上皮钙粘附素和树突细胞在膀胱癌中的表达及临床意义
作者：彭瑞元 邹桂华 李春 钟安 李静
单位：彭瑞元 李春 钟安(深圳市宝安区人民医院泌尿外科，广东深圳，518101)；李静 邹桂华(深圳市宝安区人民医院病理科)
关键词：膀胱肿瘤；粘附素；免疫组织化学；树突细胞
临床泌尿外科杂志000816 摘要 目的：探讨膀胱癌中树突细胞(DC)和上皮钙粘附素(E-cd)的表达及其与生物学行为的关系。方法：采用免疫组织化学LSAB法检测E-cd和DC。结果：69例膀胱癌中35例E-cd正常表达(50.7%),22例DC正常表达(31.9%),E-cd正常表达率在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级肿瘤中分别为72.2%、65.2%和25.0%,在Tis～1期和T2～4期肿瘤中分别为78.8%和25.0%。DC正常表达率在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级肿瘤中分别为77.8%、34.8%和0,在Tis～1期和T2～4期肿瘤中分别为63.6%和2.8%。在不同病理分级和临床分期的膀胱癌中，E-cd和DC的正常表达率具有显著性差异(P<0.05)。结论：E-cd和DC的正常表达率均随膀胱癌的病理分级、临床分期的上升而下降，E-cd和DC正常表达者的肿瘤复发率和死亡率均显著低于异常表达者。E-cd和DC可作为预测膀胱癌生物学行为的指标之一。
, 百拇医药
Expression of E-cadherin and dendritic cell in bladder cancer
PENG Rui-yuan ZHOU Gue-hua LI Zhung ZHON An LI Jing
(Department of Urology, Shenzhen City Baoan People′s Hospital, Shenzhen, 518101)
Abstract Purpose:To investigate the expression of E-cadherin and dendritic cell in bladder cancer and its biological significance.Methods:E-cadherin and dendritic cell were detected by immunohistochemical method in 69 specimens of transitional cell carcinoma of bladder mucosa. Results:The positive expression rate of E-cadherin(E-cd) was 50.7% in bladder cancer and that of dendritic cell(DC)was 31.9%. The positive expression rate of E-cadherin in gradeⅠ、Ⅱ and Ⅲ tumors was 72.2%、65.2% and25.0% respectively and that in stage Tis～T1 and T2～T4 tumors being 78.8% and25.0%. The dendritic cell positive expression rate in gradeⅠ、Ⅱand Ⅲ tumors was77.8%、34.8% and 0 respectively and in stage Tis～T1 and T2～T4 tumors being 63.6% and2.8%. The E-cadherin and dendritic cell positive expression rate were significantly lower in poorly differentiated and invasive bladder cancer. The recurrence and motality were lower than those of positive expression cases. Conclusions:It was concluded that decreased E-cadherin and dendritic cell expression could be used as tumor markers for bladder cancer.
