动态浊度时间法检测右旋糖酐40葡萄糖注射液中细菌内毒素

http://www.100md.com 《西北药学杂志》 2000年第6期

     作者：陈元刚

    单位：陈元刚(浙江省鄞县药品监督检验所 鄞县 315192)

    关键词：

    西北药学杂志000620 中图分类号：R927.12 文献标识码：A

    动态浊度时间法是根据测定到达设定反应液的浊度变化(吸光度变化)值所需的时间与细菌内毒素浓度的对数值成反比关系的原理，进行细菌内毒素定量测定的一种方法。本文对右旋糖酐40葡萄糖注射液(简称右旋糖酐40)进行试验。

    1 仪器与试药

    1.1 仪器 EDS-98细菌内毒素定量浊度仪(北京金山川科技有限公司)。

    1.2 试药 右旋糖酐40葡萄糖注射液(9802187，9802188，9802189，天津华津制药厂；9612301，9612307，9612309，天津津西制药厂)；TAL试剂(980419A，λ＝0.03EU/ml，湛江安度斯生物有限公司)；细菌内毒素国家标准品(批号981，9000EU，中国药品生物制品检定所)。

    2 方法与结果

    2.1 细菌内毒素限值^[1] K为人的最小发热阈值5.0EU/kg，M为1h内最大给药剂量10ml/kg。按公式L＝K/M计算得右旋糖酐40的内毒素限值为0.5EU/ml。

    2.2 内毒素标准曲线制备^[1] 用细菌内毒素检查用水将细菌内毒素国家标准品进行2倍稀释，使其最终细菌内毒素浓度分别为0.1，0.05，0.025EU/ml；分别取0.1ml与TAL试剂0.1ml混合，在浊度仪上进行检测，结果见表1。

    回归方程logT＝2.618-0.344logC，相关系数r＝0.9986。最低内毒素浓度λ₁＝0.025EU/ml，空白对照管在规定检测时间外，故内毒素标准曲线成立。

    表1 内毒素标准曲线的可靠性 内毒素(EU/ml)

    平均反应时间(s)

    RSD(%)

    0

    >3600

    0.00

    0.025

    1485

    5.97

    0.05

    1132

    4.00

    0.1

    922

    1.61

    2.3 干扰试验

    2.3.1 预干扰试验 按MVD＝L/λ计算，其中λ₁＝0.025EU/ml，得右旋糖酐40的最大有效稀释倍数为20倍。将右旋糖酐40用细菌内毒素检查用水依次稀释成5，10，20倍，记为Ai液；同时另取3管，进行同样倍数稀释，但在稀释液中添加浓度0.05EU/ml的细菌内毒素标准溶液，记为Bi液，作为样品阳性对照管，混匀测浊度，计算回收率，结果见表2。不同稀释倍数下的右旋糖酐40添加内毒素平均回收率均在50%～200%范围内，表明样品溶液在本实验条件下对TAL试剂反应无干扰。10倍时的稀释溶液恰好等于干扰试验时有效样品稀释溶液(D＝L*C/M＝10)，因此干扰试验时用10倍稀释溶液进行。表2 右旋糖酐40预干扰试验 稀释倍数

    Ai液(EU/ml)

    Bi液(EU/ml)

    回收率(%)

    5

    <0.025

    0.0456

    91.20

    10

    <0.025

    0.0524

    104.8

    20

    <0.025

    0.0532

    106.4

    2.3.2 干扰试验 分别取5批右旋糖酐40，用细菌内毒素与检查用水制成10倍稀释液，记为Ai液；同时另取5管进行10倍稀释，添加0.05EU/ml内毒素标准溶液，记为Bi液；取上述各液0.1ml加入预先加有0.10ml TAL试剂管内进行检测，结果见表3。5批右旋糖酐40细菌内毒素含量均在0.25EU/ml以下，且添加内毒素平均回收率在50%～200%范围内，表明右旋糖酐40的10倍稀释液对TAL试验反应无干扰。表3 右旋糖酐40预干扰试验 样品批号

    稀释倍数

    Ai液

    (EU/ml)

    Bi液

    (EU/ml)

    回收率

    (%)

    9802188

    10

    <0.025

    0.0549

    109.8

    9802199

    10

    <0.025

    0.0459

    91.80

    9612301

    10

    <0.025

    0.0585

    117.0

    9612307

    10

    <0.025

    0.0535

    107.0

    9612199

    10

    <0.025

    0.0453

    90.60

    3 讨论

    用动态浊度时间法进行内毒素定量检测，与传统的家兔法相比，具有操作简便、检测灵敏度高的优点，尤其避免了由于家兔差异及人为主观判断所出现的假阳性或假阴性结果。由于采用计算机监控，避免了个人之间的判断误差，便于试验数据的分析管理。

    参考文献

    [1]中国药典2000年版.二部.2000：附录204

    (收稿日期：2000-06-16)

    百拇医药网 http://www.100md.com/html/analecta/2000/06/01/34/827.htm