肾衰宁灌肠液对体外培养的人肾小球系膜细胞增殖及产生纤维连接蛋白的影响
作者：王景明 孙奕 叶传蕙
单位：王景明 孙奕(武警医学院，天津 300162)；叶传蕙(成都中医药大学附属医院)
关键词：肾衰宁灌肠液；肾小球系膜细胞；人；纤维连接蛋白；肾功能衰竭；慢性
中国中西医结合急救杂志000616 摘要：目的：观察肾衰宁(SSN)灌肠液对体外培养的人肾小球系膜细胞增殖及产生纤维连接蛋白(FN)的影响，以便从细胞生物学水平探讨肾衰宁防治慢性肾功能衰竭(CRF)的作用机制。方法：采用4甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和双抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)法，观察SSN大鼠血清对体外培养的人肾小球系膜细胞增殖和FN生成的影响。结果：SSN大鼠血清可抑制体外培养的人肾小球系膜细胞增殖和产生FN，其抑制程度与药物浓度有一定的量效关系：即随药物浓度的增加，对系膜细胞增殖和产生FN的抑制率也相应增加。结论：SSN对体外培养的人肾小球系膜细胞增殖和产生FN有明显的抑制作用；SSN灌肠液抑制肾小球系膜细胞增殖和FN产生是预防肾小球硬化发生发展的重要机制之一。
, http://www.100md.com
中图分类号：R285.5;R329.28 文献标识码：A
文章编号：1008-9691(2000)06-0353-03
Effect of Shenshuaining(肾衰宁) on proliferation and fibronectin production of human mesangial cells cultured in vitro
WANG Jing-ming，SUN Yi
(Medical College of the Chinese People′s Armed Police Forces,Tianjing 300162)
YE Chuan-hui
Abstract:Objective:To observe the effects of traditional Chinese herbs Shenshuaining (SSN,肾衰宁) eultured in vitro,in order to investigate the mechanisms of SSN on preventing and treating chronic renal failure(CRF) in cytobiological level.Methods:By means of MTT colorimetry and enzyme-linked immunosorbent assay the effect of serum of rat using SSN on proliferation and FN production of huMsC cultured in vitro was observed.Results:The serum of rat using SSN was able to inhibit the proliferation and FN production of huMsC cultured in vitro and the volume-efficacy relationship was existed.As the SSN concentration increased the inhibiting rate increased correspondingly.Conclusions:The SSN enema liquor possesses obviously inhibiting action on proliferation and FN production of huMsC cultured in vitro so that this is one of the important mechanisms on preventing the occurance and progress of glomerulosclerosis.
, 百拇医药
Key words:Shenshuaining enema liquor;human mesangial cell;fibronectin;chronic renal failure
本研究观察了具有益气固本、化瘀泄浊作用的中药复方制剂——肾衰宁(SSN)灌肠液对体外培养的人肾小球系膜细胞(huMsC)增殖和产生纤维连接蛋白(FN)的影响，藉以从细胞生物学水平探讨肾衰宁防治慢性肾功能衰竭的作用机制。
1 材料与方法
