一氧化氮在全脑缺血再灌注大鼠脑损害中的作用
作者：尹昌林 熊健琼 张远军 文亮
单位：尹昌林(第三军医大学附属西南医院急救部ICU，重庆 400038)；熊健琼(第三军医大学附属西南医院急救部ICU，重庆 400038)；张远军(第一军医大学附属南方医院麻醉科，广州 510516)；文亮(第三军医大学附属西南医院急救部ICU，重庆 400038)
关键词：一氧化氮；缺血再灌注；脑损害
第三军医大学学报000717 提 要： 目的 探讨一氧化氮在全脑缺血20 min后再灌注大鼠脑损害中的作用。方法 雄性Wistar大鼠84只，体重(220±20)g，随机分为对照组(12只)和缺血组(72只)，后者设8、24、48、72、96、168 h 6个时相点。参照Pulsinelli等的方法制作大鼠全脑缺血20 min再灌注模型，于再灌注后8、24、48、72、96、168 h活杀取血及海马组织，对照组施行麻醉及手术，但不缺血，观察72 h后取血及海马组织，测定血清NSE、海马NO含量及海马CA1区锥体神经元(Pyramidal neuron,PN)密度。结果 ①海马NO含量于缺血再灌注后48 h明显升高，72 h达峰值(与对照组比较P均<0.01)，以后逐渐下降(96 h仍明显高于对照组水平，P<0.05)，168 h降至接近对照组；②缺血组各时相点血清NSE含量均显著高于对照组(P均<0.01)；③缺血组海马CA1区PN密度呈明显的逐渐减少趋势，自48 h后均明显低于对照组(P均<0.01)，再灌注后168 h仅为对照组水平的22.8%;④缺血再灌注后海马NO含量与血清NSE水平的变化呈显著的线性正相关(r=0.9022,P<0.01)。结论 NO在全脑缺血再灌注损伤中起着重要作用，是引起海马CA1区锥体神经元DND发生的主要因素之一。
, 百拇医药
中图法分类号： R743.31;R619.9 文献标识码： A
文章编号：1000-5404(2000)07-0670-03
Role of nitric oxide in cerebral ischemia reperfusion injury in rats
YIN Chang-lin, XIONG Jian-qong, ZHANG Yuan-jun, WEN Liang
(Department of Emergency Service, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China)
Abstract： Objective To explore the role of nitric oxide (NO) in the brain injury in the rat model of reperfusion 20 min after cerebral ischemia. Methods Eighty-four male Wistar rats (weight 220±20 g) were randomized into control group (n=12) and ischemia group (n=72). The rats of ischemia group were established with Pulsinelli's method and killed at the time points of 8, 24, 48, 72, 96, 168 h after reperfusion. The neuron specific enolase (NSE) level in serum, the NO content and the pyramidal neuron (PN) density of CA1 area in the hippocampus were determined respectively. Results ①The NO content in the hippocampus increased significantly at the 48th h (P<0.01), reached a peak at the 72nd h (P<0.01), decreased gradually from the 96th h (P<0.05) and fell to the level of control group at the 168th h after reperfusion. ②The NSE level in serum was significantly higher in ischemia group at every time points than in control group (P<0.01). ③The PN density in CA1 area of the hippocampus decreased in ischemia group and was significantly lower in this group than in the control (P<0.01). It was only 22.8% of that of the control at the 168th h after reperfusion. ④In ischemia group, the NO content in the hippocampus had linear correlation with the change of the serum NSE level (r=0.9022, P<0.01). Conclusion NO plays an important role in cerebral ischemia reperfusion and is an important factor which contributing to delayed neuronal death in CA1 area of the hippocampus.
