κ/λ比率在M蛋白病中的诊断价值
作者：周晖 王丁 宾利
单位：510080 广州市，广东省人民医院检验科
关键词：免疫球蛋白类，轻链；副蛋白血症；散射测浊法和比浊法；免疫电泳；固定
实用医学杂志000639 摘 要 目的：探讨一种推测M蛋白的简便方法。方法：利用速率散射比浊法检测128例患者血清免疫球蛋白(Ig)IgG，IgA，IgM和轻链κ，λ含量，计算出κ与λ之比(κ/λ)，然后进行免疫固定电泳。结果：66例患者未检出M蛋白，其中63例κ/λ位于正常参考范围；62例患者检出M蛋白，其中57例κ/λ异常。结论：根据κ/λ筛选M蛋白的特异性为95.4%，灵敏度为91.9%且与M蛋白含量正相关，与免疫固定电泳符合率为93.8%。当κ/λ升高时，M蛋白轻链型为κ型；反之，为λ型，符合率为100%。当κ/λ>6或<0.4，仅一种Ig升高数倍以上而另两种Ig减少或偏低时，根据Ig含量可推测出M蛋白重链型。根据Ig含量及κ/λ筛选M蛋白并判断型别具有简便、快速、灵敏等优点。
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M蛋白病即副蛋白血症(monoclonal gammopathies)，是指由于单克隆浆细胞无限增殖而使血中出现大量均一的单克隆免疫球蛋白，又称M蛋白，常见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症等，多发于老年人。随着检测手段的日益发展及社会人群的高龄化，该病呈现逐年增多的趋势。目前M蛋白检测主要靠免疫电泳或免疫固定电泳(immunofixation electrophoresis,IFE)，但操作复杂，前者结果不易判断，后者较昂贵。本文结合免疫球蛋白(Ig)含量、κ和λ轻链含量之比(κ/λ)来推测M蛋白，具有简便、迅速、灵敏等优点，报道如下。
1 对象与方法
1.1 研究对象
1.1.1 正常对照组 健康体检者100例，其中男49例，女51例，年龄18～64岁，平均37.4岁。
1.1.2 实验组 从1997年7月～2000年1月在本院进行过IFE的住院、门诊患者共128例，其中男73例，女55例，年龄17～80岁，平均57.3岁。进行过多次IFE检测的患者，若结果相同则取第1次结果，若不同则均录入本组。
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1.2 试剂 血清Ig定量检测试剂及标准品均为Beckman公司产品。IFE使用法国Sebia公司Hydragel IF试剂盒。抗δ，ε重链血清由法国Sebia公司提供。
1.3 仪器 全自动特种蛋白分析系统(Array 360,Beckman公司)，全自动电泳仪Hydrasys(法国Sebia公司)。
1.4 方法 每份血清均先定量检测IgA，IgG、IgM，κ，λ含量，然后用抗γ，α，μ重链血清和抗κ，λ轻链血清进行IFE。若IFE图中见抗轻链M带而无抗重链M带，则再用抗δ，ε重链血清进行IFE。根据有无M蛋白将实验组93例患者分为M蛋白组和非M蛋白组。
2 结果
2.1 正常对照组 100例正常人各项目均值及正常参考值范围(
±2s)分别为IgG 13.6(9.16～18.04)g/L，IgA 2.46(0.88～4.04)g/L，IgM 1.50(0.46～2.54)g/L，κ 11.45(7.55～15.35)g/L，λ 5.78(3.22～8.34)g/L，κ/λ 2.01(1.25～2.77)。
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2.2 非M蛋白组 共66例患者，各项目均值及范围(最小值～最大值)分别为IgG 15.85(1.42～52.7)g/L，IgA 3.08(0.12～9.26)g/L，IgM 1.41(0.27～8.21)g/L，κ 13.3(1.72～40.9)g/L，λ 7.57(0.95～28.4)g/L，κ/λ 1.87(1.22～3.08)。
2.3 M蛋白组 共62例患者，M蛋白分布为16例IgG κ型，12例IgG λ型,8例IgA κ型，10例IgA λ型，5例IgM κ型，1例IgM λ型，2例单纯κ型，7例单纯λ型，1例双克隆型(IgGκ+IgMκ)。各项目均值及范围(最小值～最大值)分别为IgG 58.68(10.3～142)g/L，IgA 39.91(6.7～99.8)g/L，IgM 33.70(3.67～92)g/L,κ 60.07(5.44～191)g/L，λ 30.50(2.31～129)g/L，κ型M蛋白患者κ/λ 72.8(2.19～386.67)，λ型M蛋白患者κ/λ 0.45(0.02～1.48)。
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2.4 IFE结果与κ/λ关系 非M蛋白组：κ/λ正常63例，异常3例；而M蛋白组κ/λ正常5例，异常57例。
3 讨论