1.1 材料：SSN灌肠液(海南天元制药厂生产，每支20 ml，相当于生药100 g，批号：960702)；Wistar大鼠，体重(200±20)g(购自军事医学科学院四所)；小牛血清(天津血液病研究所产品)；胶原酶及胰蛋白酶(Sigma公司产品)；鼠抗人FN抗体(美国DAKO CO产品)；兔抗人FN(北京医科大学细胞生物学教研室分装)；辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG(美国Cappel CO产品)；邻苯二胺(OPD，美国Serva CO产品)。
, 百拇医药
1.2 方 法：
1.2.1 huMsC培养：无菌条件下取新鲜肾组织(肾移植配型不符的成人肾)，按文献[1]方法培养和鉴定。
1.2.2 SSN大鼠血清提取：Wistar大鼠8只，分为2组，A组以SSN灌肠液4 ml灌胃，早晚各1次；B组以生理盐水4ml灌胃，早晚各1次。于第7日灌完药后2小时，尾动脉无菌取血。分离血清，于56 ℃灭活30分钟，-20 ℃保存备用。
1.2.3 MTT比色法测定huMsC增殖：取3～4代huMsC，用胰蛋白酶消化计数，铺于96孔板(每孔4 000个)，加入15%小牛血清(FCS)1640液(正常血清浓度)；待细胞贴壁48小时后，换无血清培养液同步24小时；换5%FCS 1640液于96孔板，同时加入刺激物。每组设6个复孔，每孔200 ml，分组如下：
Ⅰ组(正常对照组)：5%FCS 1640液 200 μl；Ⅱ组(正常血清对照组)：5%FCS 1640液+正常鼠血清；Ⅲ组：5%FCS 1640液+SSN血清 (浓度1∶20)；Ⅳ组：5%FCS 1640液+SSN血清 (浓度1∶10)；Ⅴ组：5%FCS 1640液+SSN血清 (浓度1∶5)。
, 百拇医药
将此加样后的96孔板置于37 ℃、5%CO2孵箱培养96小时。提前4小时加入4甲基偶氮唑盐(MTT)10 μl。待培养时间达到96小时后加入二甲基亚砜(DMSO)200 μl。室温避光10～30分钟，492 nm波长读数。记录吸光度A值，参照文献[2]方法计算抑制率。
抑制率=(对照组均数(x)-实验组均数(x))/(对照组均数(x))×100%
1.2.4 FN含量测定：取3～4代huMsC，用胰蛋白酶消化计数，铺于96孔板(每孔4 000个)。加入15% FCS 1640液(正常血清浓度)。待细胞贴壁48小时后，换无血清培养液同步24小时。弃上清，每孔分别加入刺激物200 μl于96孔板，每组设6个复孔，分组同上。将加样后的96孔板置37 ℃、5% CO2孵箱中培养48小时后，收集上清液，采用双抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)法测定FN含量。具体步骤如下：
, 百拇医药
0.5 g/L鼠抗人FN抗体原液用包被缓冲液稀释1 000倍。取96孔板，每孔50 μl铺板，4 ℃过夜，甩去。用PBS吐温20洗涤液洗板3次，每次3分钟，间隔2分钟，控干。每孔加入1%牛血清白蛋白(BSA)封闭液100 μl，37 ℃，1小时后甩去，控干。依次按组各孔分别加入待测样品50 μl，37 ℃，3小时后甩去。用PBS吐温20洗板4次，每次3分钟，间隔2分钟，控干。每孔加兔抗人FN抗血清(原液用1%BSA*PBS 1∶1 000稀释)50 μl，室温放置60分钟。用PBS吐温20洗板4次，每次3分钟，间隔2分钟，控干。每孔加HRP羊抗兔IgG(用0.1%BSA*PBS 1∶1 000稀释)50 μl，室温放置50分钟。用PBS吐温20洗板4次，每次3分钟，间隔2分钟，控干。每孔加OPD显色液50 μl，预热酶标仪，用2 mol/L H2SO4，每孔加终止液50 μl终止，立即在492 nm波长下读数，记录A值并计算抑制率。
1.3 数据处理:数据以均数±标准差(
±s)表示，采用非配对t检验。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 SSN对体外培养的huMsC增殖的影响：由表1可见，Ⅱ组与Ⅰ组相比无显著性差异(P>0.05)，说明正常血清对huMsC增殖无影响。含SSN血清组(Ⅲ～Ⅴ组)与Ⅰ、Ⅱ组相比均有极显著性差异。SSN各组间比较亦有极显著性差异(P均<0.01)，抑制率由低浓度到高浓度呈逐渐上升的趋势，表明SSN抑制huMsC的增殖，且该抑制作用呈现一定的量效关系，即浓度越高，抑制率越高。
表1 SSN对体外培养的huMsC增殖的影响 组别
刺激因素
A值(±s)
抑制率(%)
Ⅰ组
, 百拇医药
正常对照
0.472±0.016
Ⅱ组
正常血清对照
0.468±0.014
Ⅲ组
SSN大鼠血清低浓度(1∶20)
0.402±0.016
14.10
Ⅳ组
SSN大鼠血清中浓度(1∶10)
0.363±0.021
, 百拇医药
22.44
Ⅴ组
SSN大鼠血清高浓度(1∶5)
