牙源性角化囊肿的临床病理学研究及角化类型与生物学特性的关系
作者：商维荣 魏本娟 雷明 王刚
单位：商维荣(佳木斯大学口腔医学院)；魏本娟(佳木斯大学口腔医学院)；雷明(佳木斯大学口腔医学院)；王刚(北京市丰台区南苑医院)
关键词：牙源性角化囊肿；细胞核仁组成区嗜银蛋白；细胞核增殖抗原
黑龙江医药科学000602提要 为了探讨牙源性角化囊肿(OKC)中基底细胞的增殖活性和角化类型与预后的关系，本研究通过临床资料分析及银染技术和免疫组织化学技术对22例OKC细胞核仁组成区嗜银蛋白(AgNOR)和细胞核增殖抗原(PCNA)进行了定性、定量研究。结果发现在不全角化OKC中AgNOR阳性颗粒数明显多于正角化者，PCNA能较好地反映细胞增殖活性。并推论OKC的角化类型与预后有密切关系。
Clinical and histopathological features of OKC and the relationship between its keralosis type and biology characteristic
, http://www.100md.com
Shang Weirong, et al
Abstract Objective: to study the peroliferating acivity of the basal cell of OKC and the relationship between its keralosis type and prognosis. Methods 22 cases with OKC were studied. Clinical material analysi s. argentaffin staining and immohistochemistry technigue were wsed to study AgNOR and PCNA in guality and guantity. Results: the numeber of AGNOR positire pellets of parakeratosis OKC is evident more than that of orthokeratosis OKC condusion PCNA can rdelect the peroliferating activity of cell very well. It was deduced that there is close relationship between keralosis type and prognosis of OKC.
, 百拇医药
Key words OKC; AGNOR; PCNA
1 材料
取本院1990～1996年间手术切除的OKC标本22例。常规石蜡包埋、切片4μm。将此切片进行AgNOR染色和免疫组化染色。
2 方法
2.1 AgNOR染色及计数方法
即将2%的明胶甲酸溶液与50%的硝酸银溶液以1:2容积比混合为工作液，切片经脱蜡、脱水及水化后将工作滴于组织片上，于避光、湿润、室温的条件下染色30min，常规封片后在400倍高倍镜下对每例切片随机选择5个视野，每个视野计数20个无重叠的阳性细胞作AgNOR计数，取每个细胞内阳性颗粒的平均数统计，以组织浸润的淋巴细胞做Agnor染色的正常细胞阳性对照。
, http://www.100md.com
2.2 免疫组织化学法分析增殖细胞核抗原(PCNA)，抗PCNA单克隆抗体为美国Zymed公司产品，工作浓度(1:50)，参照ABC法进行免疫组织化学染色：石蜡切片经脱蜡、脱水0.5%双氧水甲醇处理30min后于柠檬酸缓冲液中抗原修复，加热沸腾10min后冷却，PBS缓冲液洗后滴加1:50稀释正常羊血清，湿盒内孵育10min；滴加1:50的PCNA单克隆抗体后4℃冰箱中湿盒内孵育过夜；PBS洗后滴加羊抗鼠IgG(1:10)(美zymed公司)湿盒内卵育30min；PBS洗后滴加SABC(1:20)置湿盒内1h PBS洗后在新鲜配制的酶底物DAB在光镜下控制显色，甲基绿核对比染色；乙醇梯度脱水封片。在400倍高倍镜下对每例切片随机观察10个高倍视野，每个视野计数100个细胞中PCNA阳性细胞数，并做统计学处理。
3 结果
3.1 临床资料
本组22例OKC中，男12例，女10例，男女之比为1.2:1，就诊年龄13～61岁，平均20岁，高峰组为10～20岁。21例为单发性，1例为多发性，6例OKC伴感染，2例伴成釉细胞瘤。发病部位：下颌骨17例，上颌骨5例，上、下颌骨之比为1:3.4，下颌骨好发于升枝区，上颌骨多发于磨牙区和前牙区。常见症状为颌骨无痛性膨胀，继发感染时有溢脓或干酪样物流出。X线表现为单房或多房的囊性透光阴影。
