ELISA法检测无偿献血者HBsAg、抗HCV、抗HIV室内质控初探
作者：曹宏 郭文成 赵敏 张子海 许东红 万国华
单位：鸡西市中心血站质检科 158100
关键词：室内质控；HBsAg；抗-HCV；抗-HIV；
黑龙江医药科学000615 目前，各血站对献血者进行乙型肝炎HBsAg，丙型肝炎病毒抗体抗HCV及艾滋病病毒抗体检测，主要采用酶联免疫吸附法(ELISA)，此法特异性好，灵敏度高，操作简便，适合血站批量常规检测，但其影响稳定性的因素很多。稍有不慎就可能直接影响实验结果，造成假阳性或假阴性，为了保证质量，提高检验结果的准确性，减少假阳性和假阴性的发生，避免献血者的流失以及控制输血后肝炎的发生，如何做好室内质控就成了非常重要的一环，我站除参加卫生部临检中心的免疫室间质控外，还参加黑龙江省临检中心的免疫室间质控，亦开展了HBsAg、抗HCV、抗HIV的室内质控，取得了一定的效果，现将方法报道如下。
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1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
厦门新创有限公司提供ELISA检测试剂盒，HBsAg批号9061501，抗HCV批号9060801，抗HIV 9070601。北京万泰ELISA检测试剂盒，HBsAg批号9907206，抗HCV批号9907904，北京金毫ELISA。检测试剂盒，抗HIV批号990503。仪器：①BIO-RADMOdEL 550型酶标仪，DV990BV4型酶标仪；②BIO-RADMOdEL1575型洗板机，DV993/1/2型洗板机；③微量加样器(荷兰)；④水浴箱。
1.2 质控血清
购于卫生部临检中心，HBsAg 1ng/ml，临界值血清批号9812，抗HCV 2ng/ml，临界值血清，批号9812，抗HIV 2ng/ml临界值血清，批号9901。
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1.3 室内质控程序
①最佳条件下已知值质控血清变异(OCV)的测定，选择本室验室中素质最好，操作最熟练的技术人员进行认真地专门测定，选用最佳试剂盒，检测之前将水浴箱，加样器，等认真调式，校正，使用新的加样吸头等，即在最佳、最理想的条件下检测临界值质控血清20次。从这20个数据中，求出OCV的均值x和标准差s该值就代表本实验室的最佳工作质量。②常规条件下已知值质控血清变异(RCVK)的测定每块ELISA板除空白孔、阴、阳性对照孔按常规操作外，将临界值质控血清随待检标本一起测定，连续测定20次，每次试验完后，加终止液上酶标仪测质控血清各孔吸光值(A值)，得到20个A值，并计算各自的S/CO比值，后计算出RCVK的
和s。若该RCVK的s在OCV的s两倍范围内，则此RCVK的的s值可用于作质控图。若RCVK的s值太大，则应查找原因，改进实验条件等，重新测定RCVK，使其向OCV的s值靠近。③绘制质控图：根据RCVK的和s作质控框架图，以日期为横坐标，s/co值为纵坐标，在纵坐标中找出x位置作一横线(x线)，然后再分别画出±2s，±3s，与x平行连成四条虚线，即绘成质控图。
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2 结果
①我室ELISA法检测HBsAg，临界值质控血清浓度为1ng/ml，OCV的=1.85，s=0.26，cv=14.1%，检测抗HCV临界值质控血清浓度为2ng/ml，OCV的=3.24，s=0.53，cv=16.4%。检测抗HIV临界值质控血清浓度为2ng/ml，OCV的=1.13，s=0.11，cv=9.7%。②我室在常规条件下使用厦门新创9061501批ELISA HBsAg试剂，北京万泰9907206批ELISA，HBsAg试剂，检测9812批浓度为1ng/ml，HBsAg临界值质控血清20次的s/co值的=1.88，s=0.32，cv=17.0%，我室RCVK的s值0.32接近OCV的s值0.26，可用于作质控图。以后每日实验时随献血者标本在每一块反应板上加测一孔同样批号的质控血清，将每次测定的s/co值点在质控图上，并将点与点用线连接，每月作一张质控图。当没有更换另一批号试剂盒和另一批号质控血清时，该质控图可继续使用下去。③使用北京万泰9907904批ELISA抗HCV试剂，检测9812批浓度为2ng/ml，抗HCV临界值质控血清20次s/co值的=3.28，s=0.67，cv=20.4%，制图方法同HBsAg。(略)④使用厦门新创9070601批ELISA抗HIV试剂，检测9901批浓度为2ng/ml，抗HIV临界值质控血清20次的s/co值的=1.18，s=0.11，cv=11.0%，制图方法同HBsAg。(略)
