HPLC-ELSD 法在注射用七叶皂苷钠质量控制中的应用
作者：李菁 叶文才
单位：李菁(浙江省医药管理局 杭州 310012)；叶文才(中国药科大学)
关键词：高效液相色谱；蒸发光检测；指纹图谱；七叶皂苷钠
中草药000812摘 要 HPLC 测定七叶皂苷钠，并用蒸发光检测器 (ELSD) 检测，得到 HPLC-ELSD 指纹图谱。对不同注射用七叶皂苷钠样品的比较研究表明，HPLC-ELSD 指纹图谱准确的显示了样品的质量，结果直观，可靠。
Application of HPLC-ELSD on Quality Control of Aescin for Injection
Li Jing
(Pharmaceutical Administration of Zhejiang Hangzhou 310012)
, http://www.100md.com
Ye Wencai
(China Pharmaceutical University)
Abstract A finger print of HPLC based on evaporation light-scattering detection (ELSD) for Aescin has been described. The HPLC-ELSD finger print can intuitively suggest the quality information of Aescin and may be of practical value for the quality control of samples of sodium aescinate for injection.
Key words HPLC evaporation light-scattering detection (ELSD) finger print sodium aescinate
, 百拇医药
七叶皂苷钠是从中国药典收载的娑罗子中药中提取所得的总皂苷，主要有效成分为七叶皂苷 A，B，C 和D(见图1)，根据德国 DAC 的 定义七叶皂苷 A，B 称为 β-七叶皂苷，七叶皂苷 C 和 D 称为 α-七叶皂苷。
图1 七叶皂苷钠结构示意图
目前测定七叶皂苷钠总皂苷的方法主要有三氯化铁比色法[1]和酸碱滴定法[2]，用于注射用七叶皂苷钠的含量测定。研究表明，目前上市的注射用产品除主要含有七叶皂苷钠 A，B，C 和 D 外，还含有少量的糖元、苷元、脱乙酰基的降解产物和其它杂质。由于比色法和滴定法专属性差，因而测定结果偏高，不能反映产品的真实质量。本文提出了用 HPLC 分离、蒸发光检测器 (ELSD) 检测注射用七叶皂苷钠，并将得到的色谱图定义为七叶皂苷钠 HPLC-ELSD 指纹谱图。指纹图谱简单明了，在质量标准中引入指纹图谱可以提高制剂的质量控制水平。方法可靠，实用。
, 百拇医药
1 仪器与材料
美国 Tsp 的 Specta System P1000 泵，进样器，Alltech 500 型蒸发光检测器 (ELSD) 和 Anastar色谱工作站；乙腈：色谱纯(天津四友生物医学技术有限公司)，三氟乙酸为 Acros 试剂，注射用七叶皂苷钠样品 1～7 分别来自武汉爱民 (971210)、烟台绿叶制药有限公司(990528)、德国 MADAUS(806974)、武汉生化 (990523)、南京大学(9904204)、长春天诚(990601)、无锡生化 (980513)等。
2 测定方法
2.1 色谱条件：美国SUPELCO公司的DiscoverTMC-18 柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm)，柱温为室温；流动相：乙腈 -0.05% 三氟醋酸(36∶64)，流速： 1.0 mL/min；漂移管温度：110 ℃；载气流速： 3.0 SLPM。
, 百拇医药
2.2 测定方法：将七叶皂苷钠的粉针剂样品溶于甲醇配成约 2 mg/mL 的溶液，取 20 μL 注入色谱仪，测定 ELSD 色谱图。
3 结果与讨论
