肾细胞癌血管生成与癌细胞转移的关系
作者：丁树平 曾进 周四维
单位：丁树平(湖北省荆州市中心医院泌尿外科，湖北荆州，434100)；曾进 周四维(同济医科大学附属同济医院泌尿外科)
关键词：癌；肾细胞；血管生成因子；肿瘤转移
临床泌尿外科杂志000814 摘要 目的：探讨肾细胞癌血管生成及其与肿瘤转移的关系。方法：采用免疫组织化学LSAB法检测肾细胞癌血管内皮生长因子(VEGF)的表达和微血管数(MVC)。结果：癌组织中VEGF的表达与MVC有关；有肿瘤转移者VEGF表达和MVC的等级分布显著高于无肿瘤转移者。结论：肾细胞癌血管生成可能有赖于癌细胞合成分泌的VEGF来调节；VEGF表达和MVC均与肿瘤转移有关，有可能作为判断肾细胞癌转移潜能的预后指标。
The relationship between tumor angiogenesis and metastasis in human renal cell carcinoma
, http://www.100md.com
DING Shu-ping
(Department of Urology,Jingzhou City Centre Hospital,Hubei,434100)
ZENG Jin ZHOU Si-wei
(Department of Urology, Tongji Hosptal,Tongji Medical University)
Abstract Purpose:To explore the relationship between tumor angiogenesis and metastasis of human renal cell carcinoma (RCC).Methods:By use of immunohistochemical staining, Vascular endothelial growth factor (VEGF) protein expression and microvessel counts(MVC) of paraffin-embedded specimens from 66 RCCs were examined.Results:The expression of VEGF was related to MVC in RCCs tissue; The expression level of VEGF and MVC were significantly higher in metastasis than in no metastasis. Conclusions:Tumor angionenesis may be related to VEGF that is secreted by tumor cells in RCC; VEGF expression and MVC are highly correlated with cancer metastasis, which may serve as a prognostic parameter for discriminating tumor metastatic potential in RCC.
, 百拇医药
Key words Carcinoma，renal cell Neovascularization Neoplasm metastasis
本研究采用免疫组织化学LSAB法检测肾细胞癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达和微血管数(MVC)，以探讨癌组织血管生成及其与癌细胞转移的关系。现报告如下。
1 材料与方法
1.1 研究对象
收集同济医院1992年1月～1997年12月间行根治性肾切除术并保存完好的肾细胞癌石蜡标本66例，中位年龄50岁(14～83岁)，其中经病理学检查证实伴转移者25例，无转移者41例。标本常规制成4 μm切片，备染。取4例正常肾组织作对照。
1.2 实验方法
, 百拇医药
主要试剂鼠抗人VEGF单抗为美国Santa Gruz公司产品，鼠抗人第八因子相关抗原(F8-RAg)单抗及LSAB试剂盒均为丹麦Dako公司产品。
采用免疫组织化学LSAB法，一抗稀释度均为1∶50，用DAB作为底物显色，复染核，然后进行脱水、透明、封片。用PBS缓冲液代替一抗作为阴性空白对照。参照Maeda等〔1〕介绍的方法作结果判断。
VEGF计数与分级：以瘤胞膜棕染或胞浆含有棕色颗粒者计为阳性细胞，并依据切片内阳性细胞数的比值将其分为3级：<50%为Ⅰ级，50%～80%为Ⅱ级，≥80%为Ⅲ级。
MVC定量与分级：以与背景有明显区别的任何一个棕色内皮细胞或细胞丛作为一个微血管，分支血管结构只要不相连也作为一个微血管，并依据切片内MVC的均值将其分为3级：<80个为Ⅰ级，80～130个为Ⅱ级，≥130个为Ⅲ级。
, 百拇医药
统计学方法：肾细胞癌VEGF与MVC的关系及其两者在癌组织中的等级分布趋势分别采用t检验和Ridit分析，应用SAS6、12统计软件包处理上述数据。
2 结果
2.1 VEGF表达和MVC在肾细胞癌组织中的分布
在66例肾细胞癌组织切片中，免疫组织化学显示VEGF主要在癌细胞胞膜或胞浆及小部分基质血管内皮细胞中表达，F8-RAg大多在癌组织毛细血管、小静脉及小动脉内皮细胞中表达；VEGF表达较高的组织中，MVC也较多，且两者在肿瘤浸润前缘的表达及数量较癌中心区域明显。VEGF在正常肾组织肾小管上皮细胞中的表达均一，无明显高低之分。
2.2 VEGF表达与MVC以及两者与肿瘤转移的关系
VEGF表达与MVC之间的关系见图1。
, 百拇医药
图1 VEGF表达与MVC之间的关系
盒高为四分位间距，横线为中位数，竖线为范围，○为超常值