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3 讨论
采用临界值血清做室内质控血清，可以检测试剂盒的灵敏度，防止弱阳性标本漏检，每次实验时随献血者标本加测一孔质控血清。试验结束，用酶标仪测定结果后，首先计算出质控血清的s/co值，查阅质控图，如果在±2s范围内，证明试验可靠，可以发出报告，如果超出±2s范围内，连续5次偏向一侧，或s/co值小于1均为失控，则不能发出报告，需要查明失控原因后重做，更换另一批号的试剂盒和质控血清时，应重新绘制质控图。ELISA试剂盒检测结果s/co>1时为阳性，具有科学根据，在HBsAg抗HIV免疫学检验中，临界值就相当于医学决定性水平，根据卫生部对献血者检测HBsAg试剂灵敏度需达1ng/ml及检测抗HCV试剂灵敏度需达2ng/ml和检测抗HIV试剂灵敏度需达2ng/ml的要求，我们将卫生部临检中心供应的临界值血清作为质控血清，RCVK算出的允许误差下限均大于1，能较好地将检测结果控制其误差在规定的范围内，我们室内质控的结果显示，失控现象时有发生，且以超过上限为多，使临界值检测结果为弱阳性。此点应特别引起检验科的重视。在很多献血者的结果里发现有一些弱阳性的结果，根本就是阴性，我们将这些失控的反应板均重新做，并找出失控的原因，结果试剂盒的质量，加样、温度、时间等因素均有，说明开展室内质控可对造成失控的系统误差、过失误差、偶然误差等各方面起到监控作用。室内质控的目的在于能控制实验室每天的检测结果是否可靠，能否报告，是实验室质量管理的最基本措施。由于实行了室内质控工作人员的责任心加强了，操作更趋规范，提高了实验室检测的准确性，同时对试剂盒的运输、贮存等过程中可能造成的灵敏度的改变，起到了较好的监控作用，有效地保证了血液的质量。
(2000-06-07收稿), http://www.100md.com
单位：鸡西市中心血站质检科 158100
关键词：室内质控；HBsAg；抗-HCV；抗-HIV；
黑龙江医药科学000615 目前，各血站对献血者进行乙型肝炎HBsAg，丙型肝炎病毒抗体抗HCV及艾滋病病毒抗体检测，主要采用酶联免疫吸附法(ELISA)，此法特异性好，灵敏度高，操作简便，适合血站批量常规检测，但其影响稳定性的因素很多。稍有不慎就可能直接影响实验结果，造成假阳性或假阴性，为了保证质量，提高检验结果的准确性，减少假阳性和假阴性的发生，避免献血者的流失以及控制输血后肝炎的发生，如何做好室内质控就成了非常重要的一环，我站除参加卫生部临检中心的免疫室间质控外，还参加黑龙江省临检中心的免疫室间质控，亦开展了HBsAg、抗HCV、抗HIV的室内质控，取得了一定的效果，现将方法报道如下。
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1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
厦门新创有限公司提供ELISA检测试剂盒，HBsAg批号9061501，抗HCV批号9060801，抗HIV 9070601。北京万泰ELISA检测试剂盒，HBsAg批号9907206，抗HCV批号9907904，北京金毫ELISA。检测试剂盒，抗HIV批号990503。仪器：①BIO-RADMOdEL 550型酶标仪，DV990BV4型酶标仪；②BIO-RADMOdEL1575型洗板机，DV993/1/2型洗板机；③微量加样器(荷兰)；④水浴箱。
1.2 质控血清
购于卫生部临检中心，HBsAg 1ng/ml，临界值血清批号9812，抗HCV 2ng/ml，临界值血清，批号9812，抗HIV 2ng/ml临界值血清，批号9901。
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1.3 室内质控程序