, 百拇医药
Key words Bladder neoplasms Adhesian molecule Immunochemistry Dendritic cell
有研究表明，上皮钙粘附素(epithelial cadherin,E-cd)低表达和(或)缺失、树突细胞(DC)减少是膀胱癌复发和转移的重要因素〔1，2〕。我们采用免疫组织化学LSAB法检测E-cd和DC的表达,探讨E-cd和DC与膀胱癌生物学行为的关系。
1 材料与方法
1.1 研究材料
选择有随访和有完整资料的原发性膀胱癌患者的手术标本69例。所有病例术前均未经任何治疗，标本均作连续切片，每例3份，片厚5 μm。1份做HE染色核实诊断,另2份分别作E-cd、DC染色观察。按WHO标准作病理分级,按世界抗癌联盟(UICC)标准作临床分期。
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1.2 检测方法
免疫组织化学检测采用链霉素-生物素(LSAB)免疫酶标染色法,一抗鼠抗人E-cd和兔抗人S100单、多克隆抗体购自美国Zymed公司,染色时用已知E-cd和S100阳性的正常膀胱粘膜及膀胱肌层内神经作阳性对照，用PBS取代一抗作阴性对照。
1.3 结果判定标准
E-cd的表达：E-cd呈棕黄色染色,以胞膜着色为主,有的胞膜及近胞膜的胞浆均着色。切片内阳性细胞率>90%为正常表达，切片内无染色阳性细胞或切片内阳性染色率≤90%为低表达〔3〕。DC的表达：DC呈S100阳性反应,胞浆和胞核均着色，细胞表面长短不一，数目不等，呈树突状，核不规则。阳性细胞计数选择DC数最多的视野，计数10个高倍视野(×400)，求平均值，DC数≤10为低表达，>10为正常表达。
用χ2检验和U检验对结果进行统计学分析。
, 百拇医药
2 结果
2.1 E-cd和DC表达关系及染色部位
E-cd和DC正常表达者分别为50.7%和31.9%。E-cd阳性着色位于胞膜，DC阳性着色位于胞浆和胞膜。
2.2 E-cd和DC表达与膀胱癌病理分级及临床分期的关系
详见表1和表2。
表1 E-cd和DC表达与膀胱癌病理分级的关系例 病理
分级
E-cd表达
E-cd正常
表达率/%
, 百拇医药
DC表达
DC正常表
达率/%
正常
降低
正常
降低
Ⅰ
13
5
72.2
14
4
, http://www.100md.com 77.8
Ⅱ
15
8
65.2
8
15
34.8
Ⅲ
7
21
25.0
0
28
, http://www.100md.com
0
合计
35
34
50.7
22
47
31.9
由表1可知，E-cd和DC的正常表达率均随着病理分级的升高而下降，Ⅰ级与Ⅲ级、Ⅱ级与Ⅲ级、Ⅰ～Ⅱ级与Ⅲ级比较，差异均有极显著性意义(P<0.01)。Ⅰ级与Ⅱ级的E-cd正常表达率比较，差异无显著性意义(均P>0.05)。Ⅰ级与Ⅱ级的DC正常表达率比较，差异有极显著性意义(P<0.01)。
表2 E-cd和DC表达与膀胱癌临床分期的关系例 临床
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分期
E-cd表达
E-cd正常
表达率/%
DC表达
DC正常表
达率/%
正常
降低
正常
降低
Tis～T1
, 百拇医药 26
7
78.8
21
12
63.6
T2～T4
9
27
25.0
1
35
35.0
, 百拇医药
合计
35
34
50.7
22
47
31.9
2.3 E-cd和DC表达与膀胱癌复发的关系
浸润性肿瘤(T2～4)的E-cd和DC正常表达率均明显低于浅表性肿瘤(Tis～1),P值分别为<0.01和<0.05。本组69例膀胱癌中有37例复发,其中E-cd正常表达者的复发率为28.6%(10/35)，低表达者的复发率为79.4%(27/34),P<0.01;而DC正常表达者的复发率为9%(2/22),低表达者的复发率为74.5%(35/47),P<0.05。显示E-cd、DC正常表达者的复发率均明显低于低表达者。
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2.4 E-cd和DC表达与膀胱癌预后的关系
全部病例随访资料表明，E-cd正常表达者预后好，5年生存率为81%±5%,而低表达者为46%±8%,两者比较，差异有显著性意义(P<0.05)；DC正常表达者的5年生存率为89%±7%,低表达者为56%±10%,两者相比，差异有显著性意义(P<0.05)。
3 讨论
E-cd普遍存在于各类上皮细胞,是介导同型细胞连接的钙依赖性粘附分子。它在胚胎发育、形态发生、上皮极性和维持上皮完整性等方面起着重要作用〔4〕。近来研究表明，E-cd低表达或缺失使肿瘤细胞丧失接触抑制，可导致细胞无限制增殖，失去分化，细胞之间连接松散，易于从局部脱落，有较强的侵袭能力,极易扩散和转移〔5〕。