从图1可以看出，随着VEGF的表达增高，MVC数呈增加态势，即VEGF高表达者的MVC数明显高于VEGF低表达者(P<0.01)。
有和无肿瘤转移者VEGF和MVC的等级分布见表1。
表1 有和无肿瘤转移者VEGF和MVC等级分布例 组分
例数
等级分布
R值
(95%可信区间)
, 百拇医药 P值
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
VEGF
无转移者
有转移者
41
25
20
2
9
3
12
, 百拇医药
20
0.3144～0.4779
0.5656～0.7750
<0.05
MVC
无转移者
有转移者
41
25
21
3
15
8
, http://www.100md.com
5
14
0.3105～0.4781
0.5660～0.7806
<0.05
从表1可以看出，有肿瘤转移的VEGF和MVC等级分布趋势显著高于无肿瘤转移者(P<0.05)。
3 讨论
血管生成是实体性肿瘤生长和转移的必要条件〔2〕。肿瘤细胞(或含间质细胞)分泌好几种血管生成因子参与调节血管生成，其中以VEGF的作用最为突出〔1，3〕。许多研究表明VEGF具有双重功能：①增加微血管的通透性，促进血浆蛋白(包括纤维蛋白原)外渗并与其他蛋白(如纤维结合素)结合形成纤维网络，为成纤维细胞、内皮细胞或其他间质细胞的迁移提供一个临时骨架，并最终形成血管化的结缔组织。②作为内皮细胞特异性的有丝分裂原，通过与内皮细胞膜上两个特异性受体Flt1和Flk1/KDR的结合，直接刺激内皮细胞分裂增殖、移行，诱导新血管生成。本研究发现：癌组织中VEGF表达较高的部位，MVC数也较高，血管生成趋向活跃；随着VEGF表达增高，MVC呈增加态势，表明肾癌的VEGF表达与MVC数有关，其血管生成可能有赖于癌细胞合成分泌的VEGF调节。
, 百拇医药
Liotta等〔4〕发现丰富的血管不仅增加了肿瘤细胞进入血液循环的机会，而且还可以促使肿瘤细胞侵入邻近与毛细血管伴行的淋巴管，或通过淋巴静脉连接进入淋巴管而促进淋巴转移；此外，新生成毛细血管的片段状基底膜容易渗漏，易为肿瘤细胞穿透。因此，在VEGF诱导的高度血管化的恶性肿瘤中，其肿瘤转移的潜能被加强。本研究也进一步肯定了肾细胞癌VEGF的表达与MVC数以及两者与肿瘤转移的关系。肿瘤转移者VEGF和MVC均呈较高等级分布，而无肿瘤转移者则均呈较低等级分布，两者有显著性差异(P<0.05)，表明肾细胞癌VEGF表达和MVC数均与肿瘤转移有关，VEGF高表达且MVC较多者，肿瘤转移或潜在转移的可能性较大。这些结果与近年来国内外学者有关乳腺癌〔5〕、胃癌〔1，6〕及结肠癌〔7〕等恶性肿瘤血管生成的研究报告相近。
综上所述，肾细胞癌血管生成可能有赖于癌细胞合成分泌的VEGF调节，VEGF表达和MVC数均与肿瘤转移有关，有可能作为反映肾癌生物学行为的指标之一。但在肾细胞癌进展中，VEGF究竟是如何调节血管生成进而影响肿瘤生长转移还有待于深入研究。
, http://www.100md.com
参考文献
1，Maeda K,Chung Y S,Ogawa Y, et al.Prognostic value of vascular endothelial growth factor expression in gastric carcinoma. Cancer, 1996, 77:858～863
2，Folkman J. What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent ? J Natl Cancer Inst, 1990, 82:4～6
3，Strohmeyer D,Strohmeyer T.Angiogenesis:the principles and meaning of urological tumors. urologe A, 1996, 35: 357～362
, 百拇医药
4，Liotta L A,Steeg P S,Stetle-Stevenson W J,et al.Cancer metastasis and angiogenesis: an imblanance of positive and negative regulation. Cell, 1989, 64: 327～336
5，Toi M, Hoshina S, Takayanagi T, et al. Association of vascular endothelial growth factor expression with tumor angiogenesis and with early relapse in primary breast cancer. Jpn J Cancer Res, 1994, 85: 1045～1049
6，陆敏，江悦琴，王瑞年.血管内皮生长因子和血管生成与胃癌发展的关系.中华病理学杂志，1998，27：278～281
7，Takahashi Y, Kitadai Y, Bueana C D,et al. Expression of vascular endothelial growth factor and its receptor, KDR, correlations with vascularity, metastasis and proliferation of human colon cancer. Cancer Res, 1995, 55: 3964～3968
收稿 1999-10-07 修回 2000-01-24, http://www.100md.com
单位：丁树平(湖北省荆州市中心医院泌尿外科，湖北荆州，434100)；曾进 周四维(同济医科大学附属同济医院泌尿外科)
