CD44在肝癌与肝硬化组织中的表达
作者：吴波 孙桂勤 赵欣
单位：吴波 孙桂勤(210002 南京军区南京总医院病理科)；赵欣(南京大学医学院)
关键词：CD44；原发性肝细胞肝癌；肝硬化
江苏医药000707 【摘要】 目的 为了探讨粘附分子CD44在肝癌、肝硬化患者组织中的表达以及其与肝癌、肝硬化的关系。方法 应用免疫组织化学检测CD44在26例肝癌、16例肝硬化以及5例正常肝组织中的表达情况。结果 CD44在正常肝中均有阳性表达，而在肝硬化组织中表达明显增强，在肝癌组织中表达差异很大，并且与肿瘤分化程度密切相关。结论 CD44分子在肝病中的表达随病情而异，对肝细胞肝癌的分化诊断及预后判断具有一定意义。
Expression of CD44 in the tissue of liver cancer and hepatocirrhosis
, http://www.100md.com
WU Bo，ZHAO Xin SUN Guiqing Department of Pathology of Jinling Hospital
【Abstract】 Objective To determine the expression of CD44 in the liver tissue.Method 26 cases of liver cancer，16 cases of hepatocirrhosis and 5 cases of normal liver tissue were studied by HE stain and immunohistochemistry.Results Positive expression was observed in normal，cirrhotic tissue，and also in liver cancer，but they were in different patterns.Conclusion CD44 expression varies with the different types of liver lesion and has specific clinical significance.
, 百拇医药
【Key words】 CD44 Primary hepatocellular carcinoma Hepatocirrhosis
CD44是一种粘附分子，能介导细胞与细胞以及细胞与基质间的粘附，近年来的研究发现它与人体肿瘤的发生、发展及转移有着密切的关系，对肿瘤病人的预后判断具有重要的意义。为了探讨CD44分子在肝癌和肝硬化组织中的表达以及与肝癌、肝硬化的关系，我们应用了免疫组织化学的方法检测了肝癌、肝硬化组织中CD44分子的表达。
材料和方法
一、材料
选择我院近年送检的原发性肝细胞肝癌26例，以及同期的肝硬化病例16例，并以5例没有肝脏疾病的尸检肝脏作正常对照。26例肝癌患者中男18例，女8例，年龄在34～69岁，平均年龄47.7岁，16例肝硬化患者均为男性，年龄37～65岁，平均年龄51.8岁，5例尸检死者年龄12～28岁。
, 百拇医药
二、实验方法
组织经10%福尔马林固定，常规乙醇脱水，石蜡包埋，4μm切片，HE染色。免疫组化染色为S-P法：切片经常规脱蜡后，水化，用0.6%过氧化氢和乙醇混合液常温下处理10分钟，将切片置于2%磷酸缓冲液(TBS)在高温高压下进行抗原修复，以后各步骤按S-P试剂盒的说明书进行操作，各步骤均用pH7.4，2%TBS液洗涤三次，每次3分钟，DAB显色，并用苏木素复染，光镜观察。同时，设立CD44免疫组化染色的阳性与空白对照。所有切片均进行CD44(H-CAM)染色，肝癌及肝硬化组各选择9例，正常肝选择3例进行CD44v6染色。鼠抗人CD44(H-CAM)，CD44v6为单克隆抗体。CD44抗体及免疫组化S-P试剂盒为福州迈新公司产品。两种CD44抗体均为即用型抗体。
, 百拇医药
结 果
在5例尸检正常的肝组织中，CD44(H-CAM)和 CD44v6均有阳性表达，表达类型也基本相同。阳性分布弥漫均匀，在肝细胞膜上出现棕黄色颗粒，细胞浆内表达很弱或不表达，阳性颗粒细。16例肝硬化患者的CD44表达均为阳性，并且阳性表达程度比正常肝脏更强，不但分布广，而且着色深，阳性颗粒大，胞浆内也出现阳性颗粒。而26例肝细胞肝癌的CD44阳性率为55%，阳性表达程度差异很大，有4例表达强阳性，一般呈阳性，11例为阴性表达。结果见表1。
在肝组织中，CD44既可以局限性表达，又可呈弥漫性表达。在本组观察中，我们发现CD44阳性细胞以小叶周边区的肝细胞更为明显，这一特征在肝硬化病例中表现特别显著，中央区CD44以细胞膜上表达为主，而周边区则细胞浆内也有强的阳性表达，在活动性肝硬化病例中，游离到间质中的肝细胞，也就是“碎屑样”坏死细胞呈强阳性。部分肝窦表面的内皮细胞也有较强的阳性表达。