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3.2 病理学改变
3.2.1 巨检
囊肿大小不一，直径1.5～10cm，平均4.2cm，囊腔内容物为干酪样或豆渣样物，少数可为淡黄色清液或脓液，囊肿为多房时可见有薄的纤维性或骨性间隔。
3.2.2 镜检
囊肿内衬薄层复层鳞状上皮，为4～8层细胞，厚度均匀无钉突，常与囊壁分离，有时上皮局灶性增生，形成上皮斑(5例)，上皮表层有波浪状的角化层大多为不全角化(17例)，少数为正角化(3例)，另有2例为混合角化。纤维囊壁内可见子囊(3例)，牙源性上皮团块(6例)。6例继发感染，囊壁上皮增生并出现钉突，表层角化消失。
3.2.3 AgNOR银染
AgNOR呈棕黑色小颗粒位于核仁和细胞核内，背景呈淡黄色。OKC AgNOR可呈团块状和卫星状两种形态，其上皮角化形式与AgNOR形态及数量有关。正角化者AgNOR数量少，形态规则，团块少；(照片1)不全角化者AgNOR数量多，团块状者多(照片2)。AgNORS计数见表1。
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表1 OKC中AgNOR银染计数情况
病理诊断
例数
AgNOR/细胞
±SD
不全角化
17
4.86±0.75
正角化
3
2.06±0.43
淋巴细胞
, http://www.100md.com
10
1.92±0.65
图1 不全角化型OKC的AgNOR染色 ×200
图2 正角化型OKC的AgNOR染色 ×400
3.2.4 PCNA免疫组化染色(照片3.4)：以细胞核内出现明显的棕色颗粒为阳性细胞。每例随机取5个高倍视野，每个视野计数100个细胞中PCNA阳性细胞数。PCNA计数见表2。
图3 PCNA在OKC上皮衬里中的表达 ×200
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图4 PCN在OKC上皮衬里中的表达 ×400
表2 OKC中PCNA免疫组化阳性计数情况
病理诊断
例数
PCNA阳性细胞数/100个细胞
阳性细胞占细胞总数比例
OKC
5
45
45%
淋巴细胞
5
, 百拇医药
0～1
0.5%
4 讨论
牙源性角化囊肿作为一种颌骨内的独立性疾病，据国外文献报道，它占颌骨囊肿的3.3%～17.4%，术后复发率为12%～62.5%。由于OKC具有特征性的病理改变和较高的复发率，日益受到人们的重视。本文旨在通过22例OKC的组织病理学研究和临床资料分析研究OKC的组织学表现与其生物学行为之间的关系，从临床看，本组22例OKC中男性多于女性，多见于下颌磨牙、升枝区，这与文献相符[1]。而且我院收治的110例各类颌骨囊肿中OKC占20%，略高于文献报道；好发于青少年，略早于文献报道；复发率为13.6%与文献相近[1]。
OKC的角化类型和其临床生物学行为的关系是近年为许多学者关注的课题。本组OKC内衬上皮大多为不全角化，正角化仅占11.2%。Wright(1981)[2]指出正角化和不全角化的OKC在组织病理学和临床生物学行为方面有明显不同，并认为应将正角化的OKC看作一个独立类型。本组AgNOR染色和免疫组化染色也证实了这一观点。本研究中内衬上皮为正角化的囊肿均为单发，无复发及不伴有综合征，所有多发，复发囊肿其内衬上皮均为不全角化。22例病人中，17例内衬上皮为不全角化。其中10例(58.8%)纤维囊壁内有子囊和上皮团，3例内衬上皮为正角化，无一例纤维囊壁内有子囊和上皮团。两者有高度显著性差异(P<0.01)，此结果说明子囊、上皮团的存在和不全角化之间有正相关，而子囊、上皮团与复发又密切有关。因此，我们认为内衬上皮的角化类型在一定程度上能反映囊肿的生物学行为。
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对OKC内衬上皮正角化和不全角化的生物学行为存在差异的原因，已有学者[1,3]进行过研究，认为基底细胞的数目、形态、增殖活性是其重要原因。近年来国内外病理学家将细胞核仁组成区嗜银蛋白(AgNOR)技术应用于肿瘤病理学的诊断研究，对于细胞增殖活性的研究提供了良好方法，但尚未见其用于OKC研究的成形报道。本文采用AgNOR染色法对22例OKC上皮进行了回顾性研究，结果表明OKC的AgNORs数量与其上皮角化程度明显相关。不全角化者AgNOR数量明显增多，说明AgNORs数量在一定程度上反映了OKC的生长增殖活性。AgNOR数量越多，OKC生长增殖越活跃，复发率就越高，这与文献报道及临床资料的统计结果相一致。因此，作者认为OKC的AgNORs定量计数为在光镜下估价其增殖状态，为临床估价OKC的预后提供了有价值的参考指数。Brannon和Wright[1,2]还指出正角化囊肿生物学行为的改变与基底细胞数目减少和缺乏极性有关。在本组材料中我们也观察到类似现象：正角化囊肿的内衬上皮基底层细胞呈立方或扁平，细胞明显减少并缺乏极性；而不全角化囊肿的基底层细胞大多为柱状，细胞呈栅栏状排列，并常向深部呈蕾状或芽状增生。因此，我们同意Wright等的观点，认为这两个不同角化类型的OKC生物学行为差异与它们的基底细胞形态和活性不同有关。