0.242±0.009
48.29
2.2 SSN对体外培养的huMsC产生FN的影响：由表2可见，Ⅱ组与Ⅰ组相比无显著性差异(P>0.05)，说明正常血清对huMsC的FN产生无影响。含SSN血清组(Ⅲ～Ⅴ组)与Ⅰ、Ⅱ组相比除Ⅲ组为显著性差异外，其它2组均有极显著性差异。SSN各组间比较亦有极显著性差异，抑制率由低浓度到高浓度呈逐渐上升的趋势，表明SSN可抑制huMsC产生FN，且该抑制作用呈现一定的量效关系，即浓度越高，抑制率越高。表2 肾衰宁对体外培养的huMsC产生FN的影响 组别
刺激因素
, http://www.100md.com
A值(±s)
抑制率(%)
Ⅰ组
正常对照
0.402±0.015
Ⅱ组
正常血清对照
0.403±0.013
Ⅲ组
SSN大鼠血清低浓度(1∶20)
0.379±0.016
, http://www.100md.com
11.86
Ⅳ组
SSN大鼠血清中浓度(1∶10)
0.309±0.025
23.33
Ⅴ组
SSN大鼠血清高浓度(1∶5)
0.255±0.015
36.72
3 讨 论
在肾小球损伤过程中，无论是局部因素，还是从体循环来源的各种介质，系膜细胞总是最先受损。系膜细胞的功能改变又可产生一系列连锁反应，使损伤效应不断放大，最终导致肾小球毁损、硬化。
, 百拇医药
肾小球系膜细胞属于血管周细胞，是反应活跃的肾小球固有细胞，具有单核巨噬细胞样功能，可以吞噬和处理免疫复合物，清除沉积在基膜上的大分子蛋白质，维持肾小球滤过膜的通透性，并可产生细胞外基质和多种细胞因子，在正常情况下，系膜细胞不发生明显的增殖活动，而在炎症等病理情况下，则可见异常增生[3]。因此，系膜细胞增殖常常是各种肾小球疾病的主要形态表现[4]。
系膜细胞的过度增殖，一方面突入肾小球毛细血管腔，导致管腔狭窄或闭塞；另一方面又可造成细胞外基质(ECM)的大量产生与积聚。大量研究表明，系膜细胞增殖与ECM的增多有关[58]。提示肾小球系膜细胞过度增殖引起ECM合成的增加，进而导致ECM在肾小球内的蓄积，是肾小球硬化发生、发展的重要机制，亦是造成肾脏功能进行性损害的重要环节。因此，若能有效地抑制系膜细胞异常增殖和ECM的过度积聚，则可阻碍肾小球硬化的形成，防止肾功能的恶化。
FN是ECM的重要组成部分，在肾小球硬化过程中，它是ECM中早期出现明显变化的指标之一[6]。本实验结果表明，SSN具有抑制huMsC增殖及产生FN的作用亦即抑制了ECM的产生，且该抑制作用具有一定的量效关系。提示抑制MsC增殖和抑制ECM的产生，可能是SSN防治肾小球硬化发生、发展的重要环节之一。
, 百拇医药
基金项目：武警医学院科研基金资助项目(No.WY9905)
作者简介：王景明(1957-)，男(汉族)，北京市人，医学博士，讲师。
参考文献：
[1]于力方，陈香美.正常人肾小球系膜细胞培养的研究.中华医学杂志，1990,70(2)：70-74.
[2]谌贻璞，高进，邢宝才，等.肾小球系膜细胞培养.北京医科大学学报，1989，21(4)：335-336.
[3]张喜元.肾小球损害机理的进展.国外医学泌尿系统分册，1994，14(5)：196-199.
[4]董葆，邹万忠，由江峰.肾小球系膜细胞增生与系膜硬化机制的初步探讨.中华病理学杂志，1994，23(1)：10-13.
, 百拇医药
[5]Floege J，Johnson R J，Gorderk，et al.Increased synthsis of extracellular matrix in mesangial proliferative nephritis.Kindney Int，1991，40(3):477-488.
[6]Alpers C E，Hudkins K L，Grown A M，et al.Enhanced expression of“muscles-pecific”actin in glomerulonephritis.Kidney Int,1992,41(5):1134-1142.
[7]Floege J,Alpers C E，Burns M W，et al.Glomerular cells,extracellular matrix accumulation，and the development of glomerulosclerosis in the remnant kidney model.Lab Invest,1992,66(4):485-497.
[8]Le-J M，Vilcek J.Tumor necrosis factor and interleukin 1:cytokins with multiple overlapping biological activities.Lab Invest,1987，56(3):234-244.