目前，鉴定M蛋白尚无公认的金标准，最敏感的方法为IFE法[1]。本组以IFE的结果作为参考，观察κ/λ检测M蛋白的能力，从上述结果可计算出其敏感性为91.9%，特异性为95.5%，与IFE法符合率93.8%。
非M蛋白组中，虽然可见Ig及轻链增高，甚至超过正常人上限数倍以上，但IFE均未检出M蛋白，因此单纯从含量的增加难以判断是否为单克隆增殖，而本组中63例(占95.5%)κ/λ正常，相比之下κ/λ在筛选M蛋白方面的特异性更好。Fifield等[2]报道874例无M蛋白血清样品中仅19例κ/λ异常，特异性达97.8%，与本文一致。
M蛋白组中，M蛋白浓度>10 g/L者49例，5～10 g/L者7例，<5 g/L者6例，其中8例在正常参考值范围内，4例甚至低于正常参考值范围低限，其余均偏高。说明单克隆增殖不一定含量都增高，而本组中κ/λ大都超出正常参考值范围，所以根据κ/λ来筛选M蛋白更敏感。本组中κ/λ正常5例，其中1例M蛋白大于10 g/L,其余4例均小于5 g/L，即当M蛋白含量小于5 g/L时，用κ/λ筛选M蛋白的灵敏度仅为33.3%，与Jones等[3]报道一致，此时不宜用κ/λ来筛选M蛋白。理论上M蛋白含量越高，正常成分由于受抑制含量越低，κ/λ变化就越大，但M蛋白含量低到一定程度时，根据κ/λ筛选M蛋白的灵敏度会降低，Jones等[3]更用实验证明了这点。当M蛋白>5g/L时，用κ/λ筛选M蛋白的灵敏度为98.2%，高于Jones等[3]报道的75%，这可能与低浓度M蛋白例数所占比例有关。
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κ/λ异常的所有病例中，当κ/λ升高时，M蛋白轻链型均为κ；κ/λ降低时，M蛋白轻链型均为λ，符合率100%，与刘焱等[4]报道一致。这是因为正常人Ig属多态性，总免疫球蛋白的两种轻链型基本稳定，单克隆增殖时某一轻链型Ig明显增高而另一种相对减少，κ/λ就会出现明显的变化。
当κ/λ>6或<0.4，某种重链Ig与某型轻链可比地增高数倍以上，而另外两种重链Ig减少或处于正常参考值范围低限附近时，M蛋白重链型均为增高的重链型Ig。此类病例在M蛋白组中占了64.5%。当κ/λ异常，但<6或>0.4时，M蛋白的重链型则不易分明。虽然鉴定M蛋白型别最终要靠免疫电泳或IFE，但依据Ig含量、κ/λ仍可推测出大部分M蛋白的重链型。
过去，在区分良、恶性M蛋白病时，很少考虑κ/λ的异同，事实上它能对此提供某些依据。根据传统的实验室检查方面的鉴别要点[5]，将M蛋白患者分为良、恶性M蛋白两组，发现恶性M蛋白组κ/λ往往>6或<0.4；良性M蛋白组2.77<κ/λ<6或0.4<κ/λ<1.25。这是因为M蛋白含量在良性M蛋白病中一般较低，在恶性M蛋白病中则很高，而κ/λ的变化程度与M蛋白的含量呈正相关性。
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综上所述，用κ/λ检测M蛋白具有一定的实用价值，特别对于没有条件开展免疫电泳或IFE的实验室。速率散射比浊法采用全自动仪器，操作简单、快速(每个测试仅需1 min左右)、灵敏，在有条件的医院易普及推广。另外，理论上当出现κ、λ双克隆增殖时，用κ/λ来检测M蛋白可能会漏检，有待进一步探讨。
参考文献
1，Levinson SS. An algorithmic approach using kappa/lambda ratios to improve the diagnostic accuracy of urine protein electrophoresis and to reduce the volume required for immunoelectrophoresis. Clin Chim Acta，1997，262(1-2)：121～130.
2，Fifield R，Keller I. An immunochemical evaluation for the identification and typing of monoclonal proteins. Ann Clin Biochem，1990，27(Pt 4):327～334.
, http://www.100md.com
3，Jones RG，Agnzzi F，Bienvenu J，et al. Use of immunoglobulin heavy-chain and light-chain measurements in a multicenter trial to investigate monoclonal components:1. Detection. Clin Chem，1991，37(11)：1917～1921.
4，刘，焱，高，峰，孔宪涛，等. 速率散射比浊法和ELISA法检测轻链在多发性骨髓瘤诊断中的意义. 中华血液学杂志，1995，16(11)：605～606.
5，孔宪涛，主编. 免疫球蛋白异常的基础和临床. 上海：上海科学技术文献出版社，1997：262～263.