, 百拇医药
Key words： nitric oxide; cerebral ischemia reperfusion; brain injury
全脑缺血再灌注损伤可能与多方面的原因有关[2]。近来研究表明，短暂性脑缺血等打击后多将发生迟发性神经元坏死(Delayed neuronal death,DND)[1]，而一氧化氮(Nitric oxide,NO)在脑长时间大量产生与DND的发生密切相关[3]，但具体机制尚未阐明。本实验采用Pulsinelli全脑缺血大鼠模型[4]，通过检测脑海马中NO含量、海马CA1区PN密度及血清中神经元特异性烯醇化酶(Neuron specific enolase,NSE)含量，探讨全脑缺血再灌注后脑损害的发生与NO的关系。
1 材料与方法
1.1 动物模型的复制 雄性Wistar大鼠84只(第三军医大学动物所提供)，体重(220±20)g，随机分为对照组(12只)和缺血组(72只)，后者设立缺血后8、24、48、72、96、168 h 6个时相点，每点动物12只。按Pulsinelli等[1]的方法复制大鼠全脑缺血模型。缺血组于各时相点活杀取血及海马组织；对照组除不缺血外，其它处理同缺血组，观察72 h后活杀取血及海马组织。
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1.2 指标测定
NSE的测定：所获血标本置干燥管中，2000×g离心10 min，取血清于干净的Eppendof管中，-40°C保存。NSE的测定按NSE试剂盒(北京邦定公司提供)标准操作，以ELISA法测定。NO的测定：随机抽取各时相点达成功标准的动物6只，活杀取脑，冰浴分离海马，称重，按1∶5加入0.1mol/L冰磷酸钾缓冲液(含1mmol/LEDTA)，冰浴匀浆，超声细胞破碎仪破碎细胞(100W,15s)，4°C14 000r/min离心10min，取上清液检测NO含量。NO测定按NO试剂盒(北京邦定公司提供)标准操作。
1.3 光镜观察 达成功标准的各时相点动物(3～6只)固定，4%多聚甲醛-磷酸盐缓冲液(pH7.3)经心灌注固定，取出脑组织置同固定液中24h，石蜡包埋，于视交叉后1mm冠状切片，尼氏染色，光镜下观察海马组织病理变化，按Kirino等[5]的方法确定海马CA1区PN密度。
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1.4 统计学处理 所有结果以
±s表示，用MicrosoftExcel进行方差分析。40°C保存。NSE的测定按NSE试剂盒(北京邦定公司提供)标准操作，以ELISA法测定。NO的测定：随机抽取各时相点达成功标准的动物6只，活杀取脑，冰浴分离海马，称重，按1∶5加入0.1mol/L冰磷酸钾缓冲液(含1mmol/LEDTA)，冰浴匀浆，超声细胞破碎仪破碎细胞(100W,15s)，4°C14 000r/min离心10min，取上清液检测NO含量。NO测定按NO试剂盒(北京邦定公司提供)标准操作。
1.3 光镜观察 达成功标准的各时相点动物(3～6只)固定，4%多聚甲醛-磷酸盐缓冲液(pH7.3)经心灌注固定，取出脑组织置同固定液中24h，石蜡包埋，于视交叉后1mm冠状切片，尼氏染色，光镜下观察海马组织病理变化，按Kirino等[5]的方法确定海马CA1区PN密度。
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1.4 统计学处理 所有结果以±s表示，用MicrosoftExcel进行方差分析。
2 结果
2.1 海马NO含量的变化 缺血组8、24h海马NO含量无明显升高，48～96h显著升高，以72h最明显，与对照组比较差别显著(48h和72hP<0.01,96hP<0.05)，之后逐渐降至对照组水平。
2.2 血清NSE的变化 缺血组8h后血清NSE水平即明显上升，72h达到峰值，之后逐渐下降，直到168h仍明显高于对照组水平(P<0.01)。
2.3 光镜观察结果 对照组海马CA1区PN排列有序，密度正常，无异常的形态学变化；缺血组8、24h海马CA1区PN出现轻度细胞肿胀，其密度与对照组无显著差别(P>0.05)；48h海马CA1区PN出现明显细胞肿胀和核偏移，其密度明显下降(2.1 海马NO含量的变化 缺血组8、24h海马NO含量无明显升高，48～96h显著升高，以72h最明显，与对照组比较差别显著(48h和72hP<0.01,96hP<0.05)，之后逐渐降至对照组水平。
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2.2 血清NSE的变化 缺血组8h后血清NSE水平即明显上升，72h达到峰值，之后逐渐下降，直到168h仍明显高于对照组水平(P<0.01)。
2.3 光镜观察结果 对照组海马CA1区PN排列有序，密度正常，无异常的形态学变化；缺血组8、24h海马CA1区PN出现轻度细胞肿胀，其密度与对照组无显著差别(P>0.05)；48h海马CA1区PN出现明显细胞肿胀和核偏移，其密度明显下降(P<0.01)，之后各时相点仍呈继续下降，到96 h后仅残留少数散在的正常PN并伴有反应性的胶质细胞出现，至168 h CA1区正常PN进一步减少，仅为对照组水平的22.8%，结果见表1。