3.1 七叶皂苷的 HPLC-ELSD 指纹图谱：在本文制定的色谱条件下，测得样品 1 的 HPLC-ELSD 谱图见图2样1。图中 20 min 至 40 min 之间的4个主峰为七叶皂苷钠A，B，C和D，15 min 左右的两个主峰为七叶皂苷钠E和F。10 min 以前的色谱峰为无机盐、苷元、糖元及其它杂质。直观的显示了样品中主要有效成分七叶皂苷A，B，C 和D、降解产物 E，F 和其它杂质的含量水平，不同样品具有不同形状的色谱图。研究表明，当 β 型七叶皂苷钠 A 和 B 与 α 型七叶皂苷钠 C 和 D 比例约为 7∶3 时，综合药效好，刺激性小。而具有这种组成的七叶皂苷钠，其 HPLC-ELSD 指纹谱中七叶皂苷A，B，C 和D 的色谱峰呈台阶式下降(图2-样2)。
图2 样品的HPLC-ELSD图
, 百拇医药
综上所述，一个质量好的注射用七叶皂苷钠的 HPLC-ELSD 指纹谱图首先应该是杂质峰尽可能的少且小，其次应如图 2 那样，七叶皂苷钠四个主峰形状呈台阶式下降。
3.2 不同样品的指纹图谱：样1～7是不同来源样品的 HPLC-ELSD 谱图。这些样品按比色法均为合格上市产品。比较各图可知，样品 2 和样品 3 杂质峰较小，其它产品杂质含量均很高；表1列出了归一化法测得不同样品中主要有效成分七叶皂苷钠A，B，C和D、降解产物及其它杂质的含量。由表中数据可得到上述相同的结论。
表1 不同厂家生产的粉针剂中七叶皂苷钠
A、B、C、和D的含量 生产厂
批号
A，B，C和
D含量之和
, 百拇医药
E和F
含量之和
其它杂质
含量之和
样品1
971210
41.4
3.94
54.7
样品2
806974
61.9
1.93
, http://www.100md.com
36.2
样品3
990528
86.5
1.77
11.7
样品4
990523
22.6
3.74
73.7
样品5
9904204
, http://www.100md.com
45.4
4.33
50.3
样品6
990601
36.9
6.99
56.1
样品7
980513
32.1
17.47
50.4
4 结论
七叶皂苷钠的 HPLC-ELSD 指纹谱图直观准确的反应了产品的质量，如应用于药品的质量控制，将大大提高药品的质量控制水平，方法准确可靠，具有较好的应用前景。
参考文献
1，鲁/WYB 02-97,注射七叶皂苷钠
2，德国药典 (Deutsches-Arzneimittel-Codex),Aescin,A-030,1997
(1999-12-15收稿), 百拇医药
单位：李菁(浙江省医药管理局 杭州 310012)；叶文才(中国药科大学)
关键词：高效液相色谱；蒸发光检测；指纹图谱；七叶皂苷钠
中草药000812摘 要 HPLC 测定七叶皂苷钠，并用蒸发光检测器 (ELSD) 检测，得到 HPLC-ELSD 指纹图谱。对不同注射用七叶皂苷钠样品的比较研究表明，HPLC-ELSD 指纹图谱准确的显示了样品的质量，结果直观，可靠。
Application of HPLC-ELSD on Quality Control of Aescin for Injection
Li Jing
(Pharmaceutical Administration of Zhejiang Hangzhou 310012)
, http://www.100md.com
Ye Wencai
(China Pharmaceutical University)
Abstract A finger print of HPLC based on evaporation light-scattering detection (ELSD) for Aescin has been described. The HPLC-ELSD finger print can intuitively suggest the quality information of Aescin and may be of practical value for the quality control of samples of sodium aescinate for injection.