Schipper等〔6〕发现，E-cd在头颈部肿瘤的表达与肿瘤的分化、浸润、转移以及预后密切相关。Thomas等〔7〕对膀胱癌和正常膀胱的E-cd表达进行检测，发现84%膀胱癌E-cd呈低表达或缺失，而正常膀胱组织全部正常表达，从而认为E-cd的低表达或缺失与肿瘤的浸润、复发和预后密切相关。本组研究显示，E-cd的正常表达与膀胱癌的病理分级呈负相关，低分化肿瘤E-cd出现低表达或缺失，而且E-cd正常表达与膀胱癌的临床分期也呈负相关，浸润性肿瘤均出现低表达或缺失。这表明E-cd具有对肿瘤细胞间的粘附作用，在肿瘤的侵袭过程中起了重要的作用，E-cd的低表达是肿瘤侵袭的原因之一。结合随访资料分析, E-cd正常表达预后好, 5年生存率高，而表达降低者预后差，5年生存率低(P<0.05)。由此认为，E-cd低表达与膀胱癌复发、生存率也密切相关。此结果与Pierre等〔3〕报告基本一致。
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E-cd在多种人体癌组织中的表达与癌的分化、侵袭、转移有关。在低表达的标本中，大多数染色为非完全阴性，有的呈弱阳性染色，有的弱阳性染色与阴性染色相混杂，这种结果反映了肿瘤进展过程中 E-cd的不稳定表达。结合本研究结果可以认为，E-cd表达可以作为膀胱癌预后评价的指标之一。
DC在门卫细胞系统中数量较少，但分布广，是最重要的抗原递呈细胞。它既具有一定的吞噬、摄取、加工抗原的能力，又具有抗原递呈并剌激幼稚T细胞活化的功能。有人研究表明，膀胱癌中的DC与预后直接有关，能反映肿瘤免疫功能〔8〕，即DC越多，预后越好〔9〕。本研究发现膀胱癌组织内DC数量多的患者预后比少的好,尤其是在癌间质中DC数量多的患者预后更好；同时也发现高分化肿瘤的DC多，而分化差肿瘤的DC则少；浅表性肿瘤DC数量明显多于浸润性肿瘤,表明早期、浸润范围较小、分化好的膀胱癌患者机体免疫功能强，能产生足够的免疫细胞参与抗肿瘤反应；晚期、浸润范围大、分化差的膀胱癌患者机体免疫功能较差,参与抗肿瘤的免疫细胞较少。提示膀胱癌组织中DC数量的多少与肿瘤的发展、浸润密切相关,并直接影响患者的预后。因此，DC也可作为膀胱癌预后的参数之一。
, 百拇医药
参考文献
1，Inoue M,Ogawa H,Hirohashi S,et al.Expression of E-cadherin in normal,benign and madignant tissues of female genital organs.Am J Clin Pathol,1992,98:76～78
2，Furukawa T.Heterogeneity of histocytes in primary lung cancer stained with anti-s-100 protein.Jpn J Clin Oncol,1984,14:647～650
3，Pierre P B,Raing U H,Ewant S,et al.Decreaed E-cadherin immunoreactivity correlates with poor survival in patients with bladder tumors.Cancer Res,1993,53:3241～3243
, http://www.100md.com
4，Takeichi M.Cadherin cell adhesion receptor as a morphogenic regulator.Science,1991,251:1451～1454
5，Hashimoto M,Niwa O,Nitla Y,et al.Unstable expression of E-cadherin adhesion molecules in metastatic ovarian tumor cells.Jpn J Cancer Res,1989,80:459～461
6，Schipper J H,Frixen U H,Behrens J,et al.E-cadherin expression in squamous cell carcinomas of head and neck;Inverse correlation with tumor dedifferentiation and lynrph node metastasis.Cancer Res,1991,51:6328～6330
, http://www.100md.com
7，Thomas O,Walter B,Ulrich S,et al.Inverse relation of E-cadherin and autocrine motility factor receptor expression as a prognostic factor in patients with bladder carcinomas.Cancer Res,1994,54:3120～3122