表1 缺血后脑海马NO含量、血清NSE含量和海马CA1区PN密度的变化
Tab 1 Changes of the content of NO in hippocampus, plasma NSE level and hippocampal PN
, 百拇医药
density of CA1 subfield in brain after cerebral ischemia-reperfusion Group
Control
Time after 20 min cerebral ischemia-reperfusion(h)
8
24
48
72
96
168
Content of NO(pmol/mg)
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19.5±3.7
21.2±2.5
22.5±5.4
52.2±8.1* *
54.5±5.9* *
32.3±6.9*
19.4±3.7
Plasma NSE level(ng/ml)
6.87±1.8
42.3±11.5* *
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69.3±19.7* *
138.3±32.4* *
144.1±32.2* *
87.5±15.2* *
37.8±15.2* *
PN desity of CA1 subfield(mm-1)
212±10.5
204.2±7.1
194.3±14.1
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140.3±12.5* *
125±15.3* *
62.2±12.3* *
46.5±14.1* *
*:P<0.05,* *:P<0.01 vs control
3 讨论
NSE特异定位于神经元和神经内分泌细胞胞浆内的可溶性蛋白，分子量约78 000，其功能与糖代谢有关。脑缺血后 ，缺血区神经元胞膜通透性增加及血脑屏障破坏使血清NSE增高，其增高的程度与脑损害程度呈正相关。
全脑缺血再灌注损伤后DND的发生是脑复苏难以成功的主要原因之一。近来有报道大量NO的产生与释放所引起的神经毒性是导致DND的关键[4]。本实验采用大鼠全脑缺血再灌注模型进行的研究表明：全脑缺血20 min-再灌注后8 h，反映脑损害发生的NSE明显升高，但到再灌注后48 h才出现海马NO含量的明显升高及海马CA1区PN密度显著降低，说明NO并不参与全脑缺血后的早期脑损伤；但随着再灌注后48 h海马NO含量明显升高，海马CA1区PN密度显著降低，而血清NSE水平也显著升高并达到峰值，表明NO大量而长时间产生引起的神经毒性可能在缺血再灌注损伤后海马CA1区锥体神经元DND的发生中起重要作用。本实验中全脑缺血后海马CA1区锥体细胞的典型DNA出现于再灌注后48～96 h，与以往的报道一致[2]，而海马NO含量升高也出现于48～96 h，二者发生的时相同步，说明NO的产生及释放的确与缺血后海马CA1区锥体神经元DND的发生密切相关。
, 百拇医药
关于NO引起神经元损伤的具体机制目前尚未完全阐明。已有的研究提示NO可能从下述几个方面引起神经元损伤：①抑制线粒体呼吸链导致细胞氧化磷酸化障碍，影响ATP的合成[6]；同时过度激活多二磷酸腺苷核糖合成酶，耗竭细胞能量，最终导致细胞死亡；②扩大NMDA受体介导的神经毒性[7]，同时介导非MDA受体的神经毒性[8]；③作用于转铁核糖核酸还原酶，使ADP核糖化，抑制DNA合成，引起基因毒性[4]；④通过自由基链式反应导致巯基蛋白和脂质过氧化，影响细胞内多种酶和生物膜的功能，使细胞最终死亡。
作者简介：尹昌林(1970-)，男，四川省彭州市人，硕士，医师，助教，主要从事心肺脑复苏方面的研究。电话：(023)65318301-73042
参考文献：
[1] Pulsinelli W A, Brierley J B, Plum F. Temporal profile of neuronal damage in a model of trasient forebrain ischemia[J]. Ann Neurol,1982,11(4):491-493.
, http://www.100md.com
[2] Ernster L. Biochemistry of reoxygenation injury[J]. Crit Care Med,1988,16(9):947-948.
[3] Dawson V L, Brahmbhatt H P, Mong J A. Expression of indu-cible nitric oxide synthase causes delayed neurotoxicity in primary mixed neuronal-glial cortical cultures[J]. Neuropharmacology,1994,33(11):1 425-1 426.
[4] Pulsinelli W, Brierley J. A new model of bilateral hemispheric ischemia in the unanesthetized rat[J]. Stroke,1979,10(3):267-269.
