG Shu-kui
(Center of Radioimmunity of Nanjing First Hospital)
, 百拇医药
Abstract:Objectives:To investigate the diagnostic values of DNA analysis for malignant pleural fluids by Flow Cytometry(FCM). Methods:Using FCM to detect DNA aneuploidy in malignant and benign pleural fluids. Results:Both the sensitivity and specificity of DNA analysis were better than CEA,Cyfra 21-1 (P<0.05).When used the three methods altogether,the sensitivity was 95.7%,the specificity was 100%. Conclusions:DNA analysis has important value in diagnosis for malignant pleural fluids.
, http://www.100md.com
Key words:Flow Cytometry; DNA analysis; Pleural fluids
0 引 言
流式细胞术(flow cytometry,FCM)是近几年出现的一种对悬液中单个细胞进行快速测量并自动分析的高新技术。本研究应用FCM测定胸水细胞DNA倍体，以探讨其在恶性胸腔积液诊断中的价值，并与CEA、Cyfra 21-1进行对比。
1 资料与方法
1.1 研究对象 收集35例中等胸腔积液的病例，其中男20例，女15例，年龄为28～85(平均60)岁。根据组织病理检查结果将其分为两组，其中恶性组23例(鳞癌2例，腺癌14例，小细胞未分化癌2例，转移癌5例)；良性组12例(结核性胸水9例，脓胸1例，肺梗死1例，心力衰竭1例)。
, 百拇医药 1.2 实验方法 仪器：FACS Calibur流式细胞仪，美国Becton Dickinson公司产品。胸水标本经胸腔穿刺获得。
1.2.1 胸水CEA、Cyfra 21-1 用放射免疫法测定。
1.2.2 胸水细胞DNA倍体测定 ①胸水200～300 ml,加入抗凝剂(枸橼酸钠)5 ml,放入容器中置0～4℃冰箱静置12 h，弃上清液。②留取沉淀液10～20 ml,吸入试管内，用等渗盐水洗3次，以1 500 r/min离心沉淀5 min。③加入冷枸橼酸缓冲液5 ml，在室温下放置20 min。④用300目筛网过滤后，以PBS洗去枸橼酸缓冲液，离心沉淀弃上清液，加入70%乙醇固定备检。⑤样品均用FACS Calibur流式细胞仪测定。以波长635 nm，输出功率为15 W的氩离子激光器作为光源，测定前用鸡血红细胞对仪器进行调整，使峰的变异系数(CV)<5%。每例测定10 000个细胞，测定结果以单参数组方图显示。用Macintosz计算机处理数据。以健康人外周血淋巴细胞作为正常二倍体标准对照。
, 百拇医药
1.3 诊断标准
1.3.1 Cyfra 21-1、CEA值测定 用胸水中CEA≥15 μg/L、Cyfra 21-1≥3.3 μg/L作为阳性界值。
1.3.2 胸水DNA倍体测定 根据文献[1，2]制定FCM诊断肿瘤细胞的标准如下：①发现DNA非整倍体细胞。②如无明显的非整倍体细胞峰，但有一个突出的四倍体细胞峰和>15%的超二倍体细胞(S期细胞)，并伴有G0/G1峰的CV值>9%。③无明显的非整倍体细胞峰，但G0/G1峰的CV值增大，并伴有>10%～15%超二倍体细胞峰和一个突出的四倍体细胞峰。
1.4 统计学处理 用χ2检验。以P<0.05为有显著差异。
2 结 果
, http://www.100md.com
根据上述诊断标准，测定结果如下(表1、表2、表3)。三项联合检测的敏感性达95.7%，特异性100%，准确性97.1%。
表1 三种方法对恶性胸腔积液诊断的敏感性比较
Table 1 Compare of sensitivity between each group Groups
n
Positive
n
Sensitivity
(%)
FCM*
, 百拇医药 23
19
82.6
CEA
23
12
52.2
Cyfra 21-1
23
17
73.9
*P<0.01
表2 三种方法对恶性胸腔积液诊断的特异性比较
, 百拇医药
Table 2 Compare of specificity between each group Groups