8，彭瑞元,葛根,邹桂华,等.膀胱移行细胞癌内树突状细胞的分布与临床预后的关系.中华医学杂志,1991,71:579～611
9，陈德谊.作为治疗癌肿反应剂的树突细胞.国外医学外科学分册,1998,1:10～11
收稿 1999-03-22 修回 1999-10-11, 百拇医药
单位：彭瑞元 李春 钟安(深圳市宝安区人民医院泌尿外科，广东深圳，518101)；李静 邹桂华(深圳市宝安区人民医院病理科)
关键词：膀胱肿瘤；粘附素；免疫组织化学；树突细胞
临床泌尿外科杂志000816 摘要 目的：探讨膀胱癌中树突细胞(DC)和上皮钙粘附素(E-cd)的表达及其与生物学行为的关系。方法：采用免疫组织化学LSAB法检测E-cd和DC。结果：69例膀胱癌中35例E-cd正常表达(50.7%),22例DC正常表达(31.9%),E-cd正常表达率在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级肿瘤中分别为72.2%、65.2%和25.0%,在Tis～1期和T2～4期肿瘤中分别为78.8%和25.0%。DC正常表达率在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级肿瘤中分别为77.8%、34.8%和0,在Tis～1期和T2～4期肿瘤中分别为63.6%和2.8%。在不同病理分级和临床分期的膀胱癌中，E-cd和DC的正常表达率具有显著性差异(P<0.05)。结论：E-cd和DC的正常表达率均随膀胱癌的病理分级、临床分期的上升而下降，E-cd和DC正常表达者的肿瘤复发率和死亡率均显著低于异常表达者。E-cd和DC可作为预测膀胱癌生物学行为的指标之一。
, 百拇医药
Expression of E-cadherin and dendritic cell in bladder cancer
PENG Rui-yuan ZHOU Gue-hua LI Zhung ZHON An LI Jing
(Department of Urology, Shenzhen City Baoan People′s Hospital, Shenzhen, 518101)
Abstract Purpose:To investigate the expression of E-cadherin and dendritic cell in bladder cancer and its biological significance.Methods:E-cadherin and dendritic cell were detected by immunohistochemical method in 69 specimens of transitional cell carcinoma of bladder mucosa. Results:The positive expression rate of E-cadherin(E-cd) was 50.7% in bladder cancer and that of dendritic cell(DC)was 31.9%. The positive expression rate of E-cadherin in gradeⅠ、Ⅱ and Ⅲ tumors was 72.2%、65.2% and25.0% respectively and that in stage Tis～T1 and T2～T4 tumors being 78.8% and25.0%. The dendritic cell positive expression rate in gradeⅠ、Ⅱand Ⅲ tumors was77.8%、34.8% and 0 respectively and in stage Tis～T1 and T2～T4 tumors being 63.6% and2.8%. The E-cadherin and dendritic cell positive expression rate were significantly lower in poorly differentiated and invasive bladder cancer. The recurrence and motality were lower than those of positive expression cases. Conclusions:It was concluded that decreased E-cadherin and dendritic cell expression could be used as tumor markers for bladder cancer.
