干扰素-α对卵巢癌细胞CA125的诱导作用探讨
作者：周国平 刘光 张川敏 刘亮
单位：周国平 刘光 张川敏(北京军区总医院 100070)；刘亮(山西运城妇幼保健站 044600)
关键词：
首都医药000846 卵巢癌(Ovarian Cancer)发病率较高，占妇科肿瘤发病之首，恶性程度较高，大多数发现于晚期，5年生存率仅为30%左右。而CA125是与上皮细胞型卵巢癌相伴随的表面抗原，检测血清中CA125对卵巢癌病人的手术治疗范围、术后复发及用药等问题均有指导意义。本文利用干扰素-α(interferon IFN)对体外人工培养的两株卵巢细胞系SKOV3及3AO表达CA125进行诱导调节，检测其浓度变化。旨在探讨IFN-α对卵巢癌可能的治疗作用。
1 材料和方法
1.1 细胞系和细胞培养：卵巢癌细胞系SKOV3及3AO(购自军事医学科学院)，培养于含10%新生小牛血清(FCS，经56℃30分钟水浴灭活)RPMI-1640(GIBCO产品)中，其中加有Hepes、青霉素及链霉素，37℃、5%CO2、饱和湿度下CO2孵箱中培养。
, 百拇医药
1.2 IFN-α诱导实验：取呈指数生长的SKOV3及3AO细胞分别用D-Hanks液洗3次，以0.25%胰酶与0.02%EDTA-Na21∶1混合液，37℃消化3～5分钟，用Hanks液轻轻洗2次；然后用不含FCS的RPMI-1640培养液制成细胞悬液(1×103个细胞/ml)，24孔培养板中每孔加入300个细胞悬液。上述条件下培养24小时后吸出培养液，每孔加入含不同浓度IFN-α(浓度分别为10、100、1000、10000U/ml)的无血清培养液400μl，每种细胞每个浓度分别加3个孔；对照孔为不含IFN-α的等量培养液，上述条件下培养48小时。
1.3 CA125含量检测：收集上清培养液；用ACS，180SE全自动化学发光免疫分析仪(美国康仁公司)检测其CA125含量。每组3个样本，取均值(X)±标准差(S)绘制“浓度-效应曲线”图。
1.4 统计学处理：用CASIO，fx-82sx计算器进入统计学状态进行计算。数据结果以均值±标准差(
±s)表示，采用双样本t检验分析处理，当P<0.05为差异显著，当P>0.05为无显著差异。
, 百拇医药
2 结果
在IFN-α诱导下，SKOV3和3AO的表达量均发生变化，即IFN-α对SKOV3，3AO细胞表达CA125蛋白抗原有显著的诱导降低作用，与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。
当IFN-α浓度在1000U/ml时CA125表达量最低(见图)，从图中可以看出CA125的表达水平与IFN-α的剂量有一定依赖有关。但当IFN-α浓度增加到10000U/ml时，对CA125蛋白抗原的诱导降低作用并没增加或增加极少。
图1 干扰素诱导CA125变化的浓度-效应曲线
3 讨论
CA125是一种高分子糖蛋白，主要在癌变的卵巢上皮细胞膜上表达，并可释放到细胞间质中，其诊断敏感度最高可达90.2%，在手术前，对有骨盆肿块者，CA125检测可使诊断的正确率达80%左右。也有报导，CA125的水平可区分良性和恶性疾病，在良性疾病中，80%的患者CA125<65U/ml，而75%的恶性疾病患者CA125浓度>65U/ml。血清CA125持续性增高与进行性恶性疾病和治疗效果不佳也有关，当血清CA125值≤35U/ml，癌灶多很小，手术可将此极小的病灶完全切除净，再辅助化疗，存活期可能延长；而血清CA125>35U/ml时，其复发癌灶常较大或较多，不易切净或是化疗已产生耐药。故手术后生存率比前者明显降低。血清CA125阳性预测值可为100%，阴性预测值为65%左右。本文实验结果显示IFN-α能下调SKOV3和3AO细胞CA125抗原蛋白的表达水平，当IFN-α浓度在1000U/ml时，对CA125蛋白抗原的诱导降低。但IFN-α对卵巢癌是否有确切的治疗作用和临床意义仍尚待商榷。
(2000-06-22收稿), http://www.100md.com