n
Positive
n
Specificity
(%)
FCM*
12
1
91.2
CEA
, http://www.100md.com 12
5
58.3
Cyfra 21-1
12
2
83.3
*P<0.05表3 三种方法对恶性胸腔积液诊断准确性比较
Table 3 Compare of accuracy between each group Groups
n
Positive(n)
, 百拇医药
Accuracy(%)
FCM*
35
30
85.7
CEA
35
19
54.3
Cyfra21-1
35
27
77.1
, http://www.100md.com
*P<0.01
3 讨 论
用FCM分析肿瘤细胞的DNA倍体，并用来作为检测肿瘤细胞的一个标志，已得到越来越多的临床医师重视。本法出现假阴性有4/35例，其原因可能为[3～5]：①肿瘤为二倍体。②胸水中异倍体肿瘤细胞数量极少时，异倍体峰可能被正常的二倍体细胞所掩盖。③一些肿瘤细胞有染色体缺失，但其复制可平衡，使肿瘤细胞净DNA倍体在FCM的DNA分析时正常。
FCM DNA倍体分析可作为诊断恶性胸腔积液的一种方法，而且较为简单、易行。但其敏感性在不同文献中[6]相差很大，从38%～85%不等。本法得出的敏感性为82.6%，这种差别的原因主要在于DNA质量[7]。本法还证明，FCM DNA倍体分析敏感性、特异性、准确性均优于传统的CEA、Cyfra21-1测定(P<0.05)。如果三项指标同时检测，可明显提高诊断的敏感性及准确性。本研究证实了FCM DNA倍体分析是良、恶性胸水鉴别的一项指标，对诊断恶性胸腔积液有重要价值。
, 百拇医药
邵宏涛(1972-),女,山东东营人,医师,医学学士,从事呼吸内科专业.
参考文献：
[1] Kiein FA,Herr HW,Sogani PC,et al.Detection and follow-up of carcinoma of the urinary bladder by flow cytometry[J].Cancer,1982,50:389.
[2] Joseph E,Fuhr JE,Anthony A,et al.Flow cytometric analysis of pulmonary fluids and cells for the detection of maliganancies[J].AM J Pathol,1992,141(1):211.
[3] Bartal AH,Gazitt Zidan G,Vermeuben B,et al.Clinical and flow cytometry characteristics of malignant pleural effusions in patients after intracavitary administration of methyprednisolone acetate[J].Cancer,1991,67(10):3136-3140.
, http://www.100md.com
[4] Merkel DE,Mc Guire WL.Ploidy proliferative activity and prognosis DNA flow cytometry of solid tumor[J].Cancer,1990,65(4):1194-1205.
[5] Alaner KA,Klemi PJ,Kujari H,et al.Comparion of fresh ethanol preserved and paraffin embedded samples in DNA flow cytometry[J].Gytometry,1989,10(1):81-85.
[6] Yoss EB,David Berd,Jone R,et al.Flow Cytometric evaluation of bronchoscopic washings and lavage fluid for DNA aneuploidy as an adjunct in the dignosis of lung cancer and tumors metastatic to the lung[J].Chest,1989,96:54-59.
[7] Joseph E,Fuhr JE,Anthony A,et al.Flow Cytometric analysis of pulmonary fluids and cells for the detection of malignancies[J].American Journal of Pathology,1992,141(1):211-215.