, http://www.100md.com
本组OKC阳性表达在不全角化与正角化中其染色强度未出现明显的统计学意义，但两种病例均见上皮内阳性细胞数几乎超过了上皮层的表面3/4，比正常口腔粘膜明显增多，两种不同角化类型间无显著差别可能与PCNA染色成功的病例数尚少有关。因此，也认为OKC有着明显的增殖活性，提示应用PCNA在常规病理切片上敏感检测出OKC细胞增殖活性及反映肿瘤的生长速度是评估患者术后是否复发及预后的良好指标。同时结合AgNORs检测结果综合分析可以更为客观准确地判断OKC细胞的增殖程度、生物学行为及预后，对临床综合治疗以减少复发提高生存率均具有相当的实用价值。
5 结论
通过对22例OKC的角化类型及细胞增殖活性的临床病理学研究，可以看出角化类型与生物学行为间有密切关系，即不全角化者生长增殖活跃，复发率高于正角化者；同时OKC的细胞增殖活性普遍偏高，这可能是该囊肿易复发和多发甚至可以癌变的重要组织学基础。了解这一点对有效防治之有重要临床意义。
, 百拇医药
作者简介:商维荣(1965-),女,辽宁新宾县人.副教授,医学硕士,从事口腔医学。
参考文献
1，Brannon, RB. 牙源性角化囊肿《国外医学》,口腔医学分册,1980;226～30
2，Wright, GM. The odontogenic keratocysts-orthoke ratimzed uariants oral surg oral oral pathol 1981;51(6):609～18
3，Underwood Jce giridd. Nucleur organiaer. Reions as disgnotic ducriminsnts for malignancy. J Pathot 1988,L55:95
(2000-10-11收稿), 百拇医药
单位：商维荣(佳木斯大学口腔医学院)；魏本娟(佳木斯大学口腔医学院)；雷明(佳木斯大学口腔医学院)；王刚(北京市丰台区南苑医院)
关键词：牙源性角化囊肿；细胞核仁组成区嗜银蛋白；细胞核增殖抗原
黑龙江医药科学000602提要 为了探讨牙源性角化囊肿(OKC)中基底细胞的增殖活性和角化类型与预后的关系，本研究通过临床资料分析及银染技术和免疫组织化学技术对22例OKC细胞核仁组成区嗜银蛋白(AgNOR)和细胞核增殖抗原(PCNA)进行了定性、定量研究。结果发现在不全角化OKC中AgNOR阳性颗粒数明显多于正角化者，PCNA能较好地反映细胞增殖活性。并推论OKC的角化类型与预后有密切关系。
Clinical and histopathological features of OKC and the relationship between its keralosis type and biology characteristic
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Shang Weirong, et al
Abstract Objective: to study the peroliferating acivity of the basal cell of OKC and the relationship between its keralosis type and prognosis. Methods 22 cases with OKC were studied. Clinical material analysi s. argentaffin staining and immohistochemistry technigue were wsed to study AgNOR and PCNA in guality and guantity. Results: the numeber of AGNOR positire pellets of parakeratosis OKC is evident more than that of orthokeratosis OKC condusion PCNA can rdelect the peroliferating activity of cell very well. It was deduced that there is close relationship between keralosis type and prognosis of OKC.