, 百拇医药
表1 肝病患者CD44(H-CAM)表达情况 组别
例数
CD44表达情况
-
+
++
+++
尸检对照组
5
3
1
1
, 百拇医药
肝硬化组
16
3
8
5
肝癌组
26
11
9
2
4
注：+表示阳性，++表示中等阳性，+++表示强阳性，-表示阴性。
在肝细胞肝癌患者的组织切片中，我们可以很清楚地看到，在CD44阴性表达的肝癌病例，其周围的肝组织CD44呈阳性表达。另外，从本组实验结果也可以看出CD44的表达与癌细胞的分化程度具有密切的联系。CD44的表达情况与肝细胞肝癌的分化程度的关系见表2。表2 CD44(H-CAM)的表达情况与肝癌分化程度的关系 组别
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例数
CD44表达情况
-
+
++
+++
高分化组
12
3
5
1
3
中分化组
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6
2
2
1
1
低分化组
8
6
2
讨 论
CD44是一类细胞表面的糖蛋白，又称作人Hemes抗原或鼠PgD-1抗原，能够介导细胞与细胞以及细胞与基质之间的粘着。Tarin等人通过研究发现这一类CD44具有以下几种功能：(1)粘附与其它细胞及透明质酸等在内的细胞间质成分；(2)参与淋巴细胞的归巢；(3)参与淋巴细胞的活化及胞内的信号传递；(4)对药物的摄入和敏感性的作用，提示一些CD44分子可能参与细胞膜通透性的调节[1]。
, 百拇医药
CD44的另一类作用，即在肿瘤中的表达已逐渐引起人们的重视。在鼠胰腺癌模型中，一种CD44亚型已被证实在肿瘤的转移中起着决定性的作用。而在某些人类的肿瘤中，比如消化道肿瘤、非何杰金氏瘤、甲状腺肿瘤等肿瘤研究中，有人提出，可以把CD44表达情况当作肿瘤分期、分级、转移以及预后的指标，也可把它用作肿瘤的早期诊断和预测肿瘤细胞的生长情况，甚至能够进一步地阐明癌细胞恶变的分子机制[2，3，4]。肿瘤细胞的特点是生长的无序性，从正常肝细胞发生病变发展到肝硬化再到肝癌，可以说是经典的肝癌发生的过程；肝细胞从正常的生长状态到增生，再到肿瘤性增生，经历了细胞功能改变到细胞性质改变的过程，基因及基因产物的表达也发生了质的改变。
本研究结果显示在正常肝细胞表面CD44的表达比较强，肝硬化患者肝细胞CD44表达显著加强，而肝细胞肝癌CD44表达差异很大，部分甚至完全不表达；而且，在肝癌患者，越是低分化的癌，即恶性程度越高，CD44表达越弱。由此我们推测，机体在病理状态下，尤其在组织细胞发生恶变时，细胞间增殖信号传导增强，而细胞间粘附力下降，细胞间连接疏松，不利于增殖抑制信号的传导，有利于肿瘤细胞的分裂、增殖。由于细胞间粘附力的下降，有助于肿瘤细胞的运动，使肿瘤细胞易于从原发灶向周边邻近组织浸润以及向远处脏器转移。因此，通过CD44分子在不同肝脏病变过程中肝细胞表达的情况，一方面来判断肿瘤的分化程度及预后，另一方面通过诱导肿瘤表达CD44分子来达到抑制肿瘤转移的目的，可望为肝癌的治疗提供一种新的途径。
, http://www.100md.com
参考文献
1，Pignatelli M，Vessey CJ.Adhesion molecules：Novel molecular tools in tumor pathology.Hum Pathol，1994，25：849.
2，吴秋平，路作新.CD44基因异常表达与肿瘤.中国肿瘤生物治疗杂志，1998，5(3)：220.
3，Rudzki Z，Jothy S.CD44 and the adhesion at neoplastic cells.J Clin Pathol，1997，50：57.
4，Rudy W，Hofmann M，Albiez ZS，et al.The two major CD44 proteins expressed on a metastatic rat tumor cell line are derived from different splice variants：Each one individually suffices to confer metastatic behavior.Cancer Res，1993，53：1262.
5，Wielenga VJM，Yamaguchi A，Uano T，et al.Expression of CD44 variant proteins in human colorectal cancer is related to tumor progression.Cancer Res，1993，53：4754.