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Key words Bladder neoplasms Adhesian molecule Immunochemistry Dendritic cell
有研究表明，上皮钙粘附素(epithelial cadherin,E-cd)低表达和(或)缺失、树突细胞(DC)减少是膀胱癌复发和转移的重要因素〔1，2〕。我们采用免疫组织化学LSAB法检测E-cd和DC的表达,探讨E-cd和DC与膀胱癌生物学行为的关系。
1 材料与方法
1.1 研究材料
选择有随访和有完整资料的原发性膀胱癌患者的手术标本69例。所有病例术前均未经任何治疗，标本均作连续切片，每例3份，片厚5 μm。1份做HE染色核实诊断,另2份分别作E-cd、DC染色观察。按WHO标准作病理分级,按世界抗癌联盟(UICC)标准作临床分期。
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1.2 检测方法
免疫组织化学检测采用链霉素-生物素(LSAB)免疫酶标染色法,一抗鼠抗人E-cd和兔抗人S100单、多克隆抗体购自美国Zymed公司,染色时用已知E-cd和S100阳性的正常膀胱粘膜及膀胱肌层内神经作阳性对照，用PBS取代一抗作阴性对照。
1.3 结果判定标准
E-cd的表达：E-cd呈棕黄色染色,以胞膜着色为主,有的胞膜及近胞膜的胞浆均着色。切片内阳性细胞率>90%为正常表达，切片内无染色阳性细胞或切片内阳性染色率≤90%为低表达〔3〕。DC的表达：DC呈S100阳性反应,胞浆和胞核均着色，细胞表面长短不一，数目不等，呈树突状，核不规则。阳性细胞计数选择DC数最多的视野，计数10个高倍视野(×400)，求平均值，DC数≤10为低表达，>10为正常表达。
用χ2检验和U检验对结果进行统计学分析。
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2 结果
2.1 E-cd和DC表达关系及染色部位
E-cd和DC正常表达者分别为50.7%和31.9%。E-cd阳性着色位于胞膜，DC阳性着色位于胞浆和胞膜。
2.2 E-cd和DC表达与膀胱癌病理分级及临床分期的关系
详见表1和表2。
表1 E-cd和DC表达与膀胱癌病理分级的关系例 病理
分级
E-cd表达
E-cd正常
表达率/%
, 百拇医药
DC表达
DC正常表
达率/%
正常
降低
正常
降低
Ⅰ
13
5
72.2
14
4
, http://www.100md.com 77.8
Ⅱ
15
8
65.2
8
15
34.8
Ⅲ
7
21
25.0
0
28
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0
合计
35
34
50.7
22
47
31.9
由表1可知，E-cd和DC的正常表达率均随着病理分级的升高而下降，Ⅰ级与Ⅲ级、Ⅱ级与Ⅲ级、Ⅰ～Ⅱ级与Ⅲ级比较，差异均有极显著性意义(P<0.01)。Ⅰ级与Ⅱ级的E-cd正常表达率比较，差异无显著性意义(均P>0.05)。Ⅰ级与Ⅱ级的DC正常表达率比较，差异有极显著性意义(P<0.01)。
表2 E-cd和DC表达与膀胱癌临床分期的关系例 临床
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分期
E-cd表达
E-cd正常
表达率/%
DC表达
DC正常表
达率/%
正常
降低
正常
降低
Tis～T1
, 百拇医药 26
7
78.8
21
12
63.6
T2～T4
9
27
25.0
1
35
35.0
, 百拇医药
合计
35
34
50.7
22
47
31.9
2.3 E-cd和DC表达与膀胱癌复发的关系
浸润性肿瘤(T2～4)的E-cd和DC正常表达率均明显低于浅表性肿瘤(Tis～1),P值分别为<0.01和<0.05。本组69例膀胱癌中有37例复发,其中E-cd正常表达者的复发率为28.6%(10/35)，低表达者的复发率为79.4%(27/34),P<0.01;而DC正常表达者的复发率为9%(2/22),低表达者的复发率为74.5%(35/47),P<0.05。显示E-cd、DC正常表达者的复发率均明显低于低表达者。
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2.4 E-cd和DC表达与膀胱癌预后的关系
全部病例随访资料表明，E-cd正常表达者预后好，5年生存率为81%±5%,而低表达者为46%±8%,两者比较，差异有显著性意义(P<0.05)；DC正常表达者的5年生存率为89%±7%,低表达者为56%±10%,两者相比，差异有显著性意义(P<0.05)。
3 讨论
E-cd普遍存在于各类上皮细胞,是介导同型细胞连接的钙依赖性粘附分子。它在胚胎发育、形态发生、上皮极性和维持上皮完整性等方面起着重要作用〔4〕。近来研究表明，E-cd低表达或缺失使肿瘤细胞丧失接触抑制，可导致细胞无限制增殖，失去分化，细胞之间连接松散，易于从局部脱落，有较强的侵袭能力,极易扩散和转移〔5〕。