, 百拇医药
Key words OKC; AGNOR; PCNA
1 材料
取本院1990～1996年间手术切除的OKC标本22例。常规石蜡包埋、切片4μm。将此切片进行AgNOR染色和免疫组化染色。
2 方法
2.1 AgNOR染色及计数方法
即将2%的明胶甲酸溶液与50%的硝酸银溶液以1:2容积比混合为工作液，切片经脱蜡、脱水及水化后将工作滴于组织片上，于避光、湿润、室温的条件下染色30min，常规封片后在400倍高倍镜下对每例切片随机选择5个视野，每个视野计数20个无重叠的阳性细胞作AgNOR计数，取每个细胞内阳性颗粒的平均数统计，以组织浸润的淋巴细胞做Agnor染色的正常细胞阳性对照。
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2.2 免疫组织化学法分析增殖细胞核抗原(PCNA)，抗PCNA单克隆抗体为美国Zymed公司产品，工作浓度(1:50)，参照ABC法进行免疫组织化学染色：石蜡切片经脱蜡、脱水0.5%双氧水甲醇处理30min后于柠檬酸缓冲液中抗原修复，加热沸腾10min后冷却，PBS缓冲液洗后滴加1:50稀释正常羊血清，湿盒内孵育10min；滴加1:50的PCNA单克隆抗体后4℃冰箱中湿盒内孵育过夜；PBS洗后滴加羊抗鼠IgG(1:10)(美zymed公司)湿盒内卵育30min；PBS洗后滴加SABC(1:20)置湿盒内1h PBS洗后在新鲜配制的酶底物DAB在光镜下控制显色，甲基绿核对比染色；乙醇梯度脱水封片。在400倍高倍镜下对每例切片随机观察10个高倍视野，每个视野计数100个细胞中PCNA阳性细胞数，并做统计学处理。
3 结果
3.1 临床资料
本组22例OKC中，男12例，女10例，男女之比为1.2:1，就诊年龄13～61岁，平均20岁，高峰组为10～20岁。21例为单发性，1例为多发性，6例OKC伴感染，2例伴成釉细胞瘤。发病部位：下颌骨17例，上颌骨5例，上、下颌骨之比为1:3.4，下颌骨好发于升枝区，上颌骨多发于磨牙区和前牙区。常见症状为颌骨无痛性膨胀，继发感染时有溢脓或干酪样物流出。X线表现为单房或多房的囊性透光阴影。
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3.2 病理学改变
3.2.1 巨检
囊肿大小不一，直径1.5～10cm，平均4.2cm，囊腔内容物为干酪样或豆渣样物，少数可为淡黄色清液或脓液，囊肿为多房时可见有薄的纤维性或骨性间隔。
3.2.2 镜检
囊肿内衬薄层复层鳞状上皮，为4～8层细胞，厚度均匀无钉突，常与囊壁分离，有时上皮局灶性增生，形成上皮斑(5例)，上皮表层有波浪状的角化层大多为不全角化(17例)，少数为正角化(3例)，另有2例为混合角化。纤维囊壁内可见子囊(3例)，牙源性上皮团块(6例)。6例继发感染，囊壁上皮增生并出现钉突，表层角化消失。
3.2.3 AgNOR银染
AgNOR呈棕黑色小颗粒位于核仁和细胞核内，背景呈淡黄色。OKC AgNOR可呈团块状和卫星状两种形态，其上皮角化形式与AgNOR形态及数量有关。正角化者AgNOR数量少，形态规则，团块少；(照片1)不全角化者AgNOR数量多，团块状者多(照片2)。AgNORS计数见表1。
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表1 OKC中AgNOR银染计数情况
病理诊断
例数
AgNOR/细胞
±SD不全角化
17
4.86±0.75
正角化
3
2.06±0.43
淋巴细胞
, http://www.100md.com
10
1.92±0.65
图1 不全角化型OKC的AgNOR染色 ×200
图2 正角化型OKC的AgNOR染色 ×400
3.2.4 PCNA免疫组化染色(照片3.4)：以细胞核内出现明显的棕色颗粒为阳性细胞。每例随机取5个高倍视野，每个视野计数100个细胞中PCNA阳性细胞数。PCNA计数见表2。
图3 PCNA在OKC上皮衬里中的表达 ×200
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图4 PCN在OKC上皮衬里中的表达 ×400
表2 OKC中PCNA免疫组化阳性计数情况
病理诊断
例数
PCNA阳性细胞数/100个细胞
阳性细胞占细胞总数比例
OKC
5
45
45%
淋巴细胞
5
, 百拇医药
0～1
0.5%
4 讨论