Key words HPLC evaporation light-scattering detection (ELSD) finger print sodium aescinate
, 百拇医药
七叶皂苷钠是从中国药典收载的娑罗子中药中提取所得的总皂苷，主要有效成分为七叶皂苷 A，B，C 和D(见图1)，根据德国 DAC 的 定义七叶皂苷 A，B 称为 β-七叶皂苷，七叶皂苷 C 和 D 称为 α-七叶皂苷。
图1 七叶皂苷钠结构示意图目前测定七叶皂苷钠总皂苷的方法主要有三氯化铁比色法[1]和酸碱滴定法[2]，用于注射用七叶皂苷钠的含量测定。研究表明，目前上市的注射用产品除主要含有七叶皂苷钠 A，B，C 和 D 外，还含有少量的糖元、苷元、脱乙酰基的降解产物和其它杂质。由于比色法和滴定法专属性差，因而测定结果偏高，不能反映产品的真实质量。本文提出了用 HPLC 分离、蒸发光检测器 (ELSD) 检测注射用七叶皂苷钠，并将得到的色谱图定义为七叶皂苷钠 HPLC-ELSD 指纹谱图。指纹图谱简单明了，在质量标准中引入指纹图谱可以提高制剂的质量控制水平。方法可靠，实用。
, 百拇医药
1 仪器与材料
美国 Tsp 的 Specta System P1000 泵，进样器，Alltech 500 型蒸发光检测器 (ELSD) 和 Anastar色谱工作站；乙腈：色谱纯(天津四友生物医学技术有限公司)，三氟乙酸为 Acros 试剂，注射用七叶皂苷钠样品 1～7 分别来自武汉爱民 (971210)、烟台绿叶制药有限公司(990528)、德国 MADAUS(806974)、武汉生化 (990523)、南京大学(9904204)、长春天诚(990601)、无锡生化 (980513)等。
2 测定方法
2.1 色谱条件：美国SUPELCO公司的DiscoverTMC-18 柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm)，柱温为室温；流动相：乙腈 -0.05% 三氟醋酸(36∶64)，流速： 1.0 mL/min；漂移管温度：110 ℃；载气流速： 3.0 SLPM。
, 百拇医药
2.2 测定方法：将七叶皂苷钠的粉针剂样品溶于甲醇配成约 2 mg/mL 的溶液，取 20 μL 注入色谱仪，测定 ELSD 色谱图。
3 结果与讨论
3.1 七叶皂苷的 HPLC-ELSD 指纹图谱：在本文制定的色谱条件下，测得样品 1 的 HPLC-ELSD 谱图见图2样1。图中 20 min 至 40 min 之间的4个主峰为七叶皂苷钠A，B，C和D，15 min 左右的两个主峰为七叶皂苷钠E和F。10 min 以前的色谱峰为无机盐、苷元、糖元及其它杂质。直观的显示了样品中主要有效成分七叶皂苷A，B，C 和D、降解产物 E，F 和其它杂质的含量水平，不同样品具有不同形状的色谱图。研究表明，当 β 型七叶皂苷钠 A 和 B 与 α 型七叶皂苷钠 C 和 D 比例约为 7∶3 时，综合药效好，刺激性小。而具有这种组成的七叶皂苷钠，其 HPLC-ELSD 指纹谱中七叶皂苷A，B，C 和D 的色谱峰呈台阶式下降(图2-样2)。
图2 样品的HPLC-ELSD图, 百拇医药
综上所述，一个质量好的注射用七叶皂苷钠的 HPLC-ELSD 指纹谱图首先应该是杂质峰尽可能的少且小，其次应如图 2 那样，七叶皂苷钠四个主峰形状呈台阶式下降。
3.2 不同样品的指纹图谱：样1～7是不同来源样品的 HPLC-ELSD 谱图。这些样品按比色法均为合格上市产品。比较各图可知，样品 2 和样品 3 杂质峰较小，其它产品杂质含量均很高；表1列出了归一化法测得不同样品中主要有效成分七叶皂苷钠A，B，C和D、降解产物及其它杂质的含量。由表中数据可得到上述相同的结论。
表1 不同厂家生产的粉针剂中七叶皂苷钠
A、B、C、和D的含量 生产厂
批号
A，B，C和
D含量之和
, 百拇医药
E和F
含量之和
其它杂质
含量之和
样品1
971210
41.4
3.94
54.7
样品2
806974
61.9
1.93
, http://www.100md.com
36.2
样品3
990528
86.5
1.77
11.7
样品4
990523
22.6
3.74
73.7
样品5
9904204
, http://www.100md.com
45.4
4.33
50.3
样品6
990601
36.9
6.99
56.1
样品7
980513
32.1
17.47
50.4
4 结论
七叶皂苷钠的 HPLC-ELSD 指纹谱图直观准确的反应了产品的质量，如应用于药品的质量控制，将大大提高药品的质量控制水平，方法准确可靠，具有较好的应用前景。
参考文献
1，鲁/WYB 02-97,注射七叶皂苷钠
2，德国药典 (Deutsches-Arzneimittel-Codex),Aescin,A-030,1997
(1999-12-15收稿), 百拇医药