(收稿日期：2000-08-16 修回日期：2000-10-20), http://www.100md.com
单位：王景明 孙奕(武警医学院，天津 300162)；叶传蕙(成都中医药大学附属医院)
关键词：肾衰宁灌肠液；肾小球系膜细胞；人；纤维连接蛋白；肾功能衰竭；慢性
中国中西医结合急救杂志000616 摘要：目的：观察肾衰宁(SSN)灌肠液对体外培养的人肾小球系膜细胞增殖及产生纤维连接蛋白(FN)的影响，以便从细胞生物学水平探讨肾衰宁防治慢性肾功能衰竭(CRF)的作用机制。方法：采用4甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和双抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)法，观察SSN大鼠血清对体外培养的人肾小球系膜细胞增殖和FN生成的影响。结果：SSN大鼠血清可抑制体外培养的人肾小球系膜细胞增殖和产生FN，其抑制程度与药物浓度有一定的量效关系：即随药物浓度的增加，对系膜细胞增殖和产生FN的抑制率也相应增加。结论：SSN对体外培养的人肾小球系膜细胞增殖和产生FN有明显的抑制作用；SSN灌肠液抑制肾小球系膜细胞增殖和FN产生是预防肾小球硬化发生发展的重要机制之一。
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中图分类号：R285.5;R329.28 文献标识码：A
文章编号：1008-9691(2000)06-0353-03
Effect of Shenshuaining(肾衰宁) on proliferation and fibronectin production of human mesangial cells cultured in vitro
WANG Jing-ming，SUN Yi
(Medical College of the Chinese People′s Armed Police Forces,Tianjing 300162)
YE Chuan-hui
Abstract:Objective:To observe the effects of traditional Chinese herbs Shenshuaining (SSN,肾衰宁) eultured in vitro,in order to investigate the mechanisms of SSN on preventing and treating chronic renal failure(CRF) in cytobiological level.Methods:By means of MTT colorimetry and enzyme-linked immunosorbent assay the effect of serum of rat using SSN on proliferation and FN production of huMsC cultured in vitro was observed.Results:The serum of rat using SSN was able to inhibit the proliferation and FN production of huMsC cultured in vitro and the volume-efficacy relationship was existed.As the SSN concentration increased the inhibiting rate increased correspondingly.Conclusions:The SSN enema liquor possesses obviously inhibiting action on proliferation and FN production of huMsC cultured in vitro so that this is one of the important mechanisms on preventing the occurance and progress of glomerulosclerosis.
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Key words:Shenshuaining enema liquor;human mesangial cell;fibronectin;chronic renal failure
本研究观察了具有益气固本、化瘀泄浊作用的中药复方制剂——肾衰宁(SSN)灌肠液对体外培养的人肾小球系膜细胞(huMsC)增殖和产生纤维连接蛋白(FN)的影响，藉以从细胞生物学水平探讨肾衰宁防治慢性肾功能衰竭的作用机制。
1 材料与方法