关键词：癌；肾细胞；血管生成因子；肿瘤转移
临床泌尿外科杂志000814 摘要 目的：探讨肾细胞癌血管生成及其与肿瘤转移的关系。方法：采用免疫组织化学LSAB法检测肾细胞癌血管内皮生长因子(VEGF)的表达和微血管数(MVC)。结果：癌组织中VEGF的表达与MVC有关；有肿瘤转移者VEGF表达和MVC的等级分布显著高于无肿瘤转移者。结论：肾细胞癌血管生成可能有赖于癌细胞合成分泌的VEGF来调节；VEGF表达和MVC均与肿瘤转移有关，有可能作为判断肾细胞癌转移潜能的预后指标。
The relationship between tumor angiogenesis and metastasis in human renal cell carcinoma
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DING Shu-ping
(Department of Urology,Jingzhou City Centre Hospital,Hubei,434100)
ZENG Jin ZHOU Si-wei
(Department of Urology, Tongji Hosptal,Tongji Medical University)
Abstract Purpose:To explore the relationship between tumor angiogenesis and metastasis of human renal cell carcinoma (RCC).Methods:By use of immunohistochemical staining, Vascular endothelial growth factor (VEGF) protein expression and microvessel counts(MVC) of paraffin-embedded specimens from 66 RCCs were examined.Results:The expression of VEGF was related to MVC in RCCs tissue; The expression level of VEGF and MVC were significantly higher in metastasis than in no metastasis. Conclusions:Tumor angionenesis may be related to VEGF that is secreted by tumor cells in RCC; VEGF expression and MVC are highly correlated with cancer metastasis, which may serve as a prognostic parameter for discriminating tumor metastatic potential in RCC.
, 百拇医药
Key words Carcinoma，renal cell Neovascularization Neoplasm metastasis
本研究采用免疫组织化学LSAB法检测肾细胞癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达和微血管数(MVC)，以探讨癌组织血管生成及其与癌细胞转移的关系。现报告如下。
1 材料与方法
1.1 研究对象
收集同济医院1992年1月～1997年12月间行根治性肾切除术并保存完好的肾细胞癌石蜡标本66例，中位年龄50岁(14～83岁)，其中经病理学检查证实伴转移者25例，无转移者41例。标本常规制成4 μm切片，备染。取4例正常肾组织作对照。
1.2 实验方法
, 百拇医药
主要试剂鼠抗人VEGF单抗为美国Santa Gruz公司产品，鼠抗人第八因子相关抗原(F8-RAg)单抗及LSAB试剂盒均为丹麦Dako公司产品。
采用免疫组织化学LSAB法，一抗稀释度均为1∶50，用DAB作为底物显色，复染核，然后进行脱水、透明、封片。用PBS缓冲液代替一抗作为阴性空白对照。参照Maeda等〔1〕介绍的方法作结果判断。
VEGF计数与分级：以瘤胞膜棕染或胞浆含有棕色颗粒者计为阳性细胞，并依据切片内阳性细胞数的比值将其分为3级：<50%为Ⅰ级，50%～80%为Ⅱ级，≥80%为Ⅲ级。
MVC定量与分级：以与背景有明显区别的任何一个棕色内皮细胞或细胞丛作为一个微血管，分支血管结构只要不相连也作为一个微血管，并依据切片内MVC的均值将其分为3级：<80个为Ⅰ级，80～130个为Ⅱ级，≥130个为Ⅲ级。
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统计学方法：肾细胞癌VEGF与MVC的关系及其两者在癌组织中的等级分布趋势分别采用t检验和Ridit分析，应用SAS6、12统计软件包处理上述数据。
2 结果
2.1 VEGF表达和MVC在肾细胞癌组织中的分布
在66例肾细胞癌组织切片中，免疫组织化学显示VEGF主要在癌细胞胞膜或胞浆及小部分基质血管内皮细胞中表达，F8-RAg大多在癌组织毛细血管、小静脉及小动脉内皮细胞中表达；VEGF表达较高的组织中，MVC也较多，且两者在肿瘤浸润前缘的表达及数量较癌中心区域明显。VEGF在正常肾组织肾小管上皮细胞中的表达均一，无明显高低之分。
2.2 VEGF表达与MVC以及两者与肿瘤转移的关系
VEGF表达与MVC之间的关系见图1。
, 百拇医药
图1 VEGF表达与MVC之间的关系
盒高为四分位间距，横线为中位数，竖线为范围，○为超常值
