咬合力变化对大鼠磨牙牙周膜TGF-β1表达的影响
作者：李明哲 赵云凤 刘飞 王华蓉
单位：610041 成都，华西医科大学口腔医学院修复科
关键词：
中华口腔医学杂志000632 转化生长因子β1(transforming growth factorβ1，TGF-β1)广泛存在于动物正常组织、细胞中， 具有多种生物学功能，如促进细胞增殖、抑制间充质细胞增生、调节细胞分化与促进细胞外基质形成等。 我们用免疫组织化学法研究了咬合力丧失与代偿性增强后大鼠磨牙牙周膜(periodontal ligament,PDL)内TGF-β1表达的动态变化。
1.材料与方法：①咬合力丧失与代偿性增强动物模型的建立： 选用80只雄性体重为(250±20) g的Wistar大鼠，随机等量分为实验组和正常对照组。麻醉下拔除实验组左上颌全部磨牙。实验组动物的左下颌磨牙因失去对颌牙，咬合力丧失，咀嚼功能全由右侧磨牙代偿，右侧、左侧下颌磨牙分别构成咬合力代偿性增强、丧失的动物模型，对照组则为正常咬合力模型。②标本制备：用4%多聚甲醛行左心室灌注固定，解剖出含3颗磨牙的下颌骨段，再固定6 h，脱钙两周。洗净脱钙液，梯度乙醇脱水，石蜡包埋。组织切片的厚度一律控制为5 μm。 ③免疫组织化学染色程序(LSAB法)。④对照的设置： 阳性对照组织为大鼠皮肤；阴性对照用封闭血清代替一抗。 ⑤结果处理： 采用四川大学图形图象研究所研制的Mias-2000型图象分析仪，对各组PDL染色强度进行测量。每只动物选用一张切片进行分析，测第一磨牙双侧PDL平均灰度值，该值等于实际测量值减去同批阴性对照相应的PDL灰度值。结果进行t检验。
, 百拇医药
2.结果：①对照实验： 阴性对照均得到阴性结果。以大鼠皮肤标本为对象的TGF-β1抗体在皮下成纤维细胞中得到阳性结果。②TGF-β1的表达：TGF-β1的表达在正常咬合力组及各实验组均很强。PDL内的染色方式相同：沿纤维方向分布，胞浆、细胞间质均着色；PDL上下方向染色强度无差异；双侧PDL染色强度总体相当。不同实验组的染色强度间有一定变化。咬合力减弱组3天及1周、2周组标本的TGF-β1表达强度同正常咬合力组相比减弱较多，3周后又逐渐恢复。在咬合力增强组，1周至3周组标本的TGF-β1表达强度略减弱，第4周又逐渐恢复。
3. 讨论：本实验发现，在各时间点尽管TGF-β1的表达强度略有差异，但PDL内TGF-β1的表达水平总体上是很高的。Gao等[1](1998)也发现PDL内有较高的TGF-β1表达。这说明TGF-β1对PDL正常生理功能的维持有重要意义。TGF-β1除了能增加多种细胞外基质合成外，还可通过抑制蛋白酶的合成及促进蛋白酶抑制物的合成等阻止新生基质的降解[2]。另有研究发现，TGF-β1对I型胶原mRNA、成纤维结合蛋白mRNA还有稳定作用[3]。正常生理状态的PDL中，TGF-β1可能主要通过上述作用起到稳定牙周膜代谢，使其避免过快降解的作用。
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参考文献
1.Gao J, Symons AL, Bartold PM. Expression of transforming growth factor -beta 1 (TGF-1) in the developing periodontium of rats. J Dent Res, 1998,77:1708-1716.
2.Sporn MB, Roberts AB, Wakefield LM. Some recent advances in the chemistry and biology of transforming growth factor-beta (review). J Cell Biol, 1987, 105:1039-1045.
3.Wrana JL, Overall CM, Sodek J. Regulation of the expression of a secreted acidic protein rich in cysteine (SPARC) in human fibroblasts by transforming growth factor β. Eur J Biochem, 1991,197:519-528.