(收稿日期：2000-01-12), http://www.100md.com
单位：510080 广州市，广东省人民医院检验科
关键词：免疫球蛋白类，轻链；副蛋白血症；散射测浊法和比浊法；免疫电泳；固定
实用医学杂志000639 摘 要 目的：探讨一种推测M蛋白的简便方法。方法：利用速率散射比浊法检测128例患者血清免疫球蛋白(Ig)IgG，IgA，IgM和轻链κ，λ含量，计算出κ与λ之比(κ/λ)，然后进行免疫固定电泳。结果：66例患者未检出M蛋白，其中63例κ/λ位于正常参考范围；62例患者检出M蛋白，其中57例κ/λ异常。结论：根据κ/λ筛选M蛋白的特异性为95.4%，灵敏度为91.9%且与M蛋白含量正相关，与免疫固定电泳符合率为93.8%。当κ/λ升高时，M蛋白轻链型为κ型；反之，为λ型，符合率为100%。当κ/λ>6或<0.4，仅一种Ig升高数倍以上而另两种Ig减少或偏低时，根据Ig含量可推测出M蛋白重链型。根据Ig含量及κ/λ筛选M蛋白并判断型别具有简便、快速、灵敏等优点。
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M蛋白病即副蛋白血症(monoclonal gammopathies)，是指由于单克隆浆细胞无限增殖而使血中出现大量均一的单克隆免疫球蛋白，又称M蛋白，常见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症等，多发于老年人。随着检测手段的日益发展及社会人群的高龄化，该病呈现逐年增多的趋势。目前M蛋白检测主要靠免疫电泳或免疫固定电泳(immunofixation electrophoresis,IFE)，但操作复杂，前者结果不易判断，后者较昂贵。本文结合免疫球蛋白(Ig)含量、κ和λ轻链含量之比(κ/λ)来推测M蛋白，具有简便、迅速、灵敏等优点，报道如下。
1 对象与方法
1.1 研究对象
1.1.1 正常对照组 健康体检者100例，其中男49例，女51例，年龄18～64岁，平均37.4岁。
1.1.2 实验组 从1997年7月～2000年1月在本院进行过IFE的住院、门诊患者共128例，其中男73例，女55例，年龄17～80岁，平均57.3岁。进行过多次IFE检测的患者，若结果相同则取第1次结果，若不同则均录入本组。
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1.2 试剂 血清Ig定量检测试剂及标准品均为Beckman公司产品。IFE使用法国Sebia公司Hydragel IF试剂盒。抗δ，ε重链血清由法国Sebia公司提供。
1.3 仪器 全自动特种蛋白分析系统(Array 360,Beckman公司)，全自动电泳仪Hydrasys(法国Sebia公司)。
1.4 方法 每份血清均先定量检测IgA，IgG、IgM，κ，λ含量，然后用抗γ，α，μ重链血清和抗κ，λ轻链血清进行IFE。若IFE图中见抗轻链M带而无抗重链M带，则再用抗δ，ε重链血清进行IFE。根据有无M蛋白将实验组93例患者分为M蛋白组和非M蛋白组。
2 结果
2.1 正常对照组 100例正常人各项目均值及正常参考值范围(
±2s)分别为IgG 13.6(9.16～18.04)g/L，IgA 2.46(0.88～4.04)g/L，IgM 1.50(0.46～2.54)g/L，κ 11.45(7.55～15.35)g/L，λ 5.78(3.22～8.34)g/L，κ/λ 2.01(1.25～2.77)。, http://www.100md.com
2.2 非M蛋白组 共66例患者，各项目均值及范围(最小值～最大值)分别为IgG 15.85(1.42～52.7)g/L，IgA 3.08(0.12～9.26)g/L，IgM 1.41(0.27～8.21)g/L，κ 13.3(1.72～40.9)g/L，λ 7.57(0.95～28.4)g/L，κ/λ 1.87(1.22～3.08)。
2.3 M蛋白组 共62例患者，M蛋白分布为16例IgG κ型，12例IgG λ型,8例IgA κ型，10例IgA λ型，5例IgM κ型，1例IgM λ型，2例单纯κ型，7例单纯λ型，1例双克隆型(IgGκ+IgMκ)。各项目均值及范围(最小值～最大值)分别为IgG 58.68(10.3～142)g/L，IgA 39.91(6.7～99.8)g/L，IgM 33.70(3.67～92)g/L,κ 60.07(5.44～191)g/L，λ 30.50(2.31～129)g/L，κ型M蛋白患者κ/λ 72.8(2.19～386.67)，λ型M蛋白患者κ/λ 0.45(0.02～1.48)。
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2.4 IFE结果与κ/λ关系 非M蛋白组：κ/λ正常63例，异常3例；而M蛋白组κ/λ正常5例，异常57例。
3 讨论