Schipper等〔6〕发现，E-cd在头颈部肿瘤的表达与肿瘤的分化、浸润、转移以及预后密切相关。Thomas等〔7〕对膀胱癌和正常膀胱的E-cd表达进行检测，发现84%膀胱癌E-cd呈低表达或缺失，而正常膀胱组织全部正常表达，从而认为E-cd的低表达或缺失与肿瘤的浸润、复发和预后密切相关。本组研究显示，E-cd的正常表达与膀胱癌的病理分级呈负相关，低分化肿瘤E-cd出现低表达或缺失，而且E-cd正常表达与膀胱癌的临床分期也呈负相关，浸润性肿瘤均出现低表达或缺失。这表明E-cd具有对肿瘤细胞间的粘附作用，在肿瘤的侵袭过程中起了重要的作用，E-cd的低表达是肿瘤侵袭的原因之一。结合随访资料分析, E-cd正常表达预后好, 5年生存率高，而表达降低者预后差，5年生存率低(P<0.05)。由此认为，E-cd低表达与膀胱癌复发、生存率也密切相关。此结果与Pierre等〔3〕报告基本一致。
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E-cd在多种人体癌组织中的表达与癌的分化、侵袭、转移有关。在低表达的标本中，大多数染色为非完全阴性，有的呈弱阳性染色，有的弱阳性染色与阴性染色相混杂，这种结果反映了肿瘤进展过程中 E-cd的不稳定表达。结合本研究结果可以认为，E-cd表达可以作为膀胱癌预后评价的指标之一。
DC在门卫细胞系统中数量较少，但分布广，是最重要的抗原递呈细胞。它既具有一定的吞噬、摄取、加工抗原的能力，又具有抗原递呈并剌激幼稚T细胞活化的功能。有人研究表明，膀胱癌中的DC与预后直接有关，能反映肿瘤免疫功能〔8〕，即DC越多，预后越好〔9〕。本研究发现膀胱癌组织内DC数量多的患者预后比少的好,尤其是在癌间质中DC数量多的患者预后更好；同时也发现高分化肿瘤的DC多，而分化差肿瘤的DC则少；浅表性肿瘤DC数量明显多于浸润性肿瘤,表明早期、浸润范围较小、分化好的膀胱癌患者机体免疫功能强，能产生足够的免疫细胞参与抗肿瘤反应；晚期、浸润范围大、分化差的膀胱癌患者机体免疫功能较差,参与抗肿瘤的免疫细胞较少。提示膀胱癌组织中DC数量的多少与肿瘤的发展、浸润密切相关,并直接影响患者的预后。因此，DC也可作为膀胱癌预后的参数之一。
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参考文献
1，Inoue M,Ogawa H,Hirohashi S,et al.Expression of E-cadherin in normal,benign and madignant tissues of female genital organs.Am J Clin Pathol,1992,98:76～78
2，Furukawa T.Heterogeneity of histocytes in primary lung cancer stained with anti-s-100 protein.Jpn J Clin Oncol,1984,14:647～650
3，Pierre P B,Raing U H,Ewant S,et al.Decreaed E-cadherin immunoreactivity correlates with poor survival in patients with bladder tumors.Cancer Res,1993,53:3241～3243
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4，Takeichi M.Cadherin cell adhesion receptor as a morphogenic regulator.Science,1991,251:1451～1454
5，Hashimoto M,Niwa O,Nitla Y,et al.Unstable expression of E-cadherin adhesion molecules in metastatic ovarian tumor cells.Jpn J Cancer Res,1989,80:459～461
6，Schipper J H,Frixen U H,Behrens J,et al.E-cadherin expression in squamous cell carcinomas of head and neck;Inverse correlation with tumor dedifferentiation and lynrph node metastasis.Cancer Res,1991,51:6328～6330
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7，Thomas O,Walter B,Ulrich S,et al.Inverse relation of E-cadherin and autocrine motility factor receptor expression as a prognostic factor in patients with bladder carcinomas.Cancer Res,1994,54:3120～3122
8，彭瑞元,葛根,邹桂华,等.膀胱移行细胞癌内树突状细胞的分布与临床预后的关系.中华医学杂志,1991,71:579～611
9，陈德谊.作为治疗癌肿反应剂的树突细胞.国外医学外科学分册,1998,1:10～11
收稿 1999-03-22 修回 1999-10-11, 百拇医药