①最佳条件下已知值质控血清变异(OCV)的测定，选择本室验室中素质最好，操作最熟练的技术人员进行认真地专门测定，选用最佳试剂盒，检测之前将水浴箱，加样器，等认真调式，校正，使用新的加样吸头等，即在最佳、最理想的条件下检测临界值质控血清20次。从这20个数据中，求出OCV的均值x和标准差s该值就代表本实验室的最佳工作质量。②常规条件下已知值质控血清变异(RCVK)的测定每块ELISA板除空白孔、阴、阳性对照孔按常规操作外，将临界值质控血清随待检标本一起测定，连续测定20次，每次试验完后，加终止液上酶标仪测质控血清各孔吸光值(A值)，得到20个A值，并计算各自的S/CO比值，后计算出RCVK的
和s。若该RCVK的s在OCV的s两倍范围内，则此RCVK的的s值可用于作质控图。若RCVK的s值太大，则应查找原因，改进实验条件等，重新测定RCVK，使其向OCV的s值靠近。③绘制质控图：根据RCVK的和s作质控框架图，以日期为横坐标，s/co值为纵坐标，在纵坐标中找出x位置作一横线(x线)，然后再分别画出±2s，±3s，与x平行连成四条虚线，即绘成质控图。, http://www.100md.com
2 结果
①我室ELISA法检测HBsAg，临界值质控血清浓度为1ng/ml，OCV的
=1.85，s=0.26，cv=14.1%，检测抗HCV临界值质控血清浓度为2ng/ml，OCV的=3.24，s=0.53，cv=16.4%。检测抗HIV临界值质控血清浓度为2ng/ml，OCV的=1.13，s=0.11，cv=9.7%。②我室在常规条件下使用厦门新创9061501批ELISA HBsAg试剂，北京万泰9907206批ELISA，HBsAg试剂，检测9812批浓度为1ng/ml，HBsAg临界值质控血清20次的s/co值的=1.88，s=0.32，cv=17.0%，我室RCVK的s值0.32接近OCV的s值0.26，可用于作质控图。以后每日实验时随献血者标本在每一块反应板上加测一孔同样批号的质控血清，将每次测定的s/co值点在质控图上，并将点与点用线连接，每月作一张质控图。当没有更换另一批号试剂盒和另一批号质控血清时，该质控图可继续使用下去。③使用北京万泰9907904批ELISA抗HCV试剂，检测9812批浓度为2ng/ml，抗HCV临界值质控血清20次s/co值的=3.28，s=0.67，cv=20.4%，制图方法同HBsAg。(略)④使用厦门新创9070601批ELISA抗HIV试剂，检测9901批浓度为2ng/ml，抗HIV临界值质控血清20次的s/co值的=1.18，s=0.11，cv=11.0%，制图方法同HBsAg。(略), 百拇医药
3 讨论
采用临界值血清做室内质控血清，可以检测试剂盒的灵敏度，防止弱阳性标本漏检，每次实验时随献血者标本加测一孔质控血清。试验结束，用酶标仪测定结果后，首先计算出质控血清的s/co值，查阅质控图，如果在
±2s范围内，证明试验可靠，可以发出报告，如果超出±2s范围内，连续5次偏向一侧，或s/co值小于1均为失控，则不能发出报告，需要查明失控原因后重做，更换另一批号的试剂盒和质控血清时，应重新绘制质控图。ELISA试剂盒检测结果s/co>1时为阳性，具有科学根据，在HBsAg抗HIV免疫学检验中，临界值就相当于医学决定性水平，根据卫生部对献血者检测HBsAg试剂灵敏度需达1ng/ml及检测抗HCV试剂灵敏度需达2ng/ml和检测抗HIV试剂灵敏度需达2ng/ml的要求，我们将卫生部临检中心供应的临界值血清作为质控血清，RCVK算出的允许误差下限均大于1，能较好地将检测结果控制其误差在规定的范围内，我们室内质控的结果显示，失控现象时有发生，且以超过上限为多，使临界值检测结果为弱阳性。此点应特别引起检验科的重视。在很多献血者的结果里发现有一些弱阳性的结果，根本就是阴性，我们将这些失控的反应板均重新做，并找出失控的原因，结果试剂盒的质量，加样、温度、时间等因素均有，说明开展室内质控可对造成失控的系统误差、过失误差、偶然误差等各方面起到监控作用。室内质控的目的在于能控制实验室每天的检测结果是否可靠，能否报告，是实验室质量管理的最基本措施。由于实行了室内质控工作人员的责任心加强了，操作更趋规范，提高了实验室检测的准确性，同时对试剂盒的运输、贮存等过程中可能造成的灵敏度的改变，起到了较好的监控作用，有效地保证了血液的质量。(2000-06-07收稿), http://www.100md.com