, http://www.100md.com
[5] Kirino T, Tamura A, Sano K. A reversible type of neuronal injury following ischemia in the gerbil hippocampus[J]. Stroke,1986,17(5):455-457.
[6] Bolanos P, Simon J R, John M, et al. Effect of peroxynitrite on the mitochondrial respiratory chain,differential susceptibility of neurons and astrocytes in primary culture[J]. J Neurochem,1995,64(5):1 965-1 966.
[7] Sandra J, Judith K, Doug L, et al. Potentiation of oxygen-glucose deprivation induced neuronal death after induction of iNOS[J]. Stroke,1996,27(9):1 586-1 588.
[8] Schmidt W, Wolf G, Calka J, et al. Evidence for bidirectional changes in nitric oxide synthase activity in the rat striatum after excitotoxically(quinolinic acid) induced degeneration[J]. Neurosci,1995,6 712(7):345-346.
收稿日期：1999-03-28；修回日期：1999-10-15, http://www.100md.com
单位：尹昌林(第三军医大学附属西南医院急救部ICU，重庆 400038)；熊健琼(第三军医大学附属西南医院急救部ICU，重庆 400038)；张远军(第一军医大学附属南方医院麻醉科，广州 510516)；文亮(第三军医大学附属西南医院急救部ICU，重庆 400038)
关键词：一氧化氮；缺血再灌注；脑损害
第三军医大学学报000717 提 要： 目的 探讨一氧化氮在全脑缺血20 min后再灌注大鼠脑损害中的作用。方法 雄性Wistar大鼠84只，体重(220±20)g，随机分为对照组(12只)和缺血组(72只)，后者设8、24、48、72、96、168 h 6个时相点。参照Pulsinelli等的方法制作大鼠全脑缺血20 min再灌注模型，于再灌注后8、24、48、72、96、168 h活杀取血及海马组织，对照组施行麻醉及手术，但不缺血，观察72 h后取血及海马组织，测定血清NSE、海马NO含量及海马CA1区锥体神经元(Pyramidal neuron,PN)密度。结果 ①海马NO含量于缺血再灌注后48 h明显升高，72 h达峰值(与对照组比较P均<0.01)，以后逐渐下降(96 h仍明显高于对照组水平，P<0.05)，168 h降至接近对照组；②缺血组各时相点血清NSE含量均显著高于对照组(P均<0.01)；③缺血组海马CA1区PN密度呈明显的逐渐减少趋势，自48 h后均明显低于对照组(P均<0.01)，再灌注后168 h仅为对照组水平的22.8%;④缺血再灌注后海马NO含量与血清NSE水平的变化呈显著的线性正相关(r=0.9022,P<0.01)。结论 NO在全脑缺血再灌注损伤中起着重要作用，是引起海马CA1区锥体神经元DND发生的主要因素之一。
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中图法分类号： R743.31;R619.9 文献标识码： A
文章编号：1000-5404(2000)07-0670-03
Role of nitric oxide in cerebral ischemia reperfusion injury in rats
YIN Chang-lin, XIONG Jian-qong, ZHANG Yuan-jun, WEN Liang
(Department of Emergency Service, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China)
Abstract： Objective To explore the role of nitric oxide (NO) in the brain injury in the rat model of reperfusion 20 min after cerebral ischemia. Methods Eighty-four male Wistar rats (weight 220±20 g) were randomized into control group (n=12) and ischemia group (n=72). The rats of ischemia group were established with Pulsinelli's method and killed at the time points of 8, 24, 48, 72, 96, 168 h after reperfusion. The neuron specific enolase (NSE) level in serum, the NO content and the pyramidal neuron (PN) density of CA1 area in the hippocampus were determined respectively. Results ①The NO content in the hippocampus increased significantly at the 48th h (P<0.01), reached a peak at the 72nd h (P<0.01), decreased gradually from the 96th h (P<0.05) and fell to the level of control group at the 168th h after reperfusion. ②The NSE level in serum was significantly higher in ischemia group at every time points than in control group (P<0.01). ③The PN density in CA1 area of the hippocampus decreased in ischemia group and was significantly lower in this group than in the control (P<0.01). It was only 22.8% of that of the control at the 168th h after reperfusion. ④In ischemia group, the NO content in the hippocampus had linear correlation with the change of the serum NSE level (r=0.9022, P<0.01). Conclusion NO plays an important role in cerebral ischemia reperfusion and is an important factor which contributing to delayed neuronal death in CA1 area of the hippocampus.