(收稿：1999-07-02 修回：2000-01-06), 百拇医药
单位：吴波 孙桂勤(210002 南京军区南京总医院病理科)；赵欣(南京大学医学院)
关键词：CD44；原发性肝细胞肝癌；肝硬化
江苏医药000707 【摘要】 目的 为了探讨粘附分子CD44在肝癌、肝硬化患者组织中的表达以及其与肝癌、肝硬化的关系。方法 应用免疫组织化学检测CD44在26例肝癌、16例肝硬化以及5例正常肝组织中的表达情况。结果 CD44在正常肝中均有阳性表达，而在肝硬化组织中表达明显增强，在肝癌组织中表达差异很大，并且与肿瘤分化程度密切相关。结论 CD44分子在肝病中的表达随病情而异，对肝细胞肝癌的分化诊断及预后判断具有一定意义。
Expression of CD44 in the tissue of liver cancer and hepatocirrhosis
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WU Bo，ZHAO Xin SUN Guiqing Department of Pathology of Jinling Hospital
【Abstract】 Objective To determine the expression of CD44 in the liver tissue.Method 26 cases of liver cancer，16 cases of hepatocirrhosis and 5 cases of normal liver tissue were studied by HE stain and immunohistochemistry.Results Positive expression was observed in normal，cirrhotic tissue，and also in liver cancer，but they were in different patterns.Conclusion CD44 expression varies with the different types of liver lesion and has specific clinical significance.
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【Key words】 CD44 Primary hepatocellular carcinoma Hepatocirrhosis
CD44是一种粘附分子，能介导细胞与细胞以及细胞与基质间的粘附，近年来的研究发现它与人体肿瘤的发生、发展及转移有着密切的关系，对肿瘤病人的预后判断具有重要的意义。为了探讨CD44分子在肝癌和肝硬化组织中的表达以及与肝癌、肝硬化的关系，我们应用了免疫组织化学的方法检测了肝癌、肝硬化组织中CD44分子的表达。
材料和方法
一、材料
选择我院近年送检的原发性肝细胞肝癌26例，以及同期的肝硬化病例16例，并以5例没有肝脏疾病的尸检肝脏作正常对照。26例肝癌患者中男18例，女8例，年龄在34～69岁，平均年龄47.7岁，16例肝硬化患者均为男性，年龄37～65岁，平均年龄51.8岁，5例尸检死者年龄12～28岁。
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二、实验方法
组织经10%福尔马林固定，常规乙醇脱水，石蜡包埋，4μm切片，HE染色。免疫组化染色为S-P法：切片经常规脱蜡后，水化，用0.6%过氧化氢和乙醇混合液常温下处理10分钟，将切片置于2%磷酸缓冲液(TBS)在高温高压下进行抗原修复，以后各步骤按S-P试剂盒的说明书进行操作，各步骤均用pH7.4，2%TBS液洗涤三次，每次3分钟，DAB显色，并用苏木素复染，光镜观察。同时，设立CD44免疫组化染色的阳性与空白对照。所有切片均进行CD44(H-CAM)染色，肝癌及肝硬化组各选择9例，正常肝选择3例进行CD44v6染色。鼠抗人CD44(H-CAM)，CD44v6为单克隆抗体。CD44抗体及免疫组化S-P试剂盒为福州迈新公司产品。两种CD44抗体均为即用型抗体。
, 百拇医药
结 果
在5例尸检正常的肝组织中，CD44(H-CAM)和 CD44v6均有阳性表达，表达类型也基本相同。阳性分布弥漫均匀，在肝细胞膜上出现棕黄色颗粒，细胞浆内表达很弱或不表达，阳性颗粒细。16例肝硬化患者的CD44表达均为阳性，并且阳性表达程度比正常肝脏更强，不但分布广，而且着色深，阳性颗粒大，胞浆内也出现阳性颗粒。而26例肝细胞肝癌的CD44阳性率为55%，阳性表达程度差异很大，有4例表达强阳性，一般呈阳性，11例为阴性表达。结果见表1。
在肝组织中，CD44既可以局限性表达，又可呈弥漫性表达。在本组观察中，我们发现CD44阳性细胞以小叶周边区的肝细胞更为明显，这一特征在肝硬化病例中表现特别显著，中央区CD44以细胞膜上表达为主，而周边区则细胞浆内也有强的阳性表达，在活动性肝硬化病例中，游离到间质中的肝细胞，也就是“碎屑样”坏死细胞呈强阳性。部分肝窦表面的内皮细胞也有较强的阳性表达。