2000-11-01, 百拇医药
单位：邵宏涛(南京医科大学附属第一医院呼吸科，江苏南京 210006)；孙丽华(南京医科大学附属第一医院呼吸科，江苏南京 210006)；谷伟(南京医科大学附属第一医院呼吸科，江苏南京 210006)；王书奎(南京市医学放射免疫检测中心)
关键词：流式细胞术；DNA倍体；胸腔积液
医学研究生学报000606摘要： 目的：应用流式细胞术(FCM)测定胸腔积液细胞DNA倍体，以探讨其在恶性胸腔积液诊断中的价值。 方法：35例胸水分为恶性、良性两组。用FCM检测胸水中DNA倍体，同时测定CEA、Cyfra21-1。 结果：用FCM检测恶性胸水，其敏感性、特异性、准确性与CEA、Cyfra 21-1相比，均有显著差异(P<0.05)。若三种方式合用，则诊断恶性胸水的敏感性达95.7%，特异性达100%。 结论：FCM进行DNA倍体分析是良、恶性胸水鉴别的一项指标，对诊断恶性胸水有重要价值。
, 百拇医药
中图分类号： R446.4 文献标识码： A
文章编号： 1008-8199(2000)06-0369-02
The diagnostic values of DNA analysis for malignant pleural fluids
SHAO Hong-tao,SUN Li-hua,GU Wei
(Department of Respiratology,the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University)
WANG Shu-kui
(Center of Radioimmunity of Nanjing First Hospital)
, 百拇医药
Abstract:Objectives:To investigate the diagnostic values of DNA analysis for malignant pleural fluids by Flow Cytometry(FCM). Methods:Using FCM to detect DNA aneuploidy in malignant and benign pleural fluids. Results:Both the sensitivity and specificity of DNA analysis were better than CEA,Cyfra 21-1 (P<0.05).When used the three methods altogether,the sensitivity was 95.7%,the specificity was 100%. Conclusions:DNA analysis has important value in diagnosis for malignant pleural fluids.
, http://www.100md.com
Key words:Flow Cytometry; DNA analysis; Pleural fluids
0 引 言
流式细胞术(flow cytometry,FCM)是近几年出现的一种对悬液中单个细胞进行快速测量并自动分析的高新技术。本研究应用FCM测定胸水细胞DNA倍体，以探讨其在恶性胸腔积液诊断中的价值，并与CEA、Cyfra 21-1进行对比。
1 资料与方法
1.1 研究对象 收集35例中等胸腔积液的病例，其中男20例，女15例，年龄为28～85(平均60)岁。根据组织病理检查结果将其分为两组，其中恶性组23例(鳞癌2例，腺癌14例，小细胞未分化癌2例，转移癌5例)；良性组12例(结核性胸水9例，脓胸1例，肺梗死1例，心力衰竭1例)。
, 百拇医药 1.2 实验方法 仪器：FACS Calibur流式细胞仪，美国Becton Dickinson公司产品。胸水标本经胸腔穿刺获得。
1.2.1 胸水CEA、Cyfra 21-1 用放射免疫法测定。
1.2.2 胸水细胞DNA倍体测定 ①胸水200～300 ml,加入抗凝剂(枸橼酸钠)5 ml,放入容器中置0～4℃冰箱静置12 h，弃上清液。②留取沉淀液10～20 ml,吸入试管内，用等渗盐水洗3次，以1 500 r/min离心沉淀5 min。③加入冷枸橼酸缓冲液5 ml，在室温下放置20 min。④用300目筛网过滤后，以PBS洗去枸橼酸缓冲液，离心沉淀弃上清液，加入70%乙醇固定备检。⑤样品均用FACS Calibur流式细胞仪测定。以波长635 nm，输出功率为15 W的氩离子激光器作为光源，测定前用鸡血红细胞对仪器进行调整，使峰的变异系数(CV)<5%。每例测定10 000个细胞，测定结果以单参数组方图显示。用Macintosz计算机处理数据。以健康人外周血淋巴细胞作为正常二倍体标准对照。
, 百拇医药
1.3 诊断标准
1.3.1 Cyfra 21-1、CEA值测定 用胸水中CEA≥15 μg/L、Cyfra 21-1≥3.3 μg/L作为阳性界值。
1.3.2 胸水DNA倍体测定 根据文献[1，2]制定FCM诊断肿瘤细胞的标准如下：①发现DNA非整倍体细胞。②如无明显的非整倍体细胞峰，但有一个突出的四倍体细胞峰和>15%的超二倍体细胞(S期细胞)，并伴有G0/G1峰的CV值>9%。③无明显的非整倍体细胞峰，但G0/G1峰的CV值增大，并伴有>10%～15%超二倍体细胞峰和一个突出的四倍体细胞峰。
1.4 统计学处理 用χ2检验。以P<0.05为有显著差异。
2 结 果
, http://www.100md.com