(收稿日期：1999-11-25), http://www.100md.com
单位：610041 成都，华西医科大学口腔医学院修复科
关键词：
中华口腔医学杂志000632 转化生长因子β1(transforming growth factorβ1，TGF-β1)广泛存在于动物正常组织、细胞中， 具有多种生物学功能，如促进细胞增殖、抑制间充质细胞增生、调节细胞分化与促进细胞外基质形成等。 我们用免疫组织化学法研究了咬合力丧失与代偿性增强后大鼠磨牙牙周膜(periodontal ligament,PDL)内TGF-β1表达的动态变化。
1.材料与方法：①咬合力丧失与代偿性增强动物模型的建立： 选用80只雄性体重为(250±20) g的Wistar大鼠，随机等量分为实验组和正常对照组。麻醉下拔除实验组左上颌全部磨牙。实验组动物的左下颌磨牙因失去对颌牙，咬合力丧失，咀嚼功能全由右侧磨牙代偿，右侧、左侧下颌磨牙分别构成咬合力代偿性增强、丧失的动物模型，对照组则为正常咬合力模型。②标本制备：用4%多聚甲醛行左心室灌注固定，解剖出含3颗磨牙的下颌骨段，再固定6 h，脱钙两周。洗净脱钙液，梯度乙醇脱水，石蜡包埋。组织切片的厚度一律控制为5 μm。 ③免疫组织化学染色程序(LSAB法)。④对照的设置： 阳性对照组织为大鼠皮肤；阴性对照用封闭血清代替一抗。 ⑤结果处理： 采用四川大学图形图象研究所研制的Mias-2000型图象分析仪，对各组PDL染色强度进行测量。每只动物选用一张切片进行分析，测第一磨牙双侧PDL平均灰度值，该值等于实际测量值减去同批阴性对照相应的PDL灰度值。结果进行t检验。
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2.结果：①对照实验： 阴性对照均得到阴性结果。以大鼠皮肤标本为对象的TGF-β1抗体在皮下成纤维细胞中得到阳性结果。②TGF-β1的表达：TGF-β1的表达在正常咬合力组及各实验组均很强。PDL内的染色方式相同：沿纤维方向分布，胞浆、细胞间质均着色；PDL上下方向染色强度无差异；双侧PDL染色强度总体相当。不同实验组的染色强度间有一定变化。咬合力减弱组3天及1周、2周组标本的TGF-β1表达强度同正常咬合力组相比减弱较多，3周后又逐渐恢复。在咬合力增强组，1周至3周组标本的TGF-β1表达强度略减弱，第4周又逐渐恢复。
3. 讨论：本实验发现，在各时间点尽管TGF-β1的表达强度略有差异，但PDL内TGF-β1的表达水平总体上是很高的。Gao等[1](1998)也发现PDL内有较高的TGF-β1表达。这说明TGF-β1对PDL正常生理功能的维持有重要意义。TGF-β1除了能增加多种细胞外基质合成外，还可通过抑制蛋白酶的合成及促进蛋白酶抑制物的合成等阻止新生基质的降解[2]。另有研究发现，TGF-β1对I型胶原mRNA、成纤维结合蛋白mRNA还有稳定作用[3]。正常生理状态的PDL中，TGF-β1可能主要通过上述作用起到稳定牙周膜代谢，使其避免过快降解的作用。
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参考文献
1.Gao J, Symons AL, Bartold PM. Expression of transforming growth factor -beta 1 (TGF-1) in the developing periodontium of rats. J Dent Res, 1998,77:1708-1716.
2.Sporn MB, Roberts AB, Wakefield LM. Some recent advances in the chemistry and biology of transforming growth factor-beta (review). J Cell Biol, 1987, 105:1039-1045.
3.Wrana JL, Overall CM, Sodek J. Regulation of the expression of a secreted acidic protein rich in cysteine (SPARC) in human fibroblasts by transforming growth factor β. Eur J Biochem, 1991,197:519-528.
(收稿日期：1999-11-25), http://www.100md.com