兔耳草的化学成分研究
作者：封士兰 潘宣 张晓光
单位：封士兰 潘宣(兰州医学院药学系 730000)；张晓光(甘肃省医药管理局)
关键词：
中草药000708 圆穗兔耳草Lagotis ramalana Batalin是玄参科兔耳草属植物。生于海拨5 300 m高山、草地、冰河、水坡。分布于青海、甘肃及四川西北部。兔耳草为常用藏药[1]，藏名洪连。商品有4 种兔耳草，圆穗兔耳草是其中之一。洪连味苦、性寒，有清热、凉血、解毒功能，用于五脏有热、血分热毒、体虚潮热、高血压、急慢性肝炎、痔疮，有体外抑菌、抗炎和降血糖的药理作用。为探讨圆穗兔耳草的化学成分。我们对其进行了化学成分的研究。首次从中分离得到4 个化合物。经理化常数和光谱分析，鉴定为葫芦素B(cucurbitacin B, Ⅰ)、葫芦素D(cucurbitacin D， Ⅱ)、葫芦素Ⅰ(cucurbitacin Ⅰ，Ⅲ)和对-甲基苯酚(4-methylphenol, Ⅳ)
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1 仪器和材料
熔点用XT-4双目显微熔点测定仪测定。质谱(EI)：VG2AB-HS仪。核磁共振谱：Bruker AM-400 FT-NMR仪，1H NMR：400 MHz，13C NMR：100 MHz，CDCl3做溶剂，TMS为内标。园穗兔耳草采自青海那曲，药用植物室潘宣副教授鉴定。
2 提取和分离
阴干圆穗兔耳草地上部分粗粉2 090 g，用95%乙醇回流提取3 次，回收乙醇得浸膏250 g。分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。
氯仿浸膏71 g，硅胶柱层析，氯仿、氯仿-乙酸乙酯梯度洗脱，得20个组分。第八、九个组分经小柱纯化后分别得到化合物Ⅰ(17 mg)、Ⅱ(21 mg)。第七个组分再多次硅胶柱层析，石油醚-丙酮、氯仿-乙酸乙酯-丙醇洗脱，得到化合物Ⅲ(14 mg)。第二个组分反复硅胶柱层析，环己烷-异丙醇洗脱，得化合物Ⅳ(9 mg)。
, 百拇医药
3 鉴定
化合物Ⅰ：无色针状结晶，mp 179.5 ℃～182.5 ℃；EI-MS (m/z)：558(M+)，498(M-HCOCH3)，403(M-侧链)，385，369，111，96；13CNMR(DEPT)给出32 个碳信号CH3COO+7×C+8×CH+4×CH2+8×CH3+3×CO，推得分子中还有3 个羟基。不饱和度为10。从1HNMRδ6.50和7.06(各1H，d，J=15.6 Hz)，推测分子中有一反式双键，另一个双键δ5.80(1H，dd，J=3.2 Hz)。Libermann反应阳性，Molish反应和FeCl3反应都是阴性。指示化合物Ⅰ为四环三萜。根据HMQC和HMBC，将化合物Ⅰ的1HNMR和13C NMR进行了归属，见表1。它的13CNMR(表1)与文献[3]报道葫芦素B一致，化合物Ⅰ鉴定为cucurbitacin B。
, 百拇医药
表1 化合物Ⅰ～Ⅲ的13CNMR 碳号
Ⅰ
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
1HNMR
HMBC
1
2.75(2H，br.，J=18 Hz)
33.1
34.0
115.2
, 百拇医药
2
4.44(1H，dd，J=6，2.9 Hz)
C-3
71.7
71.0
144.8
3
212.0
212.4
198.9
4
48.1
49.5
, http://www.100md.com
48.0
5
140.6
140.3
138.0
6
5.80(1H，dd，J=3.2 Hz)
C-10，C-14
121.0
120.0
120.5
7
1.44(2H，br.)
, http://www.100md.com
25.3
23.6
23.8
8
1.98(1H，br.)