从图1可以看出，随着VEGF的表达增高，MVC数呈增加态势，即VEGF高表达者的MVC数明显高于VEGF低表达者(P<0.01)。
有和无肿瘤转移者VEGF和MVC的等级分布见表1。
表1 有和无肿瘤转移者VEGF和MVC等级分布例 组分
例数
等级分布
R值
(95%可信区间)
, 百拇医药 P值
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
VEGF
无转移者
有转移者
41
25
20
2
9
3
12
, 百拇医药
20
0.3144～0.4779
0.5656～0.7750
<0.05
MVC
无转移者
有转移者
41
25
21
3
15
8
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5
14
0.3105～0.4781
0.5660～0.7806
<0.05
从表1可以看出，有肿瘤转移的VEGF和MVC等级分布趋势显著高于无肿瘤转移者(P<0.05)。
3 讨论
血管生成是实体性肿瘤生长和转移的必要条件〔2〕。肿瘤细胞(或含间质细胞)分泌好几种血管生成因子参与调节血管生成，其中以VEGF的作用最为突出〔1，3〕。许多研究表明VEGF具有双重功能：①增加微血管的通透性，促进血浆蛋白(包括纤维蛋白原)外渗并与其他蛋白(如纤维结合素)结合形成纤维网络，为成纤维细胞、内皮细胞或其他间质细胞的迁移提供一个临时骨架，并最终形成血管化的结缔组织。②作为内皮细胞特异性的有丝分裂原，通过与内皮细胞膜上两个特异性受体Flt1和Flk1/KDR的结合，直接刺激内皮细胞分裂增殖、移行，诱导新血管生成。本研究发现：癌组织中VEGF表达较高的部位，MVC数也较高，血管生成趋向活跃；随着VEGF表达增高，MVC呈增加态势，表明肾癌的VEGF表达与MVC数有关，其血管生成可能有赖于癌细胞合成分泌的VEGF调节。
, 百拇医药
Liotta等〔4〕发现丰富的血管不仅增加了肿瘤细胞进入血液循环的机会，而且还可以促使肿瘤细胞侵入邻近与毛细血管伴行的淋巴管，或通过淋巴静脉连接进入淋巴管而促进淋巴转移；此外，新生成毛细血管的片段状基底膜容易渗漏，易为肿瘤细胞穿透。因此，在VEGF诱导的高度血管化的恶性肿瘤中，其肿瘤转移的潜能被加强。本研究也进一步肯定了肾细胞癌VEGF的表达与MVC数以及两者与肿瘤转移的关系。肿瘤转移者VEGF和MVC均呈较高等级分布，而无肿瘤转移者则均呈较低等级分布，两者有显著性差异(P<0.05)，表明肾细胞癌VEGF表达和MVC数均与肿瘤转移有关，VEGF高表达且MVC较多者，肿瘤转移或潜在转移的可能性较大。这些结果与近年来国内外学者有关乳腺癌〔5〕、胃癌〔1，6〕及结肠癌〔7〕等恶性肿瘤血管生成的研究报告相近。
综上所述，肾细胞癌血管生成可能有赖于癌细胞合成分泌的VEGF调节，VEGF表达和MVC数均与肿瘤转移有关，有可能作为反映肾癌生物学行为的指标之一。但在肾细胞癌进展中，VEGF究竟是如何调节血管生成进而影响肿瘤生长转移还有待于深入研究。
, http://www.100md.com
参考文献
1，Maeda K,Chung Y S,Ogawa Y, et al.Prognostic value of vascular endothelial growth factor expression in gastric carcinoma. Cancer, 1996, 77:858～863
2，Folkman J. What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent ? J Natl Cancer Inst, 1990, 82:4～6
3，Strohmeyer D,Strohmeyer T.Angiogenesis:the principles and meaning of urological tumors. urologe A, 1996, 35: 357～362
, 百拇医药
4，Liotta L A,Steeg P S,Stetle-Stevenson W J,et al.Cancer metastasis and angiogenesis: an imblanance of positive and negative regulation. Cell, 1989, 64: 327～336
5，Toi M, Hoshina S, Takayanagi T, et al. Association of vascular endothelial growth factor expression with tumor angiogenesis and with early relapse in primary breast cancer. Jpn J Cancer Res, 1994, 85: 1045～1049
6，陆敏，江悦琴，王瑞年.血管内皮生长因子和血管生成与胃癌发展的关系.中华病理学杂志，1998，27：278～281
7，Takahashi Y, Kitadai Y, Bueana C D,et al. Expression of vascular endothelial growth factor and its receptor, KDR, correlations with vascularity, metastasis and proliferation of human colon cancer. Cancer Res, 1995, 55: 3964～3968
收稿 1999-10-07 修回 2000-01-24, http://www.100md.com
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