牙源性角化囊肿作为一种颌骨内的独立性疾病，据国外文献报道，它占颌骨囊肿的3.3%～17.4%，术后复发率为12%～62.5%。由于OKC具有特征性的病理改变和较高的复发率，日益受到人们的重视。本文旨在通过22例OKC的组织病理学研究和临床资料分析研究OKC的组织学表现与其生物学行为之间的关系，从临床看，本组22例OKC中男性多于女性，多见于下颌磨牙、升枝区，这与文献相符[1]。而且我院收治的110例各类颌骨囊肿中OKC占20%，略高于文献报道；好发于青少年，略早于文献报道；复发率为13.6%与文献相近[1]。
OKC的角化类型和其临床生物学行为的关系是近年为许多学者关注的课题。本组OKC内衬上皮大多为不全角化，正角化仅占11.2%。Wright(1981)[2]指出正角化和不全角化的OKC在组织病理学和临床生物学行为方面有明显不同，并认为应将正角化的OKC看作一个独立类型。本组AgNOR染色和免疫组化染色也证实了这一观点。本研究中内衬上皮为正角化的囊肿均为单发，无复发及不伴有综合征，所有多发，复发囊肿其内衬上皮均为不全角化。22例病人中，17例内衬上皮为不全角化。其中10例(58.8%)纤维囊壁内有子囊和上皮团，3例内衬上皮为正角化，无一例纤维囊壁内有子囊和上皮团。两者有高度显著性差异(P<0.01)，此结果说明子囊、上皮团的存在和不全角化之间有正相关，而子囊、上皮团与复发又密切有关。因此，我们认为内衬上皮的角化类型在一定程度上能反映囊肿的生物学行为。
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对OKC内衬上皮正角化和不全角化的生物学行为存在差异的原因，已有学者[1,3]进行过研究，认为基底细胞的数目、形态、增殖活性是其重要原因。近年来国内外病理学家将细胞核仁组成区嗜银蛋白(AgNOR)技术应用于肿瘤病理学的诊断研究，对于细胞增殖活性的研究提供了良好方法，但尚未见其用于OKC研究的成形报道。本文采用AgNOR染色法对22例OKC上皮进行了回顾性研究，结果表明OKC的AgNORs数量与其上皮角化程度明显相关。不全角化者AgNOR数量明显增多，说明AgNORs数量在一定程度上反映了OKC的生长增殖活性。AgNOR数量越多，OKC生长增殖越活跃，复发率就越高，这与文献报道及临床资料的统计结果相一致。因此，作者认为OKC的AgNORs定量计数为在光镜下估价其增殖状态，为临床估价OKC的预后提供了有价值的参考指数。Brannon和Wright[1,2]还指出正角化囊肿生物学行为的改变与基底细胞数目减少和缺乏极性有关。在本组材料中我们也观察到类似现象：正角化囊肿的内衬上皮基底层细胞呈立方或扁平，细胞明显减少并缺乏极性；而不全角化囊肿的基底层细胞大多为柱状，细胞呈栅栏状排列，并常向深部呈蕾状或芽状增生。因此，我们同意Wright等的观点，认为这两个不同角化类型的OKC生物学行为差异与它们的基底细胞形态和活性不同有关。
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本组OKC阳性表达在不全角化与正角化中其染色强度未出现明显的统计学意义，但两种病例均见上皮内阳性细胞数几乎超过了上皮层的表面3/4，比正常口腔粘膜明显增多，两种不同角化类型间无显著差别可能与PCNA染色成功的病例数尚少有关。因此，也认为OKC有着明显的增殖活性，提示应用PCNA在常规病理切片上敏感检测出OKC细胞增殖活性及反映肿瘤的生长速度是评估患者术后是否复发及预后的良好指标。同时结合AgNORs检测结果综合分析可以更为客观准确地判断OKC细胞的增殖程度、生物学行为及预后，对临床综合治疗以减少复发提高生存率均具有相当的实用价值。
5 结论
通过对22例OKC的角化类型及细胞增殖活性的临床病理学研究，可以看出角化类型与生物学行为间有密切关系，即不全角化者生长增殖活跃，复发率高于正角化者；同时OKC的细胞增殖活性普遍偏高，这可能是该囊肿易复发和多发甚至可以癌变的重要组织学基础。了解这一点对有效防治之有重要临床意义。
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作者简介:商维荣(1965-),女,辽宁新宾县人.副教授,医学硕士,从事口腔医学。
参考文献
1，Brannon, RB. 牙源性角化囊肿《国外医学》,口腔医学分册,1980;226～30
2，Wright, GM. The odontogenic keratocysts-orthoke ratimzed uariants oral surg oral oral pathol 1981;51(6):609～18
3，Underwood Jce giridd. Nucleur organiaer. Reions as disgnotic ducriminsnts for malignancy. J Pathot 1988,L55:95
(2000-10-11收稿), 百拇医药