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Key words： nitric oxide; cerebral ischemia reperfusion; brain injury
全脑缺血再灌注损伤可能与多方面的原因有关[2]。近来研究表明，短暂性脑缺血等打击后多将发生迟发性神经元坏死(Delayed neuronal death,DND)[1]，而一氧化氮(Nitric oxide,NO)在脑长时间大量产生与DND的发生密切相关[3]，但具体机制尚未阐明。本实验采用Pulsinelli全脑缺血大鼠模型[4]，通过检测脑海马中NO含量、海马CA1区PN密度及血清中神经元特异性烯醇化酶(Neuron specific enolase,NSE)含量，探讨全脑缺血再灌注后脑损害的发生与NO的关系。
1 材料与方法
1.1 动物模型的复制 雄性Wistar大鼠84只(第三军医大学动物所提供)，体重(220±20)g，随机分为对照组(12只)和缺血组(72只)，后者设立缺血后8、24、48、72、96、168 h 6个时相点，每点动物12只。按Pulsinelli等[1]的方法复制大鼠全脑缺血模型。缺血组于各时相点活杀取血及海马组织；对照组除不缺血外，其它处理同缺血组，观察72 h后活杀取血及海马组织。
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1.2 指标测定
NSE的测定：所获血标本置干燥管中，2000×g离心10 min，取血清于干净的Eppendof管中，-40°C保存。NSE的测定按NSE试剂盒(北京邦定公司提供)标准操作，以ELISA法测定。NO的测定：随机抽取各时相点达成功标准的动物6只，活杀取脑，冰浴分离海马，称重，按1∶5加入0.1mol/L冰磷酸钾缓冲液(含1mmol/LEDTA)，冰浴匀浆，超声细胞破碎仪破碎细胞(100W,15s)，4°C14 000r/min离心10min，取上清液检测NO含量。NO测定按NO试剂盒(北京邦定公司提供)标准操作。
1.3 光镜观察 达成功标准的各时相点动物(3～6只)固定，4%多聚甲醛-磷酸盐缓冲液(pH7.3)经心灌注固定，取出脑组织置同固定液中24h，石蜡包埋，于视交叉后1mm冠状切片，尼氏染色，光镜下观察海马组织病理变化，按Kirino等[5]的方法确定海马CA1区PN密度。
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1.4 统计学处理 所有结果以
±s表示，用MicrosoftExcel进行方差分析。40°C保存。NSE的测定按NSE试剂盒(北京邦定公司提供)标准操作，以ELISA法测定。NO的测定：随机抽取各时相点达成功标准的动物6只，活杀取脑，冰浴分离海马，称重，按1∶5加入0.1mol/L冰磷酸钾缓冲液(含1mmol/LEDTA)，冰浴匀浆，超声细胞破碎仪破碎细胞(100W,15s)，4°C14 000r/min离心10min，取上清液检测NO含量。NO测定按NO试剂盒(北京邦定公司提供)标准操作。1.3 光镜观察 达成功标准的各时相点动物(3～6只)固定，4%多聚甲醛-磷酸盐缓冲液(pH7.3)经心灌注固定，取出脑组织置同固定液中24h，石蜡包埋，于视交叉后1mm冠状切片，尼氏染色，光镜下观察海马组织病理变化，按Kirino等[5]的方法确定海马CA1区PN密度。
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1.4 统计学处理 所有结果以
±s表示，用MicrosoftExcel进行方差分析。2 结果
2.1 海马NO含量的变化 缺血组8、24h海马NO含量无明显升高，48～96h显著升高，以72h最明显，与对照组比较差别显著(48h和72hP<0.01,96hP<0.05)，之后逐渐降至对照组水平。
2.2 血清NSE的变化 缺血组8h后血清NSE水平即明显上升，72h达到峰值，之后逐渐下降，直到168h仍明显高于对照组水平(P<0.01)。
2.3 光镜观察结果 对照组海马CA1区PN排列有序，密度正常，无异常的形态学变化；缺血组8、24h海马CA1区PN出现轻度细胞肿胀，其密度与对照组无显著差别(P>0.05)；48h海马CA1区PN出现明显细胞肿胀和核偏移，其密度明显下降(2.1 海马NO含量的变化 缺血组8、24h海马NO含量无明显升高，48～96h显著升高，以72h最明显，与对照组比较差别显著(48h和72hP<0.01,96hP<0.05)，之后逐渐降至对照组水平。
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2.2 血清NSE的变化 缺血组8h后血清NSE水平即明显上升，72h达到峰值，之后逐渐下降，直到168h仍明显高于对照组水平(P<0.01)。