单位：周国平 刘光 张川敏(北京军区总医院 100070)；刘亮(山西运城妇幼保健站 044600)
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首都医药000846 卵巢癌(Ovarian Cancer)发病率较高，占妇科肿瘤发病之首，恶性程度较高，大多数发现于晚期，5年生存率仅为30%左右。而CA125是与上皮细胞型卵巢癌相伴随的表面抗原，检测血清中CA125对卵巢癌病人的手术治疗范围、术后复发及用药等问题均有指导意义。本文利用干扰素-α(interferon IFN)对体外人工培养的两株卵巢细胞系SKOV3及3AO表达CA125进行诱导调节，检测其浓度变化。旨在探讨IFN-α对卵巢癌可能的治疗作用。
1 材料和方法
1.1 细胞系和细胞培养：卵巢癌细胞系SKOV3及3AO(购自军事医学科学院)，培养于含10%新生小牛血清(FCS，经56℃30分钟水浴灭活)RPMI-1640(GIBCO产品)中，其中加有Hepes、青霉素及链霉素，37℃、5%CO2、饱和湿度下CO2孵箱中培养。
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1.2 IFN-α诱导实验：取呈指数生长的SKOV3及3AO细胞分别用D-Hanks液洗3次，以0.25%胰酶与0.02%EDTA-Na21∶1混合液，37℃消化3～5分钟，用Hanks液轻轻洗2次；然后用不含FCS的RPMI-1640培养液制成细胞悬液(1×103个细胞/ml)，24孔培养板中每孔加入300个细胞悬液。上述条件下培养24小时后吸出培养液，每孔加入含不同浓度IFN-α(浓度分别为10、100、1000、10000U/ml)的无血清培养液400μl，每种细胞每个浓度分别加3个孔；对照孔为不含IFN-α的等量培养液，上述条件下培养48小时。
1.3 CA125含量检测：收集上清培养液；用ACS，180SE全自动化学发光免疫分析仪(美国康仁公司)检测其CA125含量。每组3个样本，取均值(X)±标准差(S)绘制“浓度-效应曲线”图。
1.4 统计学处理：用CASIO，fx-82sx计算器进入统计学状态进行计算。数据结果以均值±标准差(
±s)表示，采用双样本t检验分析处理，当P<0.05为差异显著，当P>0.05为无显著差异。, 百拇医药
2 结果
在IFN-α诱导下，SKOV3和3AO的表达量均发生变化，即IFN-α对SKOV3，3AO细胞表达CA125蛋白抗原有显著的诱导降低作用，与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。
当IFN-α浓度在1000U/ml时CA125表达量最低(见图)，从图中可以看出CA125的表达水平与IFN-α的剂量有一定依赖有关。但当IFN-α浓度增加到10000U/ml时，对CA125蛋白抗原的诱导降低作用并没增加或增加极少。
图1 干扰素诱导CA125变化的浓度-效应曲线
3 讨论
CA125是一种高分子糖蛋白，主要在癌变的卵巢上皮细胞膜上表达，并可释放到细胞间质中，其诊断敏感度最高可达90.2%，在手术前，对有骨盆肿块者，CA125检测可使诊断的正确率达80%左右。也有报导，CA125的水平可区分良性和恶性疾病，在良性疾病中，80%的患者CA125<65U/ml，而75%的恶性疾病患者CA125浓度>65U/ml。血清CA125持续性增高与进行性恶性疾病和治疗效果不佳也有关，当血清CA125值≤35U/ml，癌灶多很小，手术可将此极小的病灶完全切除净，再辅助化疗，存活期可能延长；而血清CA125>35U/ml时，其复发癌灶常较大或较多，不易切净或是化疗已产生耐药。故手术后生存率比前者明显降低。血清CA125阳性预测值可为100%，阴性预测值为65%左右。本文实验结果显示IFN-α能下调SKOV3和3AO细胞CA125抗原蛋白的表达水平，当IFN-α浓度在1000U/ml时，对CA125蛋白抗原的诱导降低。但IFN-α对卵巢癌是否有确切的治疗作用和临床意义仍尚待商榷。
(2000-06-22收稿), http://www.100md.com