1.1 材料：SSN灌肠液(海南天元制药厂生产，每支20 ml，相当于生药100 g，批号：960702)；Wistar大鼠，体重(200±20)g(购自军事医学科学院四所)；小牛血清(天津血液病研究所产品)；胶原酶及胰蛋白酶(Sigma公司产品)；鼠抗人FN抗体(美国DAKO CO产品)；兔抗人FN(北京医科大学细胞生物学教研室分装)；辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG(美国Cappel CO产品)；邻苯二胺(OPD，美国Serva CO产品)。
, 百拇医药
1.2 方 法：
1.2.1 huMsC培养：无菌条件下取新鲜肾组织(肾移植配型不符的成人肾)，按文献[1]方法培养和鉴定。
1.2.2 SSN大鼠血清提取：Wistar大鼠8只，分为2组，A组以SSN灌肠液4 ml灌胃，早晚各1次；B组以生理盐水4ml灌胃，早晚各1次。于第7日灌完药后2小时，尾动脉无菌取血。分离血清，于56 ℃灭活30分钟，-20 ℃保存备用。
1.2.3 MTT比色法测定huMsC增殖：取3～4代huMsC，用胰蛋白酶消化计数，铺于96孔板(每孔4 000个)，加入15%小牛血清(FCS)1640液(正常血清浓度)；待细胞贴壁48小时后，换无血清培养液同步24小时；换5%FCS 1640液于96孔板，同时加入刺激物。每组设6个复孔，每孔200 ml，分组如下：
Ⅰ组(正常对照组)：5%FCS 1640液 200 μl；Ⅱ组(正常血清对照组)：5%FCS 1640液+正常鼠血清；Ⅲ组：5%FCS 1640液+SSN血清 (浓度1∶20)；Ⅳ组：5%FCS 1640液+SSN血清 (浓度1∶10)；Ⅴ组：5%FCS 1640液+SSN血清 (浓度1∶5)。
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将此加样后的96孔板置于37 ℃、5%CO2孵箱培养96小时。提前4小时加入4甲基偶氮唑盐(MTT)10 μl。待培养时间达到96小时后加入二甲基亚砜(DMSO)200 μl。室温避光10～30分钟，492 nm波长读数。记录吸光度A值，参照文献[2]方法计算抑制率。
抑制率=(对照组均数(x)-实验组均数(x))/(对照组均数(x))×100%
1.2.4 FN含量测定：取3～4代huMsC，用胰蛋白酶消化计数，铺于96孔板(每孔4 000个)。加入15% FCS 1640液(正常血清浓度)。待细胞贴壁48小时后，换无血清培养液同步24小时。弃上清，每孔分别加入刺激物200 μl于96孔板，每组设6个复孔，分组同上。将加样后的96孔板置37 ℃、5% CO2孵箱中培养48小时后，收集上清液，采用双抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)法测定FN含量。具体步骤如下：
, 百拇医药
0.5 g/L鼠抗人FN抗体原液用包被缓冲液稀释1 000倍。取96孔板，每孔50 μl铺板，4 ℃过夜，甩去。用PBS吐温20洗涤液洗板3次，每次3分钟，间隔2分钟，控干。每孔加入1%牛血清白蛋白(BSA)封闭液100 μl，37 ℃，1小时后甩去，控干。依次按组各孔分别加入待测样品50 μl，37 ℃，3小时后甩去。用PBS吐温20洗板4次，每次3分钟，间隔2分钟，控干。每孔加兔抗人FN抗血清(原液用1%BSA*PBS 1∶1 000稀释)50 μl，室温放置60分钟。用PBS吐温20洗板4次，每次3分钟，间隔2分钟，控干。每孔加HRP羊抗兔IgG(用0.1%BSA*PBS 1∶1 000稀释)50 μl，室温放置50分钟。用PBS吐温20洗板4次，每次3分钟，间隔2分钟，控干。每孔加OPD显色液50 μl，预热酶标仪，用2 mol/L H2SO4，每孔加终止液50 μl终止，立即在492 nm波长下读数，记录A值并计算抑制率。
1.3 数据处理:数据以均数±标准差(
±s)表示，采用非配对t检验。, 百拇医药
2 结 果
2.1 SSN对体外培养的huMsC增殖的影响：由表1可见，Ⅱ组与Ⅰ组相比无显著性差异(P>0.05)，说明正常血清对huMsC增殖无影响。含SSN血清组(Ⅲ～Ⅴ组)与Ⅰ、Ⅱ组相比均有极显著性差异。SSN各组间比较亦有极显著性差异(P均<0.01)，抑制率由低浓度到高浓度呈逐渐上升的趋势，表明SSN抑制huMsC的增殖，且该抑制作用呈现一定的量效关系，即浓度越高，抑制率越高。
表1 SSN对体外培养的huMsC增殖的影响 组别
刺激因素
A值(
±s)抑制率(%)
Ⅰ组
, 百拇医药
正常对照
0.472±0.016
Ⅱ组
正常血清对照
0.468±0.014
Ⅲ组
SSN大鼠血清低浓度(1∶20)
0.402±0.016
14.10
Ⅳ组
SSN大鼠血清中浓度(1∶10)
0.363±0.021
, 百拇医药
22.44
Ⅴ组
SSN大鼠血清高浓度(1∶5)
0.242±0.009
48.29