2.3 光镜观察结果 对照组海马CA1区PN排列有序，密度正常，无异常的形态学变化；缺血组8、24h海马CA1区PN出现轻度细胞肿胀，其密度与对照组无显著差别(P>0.05)；48h海马CA1区PN出现明显细胞肿胀和核偏移，其密度明显下降(P<0.01)，之后各时相点仍呈继续下降，到96 h后仅残留少数散在的正常PN并伴有反应性的胶质细胞出现，至168 h CA1区正常PN进一步减少，仅为对照组水平的22.8%，结果见表1。
表1 缺血后脑海马NO含量、血清NSE含量和海马CA1区PN密度的变化
Tab 1 Changes of the content of NO in hippocampus, plasma NSE level and hippocampal PN
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density of CA1 subfield in brain after cerebral ischemia-reperfusion Group
Control
Time after 20 min cerebral ischemia-reperfusion(h)
8
24
48
72
96
168
Content of NO(pmol/mg)
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19.5±3.7
21.2±2.5
22.5±5.4
52.2±8.1* *
54.5±5.9* *
32.3±6.9*
19.4±3.7
Plasma NSE level(ng/ml)
6.87±1.8
42.3±11.5* *
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69.3±19.7* *
138.3±32.4* *
144.1±32.2* *
87.5±15.2* *
37.8±15.2* *
PN desity of CA1 subfield(mm-1)
212±10.5
204.2±7.1
194.3±14.1
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140.3±12.5* *
125±15.3* *
62.2±12.3* *
46.5±14.1* *
*:P<0.05,* *:P<0.01 vs control
3 讨论
NSE特异定位于神经元和神经内分泌细胞胞浆内的可溶性蛋白，分子量约78 000，其功能与糖代谢有关。脑缺血后 ，缺血区神经元胞膜通透性增加及血脑屏障破坏使血清NSE增高，其增高的程度与脑损害程度呈正相关。
全脑缺血再灌注损伤后DND的发生是脑复苏难以成功的主要原因之一。近来有报道大量NO的产生与释放所引起的神经毒性是导致DND的关键[4]。本实验采用大鼠全脑缺血再灌注模型进行的研究表明：全脑缺血20 min-再灌注后8 h，反映脑损害发生的NSE明显升高，但到再灌注后48 h才出现海马NO含量的明显升高及海马CA1区PN密度显著降低，说明NO并不参与全脑缺血后的早期脑损伤；但随着再灌注后48 h海马NO含量明显升高，海马CA1区PN密度显著降低，而血清NSE水平也显著升高并达到峰值，表明NO大量而长时间产生引起的神经毒性可能在缺血再灌注损伤后海马CA1区锥体神经元DND的发生中起重要作用。本实验中全脑缺血后海马CA1区锥体细胞的典型DNA出现于再灌注后48～96 h，与以往的报道一致[2]，而海马NO含量升高也出现于48～96 h，二者发生的时相同步，说明NO的产生及释放的确与缺血后海马CA1区锥体神经元DND的发生密切相关。
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关于NO引起神经元损伤的具体机制目前尚未完全阐明。已有的研究提示NO可能从下述几个方面引起神经元损伤：①抑制线粒体呼吸链导致细胞氧化磷酸化障碍，影响ATP的合成[6]；同时过度激活多二磷酸腺苷核糖合成酶，耗竭细胞能量，最终导致细胞死亡；②扩大NMDA受体介导的神经毒性[7]，同时介导非MDA受体的神经毒性[8]；③作用于转铁核糖核酸还原酶，使ADP核糖化，抑制DNA合成，引起基因毒性[4]；④通过自由基链式反应导致巯基蛋白和脂质过氧化，影响细胞内多种酶和生物膜的功能，使细胞最终死亡。
作者简介：尹昌林(1970-)，男，四川省彭州市人，硕士，医师，助教，主要从事心肺脑复苏方面的研究。电话：(023)65318301-73042
参考文献：
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收稿日期：1999-03-28；修回日期：1999-10-15, http://www.100md.com