, 百拇医药
表1 肝病患者CD44(H-CAM)表达情况 组别
例数
CD44表达情况
-
+
++
+++
尸检对照组
5
3
1
1
, 百拇医药
肝硬化组
16
3
8
5
肝癌组
26
11
9
2
4
注：+表示阳性，++表示中等阳性，+++表示强阳性，-表示阴性。
在肝细胞肝癌患者的组织切片中，我们可以很清楚地看到，在CD44阴性表达的肝癌病例，其周围的肝组织CD44呈阳性表达。另外，从本组实验结果也可以看出CD44的表达与癌细胞的分化程度具有密切的联系。CD44的表达情况与肝细胞肝癌的分化程度的关系见表2。表2 CD44(H-CAM)的表达情况与肝癌分化程度的关系 组别
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例数
CD44表达情况
-
+
++
+++
高分化组
12
3
5
1
3
中分化组
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6
2
2
1
1
低分化组
8
6
2
讨 论
CD44是一类细胞表面的糖蛋白，又称作人Hemes抗原或鼠PgD-1抗原，能够介导细胞与细胞以及细胞与基质之间的粘着。Tarin等人通过研究发现这一类CD44具有以下几种功能：(1)粘附与其它细胞及透明质酸等在内的细胞间质成分；(2)参与淋巴细胞的归巢；(3)参与淋巴细胞的活化及胞内的信号传递；(4)对药物的摄入和敏感性的作用，提示一些CD44分子可能参与细胞膜通透性的调节[1]。
, 百拇医药
CD44的另一类作用，即在肿瘤中的表达已逐渐引起人们的重视。在鼠胰腺癌模型中，一种CD44亚型已被证实在肿瘤的转移中起着决定性的作用。而在某些人类的肿瘤中，比如消化道肿瘤、非何杰金氏瘤、甲状腺肿瘤等肿瘤研究中，有人提出，可以把CD44表达情况当作肿瘤分期、分级、转移以及预后的指标，也可把它用作肿瘤的早期诊断和预测肿瘤细胞的生长情况，甚至能够进一步地阐明癌细胞恶变的分子机制[2，3，4]。肿瘤细胞的特点是生长的无序性，从正常肝细胞发生病变发展到肝硬化再到肝癌，可以说是经典的肝癌发生的过程；肝细胞从正常的生长状态到增生，再到肿瘤性增生，经历了细胞功能改变到细胞性质改变的过程，基因及基因产物的表达也发生了质的改变。
本研究结果显示在正常肝细胞表面CD44的表达比较强，肝硬化患者肝细胞CD44表达显著加强，而肝细胞肝癌CD44表达差异很大，部分甚至完全不表达；而且，在肝癌患者，越是低分化的癌，即恶性程度越高，CD44表达越弱。由此我们推测，机体在病理状态下，尤其在组织细胞发生恶变时，细胞间增殖信号传导增强，而细胞间粘附力下降，细胞间连接疏松，不利于增殖抑制信号的传导，有利于肿瘤细胞的分裂、增殖。由于细胞间粘附力的下降，有助于肿瘤细胞的运动，使肿瘤细胞易于从原发灶向周边邻近组织浸润以及向远处脏器转移。因此，通过CD44分子在不同肝脏病变过程中肝细胞表达的情况，一方面来判断肿瘤的分化程度及预后，另一方面通过诱导肿瘤表达CD44分子来达到抑制肿瘤转移的目的，可望为肝癌的治疗提供一种新的途径。
, http://www.100md.com
参考文献
1，Pignatelli M，Vessey CJ.Adhesion molecules：Novel molecular tools in tumor pathology.Hum Pathol，1994，25：849.
2，吴秋平，路作新.CD44基因异常表达与肿瘤.中国肿瘤生物治疗杂志，1998，5(3)：220.
3，Rudzki Z，Jothy S.CD44 and the adhesion at neoplastic cells.J Clin Pathol，1997，50：57.
4，Rudy W，Hofmann M，Albiez ZS，et al.The two major CD44 proteins expressed on a metastatic rat tumor cell line are derived from different splice variants：Each one individually suffices to confer metastatic behavior.Cancer Res，1993，53：1262.
5，Wielenga VJM，Yamaguchi A，Uano T，et al.Expression of CD44 variant proteins in human colorectal cancer is related to tumor progression.Cancer Res，1993，53：4754.
(收稿：1999-07-02 修回：2000-01-06), 百拇医药