2.2 SSN对体外培养的huMsC产生FN的影响：由表2可见，Ⅱ组与Ⅰ组相比无显著性差异(P>0.05)，说明正常血清对huMsC的FN产生无影响。含SSN血清组(Ⅲ～Ⅴ组)与Ⅰ、Ⅱ组相比除Ⅲ组为显著性差异外，其它2组均有极显著性差异。SSN各组间比较亦有极显著性差异，抑制率由低浓度到高浓度呈逐渐上升的趋势，表明SSN可抑制huMsC产生FN，且该抑制作用呈现一定的量效关系，即浓度越高，抑制率越高。表2 肾衰宁对体外培养的huMsC产生FN的影响 组别
刺激因素
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A值(
±s)抑制率(%)
Ⅰ组
正常对照
0.402±0.015
Ⅱ组
正常血清对照
0.403±0.013
Ⅲ组
SSN大鼠血清低浓度(1∶20)
0.379±0.016
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11.86
Ⅳ组
SSN大鼠血清中浓度(1∶10)
0.309±0.025
23.33
Ⅴ组
SSN大鼠血清高浓度(1∶5)
0.255±0.015
36.72
3 讨 论
在肾小球损伤过程中，无论是局部因素，还是从体循环来源的各种介质，系膜细胞总是最先受损。系膜细胞的功能改变又可产生一系列连锁反应，使损伤效应不断放大，最终导致肾小球毁损、硬化。
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肾小球系膜细胞属于血管周细胞，是反应活跃的肾小球固有细胞，具有单核巨噬细胞样功能，可以吞噬和处理免疫复合物，清除沉积在基膜上的大分子蛋白质，维持肾小球滤过膜的通透性，并可产生细胞外基质和多种细胞因子，在正常情况下，系膜细胞不发生明显的增殖活动，而在炎症等病理情况下，则可见异常增生[3]。因此，系膜细胞增殖常常是各种肾小球疾病的主要形态表现[4]。
系膜细胞的过度增殖，一方面突入肾小球毛细血管腔，导致管腔狭窄或闭塞；另一方面又可造成细胞外基质(ECM)的大量产生与积聚。大量研究表明，系膜细胞增殖与ECM的增多有关[58]。提示肾小球系膜细胞过度增殖引起ECM合成的增加，进而导致ECM在肾小球内的蓄积，是肾小球硬化发生、发展的重要机制，亦是造成肾脏功能进行性损害的重要环节。因此，若能有效地抑制系膜细胞异常增殖和ECM的过度积聚，则可阻碍肾小球硬化的形成，防止肾功能的恶化。
FN是ECM的重要组成部分，在肾小球硬化过程中，它是ECM中早期出现明显变化的指标之一[6]。本实验结果表明，SSN具有抑制huMsC增殖及产生FN的作用亦即抑制了ECM的产生，且该抑制作用具有一定的量效关系。提示抑制MsC增殖和抑制ECM的产生，可能是SSN防治肾小球硬化发生、发展的重要环节之一。
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基金项目：武警医学院科研基金资助项目(No.WY9905)
作者简介：王景明(1957-)，男(汉族)，北京市人，医学博士，讲师。
参考文献：
[1]于力方，陈香美.正常人肾小球系膜细胞培养的研究.中华医学杂志，1990,70(2)：70-74.
[2]谌贻璞，高进，邢宝才，等.肾小球系膜细胞培养.北京医科大学学报，1989，21(4)：335-336.
[3]张喜元.肾小球损害机理的进展.国外医学泌尿系统分册，1994，14(5)：196-199.
[4]董葆，邹万忠，由江峰.肾小球系膜细胞增生与系膜硬化机制的初步探讨.中华病理学杂志，1994，23(1)：10-13.
, 百拇医药
[5]Floege J，Johnson R J，Gorderk，et al.Increased synthsis of extracellular matrix in mesangial proliferative nephritis.Kindney Int，1991，40(3):477-488.
[6]Alpers C E，Hudkins K L，Grown A M，et al.Enhanced expression of“muscles-pecific”actin in glomerulonephritis.Kidney Int,1992,41(5):1134-1142.
[7]Floege J,Alpers C E，Burns M W，et al.Glomerular cells,extracellular matrix accumulation，and the development of glomerulosclerosis in the remnant kidney model.Lab Invest,1992,66(4):485-497.
[8]Le-J M，Vilcek J.Tumor necrosis factor and interleukin 1:cytokins with multiple overlapping biological activities.Lab Invest,1987，56(3):234-244.
(收稿日期：2000-08-16 修回日期：2000-10-20), http://www.100md.com