目前，鉴定M蛋白尚无公认的金标准，最敏感的方法为IFE法[1]。本组以IFE的结果作为参考，观察κ/λ检测M蛋白的能力，从上述结果可计算出其敏感性为91.9%，特异性为95.5%，与IFE法符合率93.8%。
非M蛋白组中，虽然可见Ig及轻链增高，甚至超过正常人上限数倍以上，但IFE均未检出M蛋白，因此单纯从含量的增加难以判断是否为单克隆增殖，而本组中63例(占95.5%)κ/λ正常，相比之下κ/λ在筛选M蛋白方面的特异性更好。Fifield等[2]报道874例无M蛋白血清样品中仅19例κ/λ异常，特异性达97.8%，与本文一致。
M蛋白组中，M蛋白浓度>10 g/L者49例，5～10 g/L者7例，<5 g/L者6例，其中8例在正常参考值范围内，4例甚至低于正常参考值范围低限，其余均偏高。说明单克隆增殖不一定含量都增高，而本组中κ/λ大都超出正常参考值范围，所以根据κ/λ来筛选M蛋白更敏感。本组中κ/λ正常5例，其中1例M蛋白大于10 g/L,其余4例均小于5 g/L，即当M蛋白含量小于5 g/L时，用κ/λ筛选M蛋白的灵敏度仅为33.3%，与Jones等[3]报道一致，此时不宜用κ/λ来筛选M蛋白。理论上M蛋白含量越高，正常成分由于受抑制含量越低，κ/λ变化就越大，但M蛋白含量低到一定程度时，根据κ/λ筛选M蛋白的灵敏度会降低，Jones等[3]更用实验证明了这点。当M蛋白>5g/L时，用κ/λ筛选M蛋白的灵敏度为98.2%，高于Jones等[3]报道的75%，这可能与低浓度M蛋白例数所占比例有关。
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κ/λ异常的所有病例中，当κ/λ升高时，M蛋白轻链型均为κ；κ/λ降低时，M蛋白轻链型均为λ，符合率100%，与刘焱等[4]报道一致。这是因为正常人Ig属多态性，总免疫球蛋白的两种轻链型基本稳定，单克隆增殖时某一轻链型Ig明显增高而另一种相对减少，κ/λ就会出现明显的变化。
当κ/λ>6或<0.4，某种重链Ig与某型轻链可比地增高数倍以上，而另外两种重链Ig减少或处于正常参考值范围低限附近时，M蛋白重链型均为增高的重链型Ig。此类病例在M蛋白组中占了64.5%。当κ/λ异常，但<6或>0.4时，M蛋白的重链型则不易分明。虽然鉴定M蛋白型别最终要靠免疫电泳或IFE，但依据Ig含量、κ/λ仍可推测出大部分M蛋白的重链型。
过去，在区分良、恶性M蛋白病时，很少考虑κ/λ的异同，事实上它能对此提供某些依据。根据传统的实验室检查方面的鉴别要点[5]，将M蛋白患者分为良、恶性M蛋白两组，发现恶性M蛋白组κ/λ往往>6或<0.4；良性M蛋白组2.77<κ/λ<6或0.4<κ/λ<1.25。这是因为M蛋白含量在良性M蛋白病中一般较低，在恶性M蛋白病中则很高，而κ/λ的变化程度与M蛋白的含量呈正相关性。
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综上所述，用κ/λ检测M蛋白具有一定的实用价值，特别对于没有条件开展免疫电泳或IFE的实验室。速率散射比浊法采用全自动仪器，操作简单、快速(每个测试仅需1 min左右)、灵敏，在有条件的医院易普及推广。另外，理论上当出现κ、λ双克隆增殖时，用κ/λ来检测M蛋白可能会漏检，有待进一步探讨。
参考文献
1，Levinson SS. An algorithmic approach using kappa/lambda ratios to improve the diagnostic accuracy of urine protein electrophoresis and to reduce the volume required for immunoelectrophoresis. Clin Chim Acta，1997，262(1-2)：121～130.
2，Fifield R，Keller I. An immunochemical evaluation for the identification and typing of monoclonal proteins. Ann Clin Biochem，1990，27(Pt 4):327～334.
, http://www.100md.com
3，Jones RG，Agnzzi F，Bienvenu J，et al. Use of immunoglobulin heavy-chain and light-chain measurements in a multicenter trial to investigate monoclonal components:1. Detection. Clin Chem，1991，37(11)：1917～1921.
4，刘，焱，高，峰，孔宪涛，等. 速率散射比浊法和ELISA法检测轻链在多发性骨髓瘤诊断中的意义. 中华血液学杂志，1995，16(11)：605～606.
5，孔宪涛，主编. 免疫球蛋白异常的基础和临床. 上海：上海科学技术文献出版社，1997：262～263.
(收稿日期：2000-01-12), http://www.100md.com