根据上述诊断标准，测定结果如下(表1、表2、表3)。三项联合检测的敏感性达95.7%，特异性100%，准确性97.1%。
表1 三种方法对恶性胸腔积液诊断的敏感性比较
Table 1 Compare of sensitivity between each group Groups
n
Positive
n
Sensitivity
(%)
FCM*
, 百拇医药 23
19
82.6
CEA
23
12
52.2
Cyfra 21-1
23
17
73.9
*P<0.01
表2 三种方法对恶性胸腔积液诊断的特异性比较
, 百拇医药
Table 2 Compare of specificity between each group Groups
n
Positive
n
Specificity
(%)
FCM*
12
1
91.2
CEA
, http://www.100md.com 12
5
58.3
Cyfra 21-1
12
2
83.3
*P<0.05表3 三种方法对恶性胸腔积液诊断准确性比较
Table 3 Compare of accuracy between each group Groups
n
Positive(n)
, 百拇医药
Accuracy(%)
FCM*
35
30
85.7
CEA
35
19
54.3
Cyfra21-1
35
27
77.1
, http://www.100md.com
*P<0.01
3 讨 论
用FCM分析肿瘤细胞的DNA倍体，并用来作为检测肿瘤细胞的一个标志，已得到越来越多的临床医师重视。本法出现假阴性有4/35例，其原因可能为[3～5]：①肿瘤为二倍体。②胸水中异倍体肿瘤细胞数量极少时，异倍体峰可能被正常的二倍体细胞所掩盖。③一些肿瘤细胞有染色体缺失，但其复制可平衡，使肿瘤细胞净DNA倍体在FCM的DNA分析时正常。
FCM DNA倍体分析可作为诊断恶性胸腔积液的一种方法，而且较为简单、易行。但其敏感性在不同文献中[6]相差很大，从38%～85%不等。本法得出的敏感性为82.6%，这种差别的原因主要在于DNA质量[7]。本法还证明，FCM DNA倍体分析敏感性、特异性、准确性均优于传统的CEA、Cyfra21-1测定(P<0.05)。如果三项指标同时检测，可明显提高诊断的敏感性及准确性。本研究证实了FCM DNA倍体分析是良、恶性胸水鉴别的一项指标，对诊断恶性胸腔积液有重要价值。
, 百拇医药
邵宏涛(1972-),女,山东东营人,医师,医学学士,从事呼吸内科专业.
参考文献：
[1] Kiein FA,Herr HW,Sogani PC,et al.Detection and follow-up of carcinoma of the urinary bladder by flow cytometry[J].Cancer,1982,50:389.
[2] Joseph E,Fuhr JE,Anthony A,et al.Flow cytometric analysis of pulmonary fluids and cells for the detection of maliganancies[J].AM J Pathol,1992,141(1):211.
[3] Bartal AH,Gazitt Zidan G,Vermeuben B,et al.Clinical and flow cytometry characteristics of malignant pleural effusions in patients after intracavitary administration of methyprednisolone acetate[J].Cancer,1991,67(10):3136-3140.
, http://www.100md.com
[4] Merkel DE,Mc Guire WL.Ploidy proliferative activity and prognosis DNA flow cytometry of solid tumor[J].Cancer,1990,65(4):1194-1205.
[5] Alaner KA,Klemi PJ,Kujari H,et al.Comparion of fresh ethanol preserved and paraffin embedded samples in DNA flow cytometry[J].Gytometry,1989,10(1):81-85.
[6] Yoss EB,David Berd,Jone R,et al.Flow Cytometric evaluation of bronchoscopic washings and lavage fluid for DNA aneuploidy as an adjunct in the dignosis of lung cancer and tumors metastatic to the lung[J].Chest,1989,96:54-59.
[7] Joseph E,Fuhr JE,Anthony A,et al.Flow Cytometric analysis of pulmonary fluids and cells for the detection of malignancies[J].American Journal of Pathology,1992,141(1):211-215.
2000-11-01, 百拇医药