C-6，C-5，C-18，C-19
36.3
42.1
41.5
9
48.2
48.2
48.4
, 百拇医药
10
2.25(1H，m)
C-2，C-5，C-3，C-1
39.4
35.8
35.0
11
213.0
213.2
211.9
12
2.69(1H，d，J=14.6 Hz)
, http://www.100md.com
C-11，C-13
48.9
47.8
48.1
3.25(1H，d，J=14.6 Hz)
C-14，C-18
13
50.0
47.9
48.4
14
50.9
, http://www.100md.com 50.6
51.0
15
1.96(1H，d，J=7 Hz)
C-22，C-17
45.0
45.3
45.6
1.45(1H，d，J=7 Hz)
C-16，C-20
16
4.38(1H，t)
, 百拇医药
C-20，C-25
71.0
70.9
70.1
17
2.50(1H，d，J=7 Hz)
C-22，C-20
58.6
57.1
58.0
C-16，C-14，C-18
18
, 百拇医药
1.10(3H，s)
C-17，C-19，C-8
20.2
20.0
19.8
19
1.34(3H，s)
C-8，C-15
18.6
17.9
19.5
20
, 百拇医药 79.0
78.0
78.6
21
1.44(3H，s)
C-22，C-18，C-17
29.6
23.8
24.0
C-16，C-13
22
202.6
202.2
, http://www.100md.com
201.8
23
6.50(1H，d，J=15.6 Hz)
C-20，C-22
120.8
119.0
119.4
24
7.06(1H，d，J=15.6 Hz)
C-20
C-22，C-26，C-17
151.5
, 百拇医药
155.6
155.8
25
78.8
70.7
70.8
26
1.55(3H，s)
C-24，C-25，C-27
21.7
28.6
29.2
27
, 百拇医药
1.60(3H，s)
C-24，C-25，C-26
21.0
29.2
29.6
28
1.35(3H，s)
19.9
20.2
21.0
29
0.97(3H，s)
, 百拇医药 C-3
23.3
28.0
27.6
30
1.28(3H，s)
23.2
21.5
20.5
25OAc
170.6
2.01(3H，s)
26.5
, 百拇医药
化合物Ⅱ和Ⅲ都是无色针晶，Libermann反应都是阳性，mp分别为151.0 ℃～153.0 ℃和147.0 ℃～150.0 ℃。EI-MS (m/z)：Ⅱ：516(M+)，403(M-侧链)，385，219；Ⅲ：514(M+)，401(M-侧链)。表明Ⅲ比Ⅱ多一个双键，403和401碎片峰说明Ⅱ和Ⅲ也是四环三萜。Ⅱ是Ⅰ的去乙酰化物。Ⅱ、Ⅲ的13CNMR(表1)与文献[2]报道的葫芦素D、Ⅰ一致，化合物Ⅱ鉴定为cucurbitacin D，化合物Ⅲ鉴定为cucurbitacin Ⅰ。
化合物Ⅳ：白色针状结晶，mp 35.0 ℃～37.0 ℃；Libermann反应和Molish反应都是阴性，FeCl3反应阳性。EIMS (m/z)：108，93，90，75；1H，13C NMR数据与Sadtler Standard图谱对照，Ⅳ鉴定为对-甲基苯酚。
, http://www.100md.com
封士兰 女，副教授 ，学士，1982年毕业于兰州医学院药学系，1982年至今在兰州医学院药学系做教学科研工作 ，主要从事中草药有效成分的提取、分离、鉴定、含量测定，中药有效部位的提取工艺研究 。发表论文数篇
参考文献
1，中国医学科学院药用植物研究所.中药志.第4册.北京：人民卫生出版社，1998：532
2，Vincent V V and David Lavie. Tetrahedron, 1983,39(2):317
3，Mesbah U A, Enamal M and Ranjit R S, et al. Phytochemistry, 1994,36(2):421
(1999-05-12收稿), http://www.100md.com
单位：封士兰 潘宣(兰州医学院药学系 730000)；张晓光(甘肃省医药管理局)
关键词：
中草药000708 圆穗兔耳草Lagotis ramalana Batalin是玄参科兔耳草属植物。生于海拨5 300 m高山、草地、冰河、水坡。分布于青海、甘肃及四川西北部。兔耳草为常用藏药[1]，藏名洪连。商品有4 种兔耳草，圆穗兔耳草是其中之一。洪连味苦、性寒，有清热、凉血、解毒功能，用于五脏有热、血分热毒、体虚潮热、高血压、急慢性肝炎、痔疮，有体外抑菌、抗炎和降血糖的药理作用。为探讨圆穗兔耳草的化学成分。我们对其进行了化学成分的研究。首次从中分离得到4 个化合物。经理化常数和光谱分析，鉴定为葫芦素B(cucurbitacin B, Ⅰ)、葫芦素D(cucurbitacin D， Ⅱ)、葫芦素Ⅰ(cucurbitacin Ⅰ，Ⅲ)和对-甲基苯酚(4-methylphenol, Ⅳ)
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1 仪器和材料
熔点用XT-4双目显微熔点测定仪测定。质谱(EI)：VG2AB-HS仪。核磁共振谱：Bruker AM-400 FT-NMR仪，1H NMR：400 MHz，13C NMR：100 MHz，CDCl3做溶剂，TMS为内标。园穗兔耳草采自青海那曲，药用植物室潘宣副教授鉴定。
2 提取和分离
阴干圆穗兔耳草地上部分粗粉2 090 g，用95%乙醇回流提取3 次，回收乙醇得浸膏250 g。分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。
氯仿浸膏71 g，硅胶柱层析，氯仿、氯仿-乙酸乙酯梯度洗脱，得20个组分。第八、九个组分经小柱纯化后分别得到化合物Ⅰ(17 mg)、Ⅱ(21 mg)。第七个组分再多次硅胶柱层析，石油醚-丙酮、氯仿-乙酸乙酯-丙醇洗脱，得到化合物Ⅲ(14 mg)。第二个组分反复硅胶柱层析，环己烷-异丙醇洗脱，得化合物Ⅳ(9 mg)。
, 百拇医药
3 鉴定
化合物Ⅰ：无色针状结晶，mp 179.5 ℃～182.5 ℃；EI-MS (m/z)：558(M+)，498(M-HCOCH3)，403(M-侧链)，385，369，111，96；13CNMR(DEPT)给出32 个碳信号CH3COO+7×C+8×CH+4×CH2+8×CH3+3×CO，推得分子中还有3 个羟基。不饱和度为10。从1HNMRδ6.50和7.06(各1H，d，J=15.6 Hz)，推测分子中有一反式双键，另一个双键δ5.80(1H，dd，J=3.2 Hz)。Libermann反应阳性，Molish反应和FeCl3反应都是阴性。指示化合物Ⅰ为四环三萜。根据HMQC和HMBC，将化合物Ⅰ的1HNMR和13C NMR进行了归属，见表1。它的13CNMR(表1)与文献[3]报道葫芦素B一致，化合物Ⅰ鉴定为cucurbitacin B。
, 百拇医药
表1 化合物Ⅰ～Ⅲ的13CNMR 碳号
Ⅰ
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
1HNMR
HMBC
1
2.75(2H，br.，J=18 Hz)
33.1
34.0
115.2
, 百拇医药
2
4.44(1H，dd，J=6，2.9 Hz)
C-3
71.7
71.0
144.8
3
212.0
212.4
198.9
4
48.1
49.5
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48.0
5
140.6
140.3
138.0
6
5.80(1H，dd，J=3.2 Hz)
C-10，C-14
121.0
120.0
120.5
7
1.44(2H，br.)
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25.3
23.6
23.8
8
1.98(1H，br.)
C-6，C-5，C-18，C-19
36.3
42.1
41.5
9
48.2
48.2
48.4
, 百拇医药
10
2.25(1H，m)
C-2，C-5，C-3，C-1
39.4
35.8
35.0
11
213.0
213.2
211.9
12
2.69(1H，d，J=14.6 Hz)
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C-11，C-13
48.9
47.8
48.1
3.25(1H，d，J=14.6 Hz)
C-14，C-18
13
50.0
47.9
48.4
14
50.9
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51.0
15
1.96(1H，d，J=7 Hz)
C-22，C-17
45.0
45.3
45.6
1.45(1H，d，J=7 Hz)
C-16，C-20
16
4.38(1H，t)
, 百拇医药
C-20，C-25
71.0
70.9
70.1
17
2.50(1H，d，J=7 Hz)
C-22，C-20
58.6
57.1
58.0
C-16，C-14，C-18
18
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1.10(3H，s)
C-17，C-19，C-8
20.2
20.0
19.8
19
1.34(3H，s)
C-8，C-15
18.6
17.9
19.5
20
, 百拇医药 79.0
78.0
78.6
21
1.44(3H，s)
C-22，C-18，C-17
29.6
23.8
24.0
C-16，C-13
22
202.6
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23
6.50(1H，d，J=15.6 Hz)
C-20，C-22
120.8
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C-20
C-22，C-26，C-17
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155.6
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25
78.8
70.7
70.8
26
1.55(3H，s)
C-24，C-25，C-27
21.7
28.6
29.2
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1.60(3H，s)
C-24，C-25，C-26
21.0
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1.35(3H，s)
19.9
20.2
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29
0.97(3H，s)
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23.3
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1.28(3H，s)
23.2
21.5
20.5
25OAc
170.6
2.01(3H，s)
26.5
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化合物Ⅱ和Ⅲ都是无色针晶，Libermann反应都是阳性，mp分别为151.0 ℃～153.0 ℃和147.0 ℃～150.0 ℃。EI-MS (m/z)：Ⅱ：516(M+)，403(M-侧链)，385，219；Ⅲ：514(M+)，401(M-侧链)。表明Ⅲ比Ⅱ多一个双键，403和401碎片峰说明Ⅱ和Ⅲ也是四环三萜。Ⅱ是Ⅰ的去乙酰化物。Ⅱ、Ⅲ的13CNMR(表1)与文献[2]报道的葫芦素D、Ⅰ一致，化合物Ⅱ鉴定为cucurbitacin D，化合物Ⅲ鉴定为cucurbitacin Ⅰ。
化合物Ⅳ：白色针状结晶，mp 35.0 ℃～37.0 ℃；Libermann反应和Molish反应都是阴性，FeCl3反应阳性。EIMS (m/z)：108，93，90，75；1H，13C NMR数据与Sadtler Standard图谱对照，Ⅳ鉴定为对-甲基苯酚。
, http://www.100md.com
封士兰 女，副教授 ，学士，1982年毕业于兰州医学院药学系，1982年至今在兰州医学院药学系做教学科研工作 ，主要从事中草药有效成分的提取、分离、鉴定、含量测定，中药有效部位的提取工艺研究 。发表论文数篇
参考文献
1，中国医学科学院药用植物研究所.中药志.第4册.北京：人民卫生出版社，1998：532
2，Vincent V V and David Lavie. Tetrahedron, 1983,39(2):317
3，Mesbah U A, Enamal M and Ranjit R S, et al. Phytochemistry, 1994,36(2):421
(1999-05-12收稿), http://www.100md.com