高血压患者血中活性氧、一氧化氮和氧化低密度脂蛋白的变化及其意义
的变化及其意义
付鹏 于露阳 宋桂华
摘 要 目的：探讨活性氧、一氧化氮(NO)和氧化低密度脂蛋白(OXLDL)在高血压致冠心病中的作用。方法：分别用ELISA法、铜镀镉还原法和黄嘌呤氧化法测定OXLDL、NO和超化物歧化酶(SOD)。结果：高血压患者血中OXLDL浓度明显升高，NO、SOD含量明显降低(P<0.01)。单纯高血压组和高血压合并冠心病组OXLDL浓度均明显升高，NO及SOD含量均明显降低。相关分析，OXLDL与NO呈负相关(P<0.01)。结论：高血压患者血中活性氧、OXLDL、NO的相互作用是引发和促进高血压合并冠心病的原因之一。
关键词：高血压 一氧化氮 氧化低密度脂蛋白 超氧化物歧化酶
高血压是冠心病发病的独立危险因素，但其致冠心病的机制尚不清楚，活性氧、一氧化氮(NO)、氧化低密度脂蛋白(oxidized low densiy lipoprotein, OXLDL)的独立作用及相互影响是否是导致高血压合并冠心病的原因，目前国内尚少见报道。 本文分别测定了高血压患者血中NO、OXLDL及超氧化物歧化酶(SOD)，探讨其在高血压致冠心病中的作用。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 对象
1.1.1 高血压(EH)组87例，均按照1993年WHO/ISH高血压分类标准确诊的患者,除外继发性高血压。男52例，女35例，年龄29～73岁。血压 ( 166.6±15/97±7) mmHg。 病程0.5～30年。其中Ⅰ期30例，Ⅱ期17例，Ⅲ期40例。单纯高血压(P-EH) 30 例，合并冠心病(EH-C)30例。检查前至少停用降压药、抗氧化剂及硝酸甘油类药物3 d。
1.1.2 正常对照组50例，男32例，女18例。25～65岁。均为同期我院门诊健康体检者，除外心、脑、肺、肝、肾和内分泌系统疾病。
1.2 方法
1.2.1 采用ELISA法测定OXLDL[1]，受试者空腹12 h，晨取肘静脉血2 ml，立即加入备有抗氧化剂和抗凝剂的专用试管中，摇匀，1 h内分离血浆，置-70℃冰箱中待测。
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1.2.2 采用铜镀镉还原法测定NO[2]，与上述相同取肘静脉血5 ml，静止3 h，分离上清，置-70℃冰箱中待测。
1.2.3 活性氧不能直接检测，通过检测抗氧化酶SOD反映活性氧的变化，采用黄嘌呤氧化法测定SOD。
1.3 统计学处理 数据用X±s表示，用SAS统计软件进行方差分析、q检验及相关分析。
2 结果
2.1 高血压患者血中OXLDL较对照组明显升高，SOD、NO较对照组明显降低(P<0.01)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期高血压患者血中OXLDL较对照组明显升高，但各期之间差异无显著性。Ⅰ期SOD活性明显高于对照组，Ⅱ、Ⅲ期则明显降低。3期患者血中NO较对照组明显降低，各期之间有显著性差异(P<0.05)。见表1。
2.2 P-EH和EH-C组OXLDL均明显升高，NO及SOD均明显降低。见表2。
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表1 高血压患者OXLDL、SOD、NO与对照组的比较(X±s)
Tab.1 Comparison of OXLDL,SOD,NO between EH and controls(X±s)
组别
n
OXLDL(μg/L)
n
SOD(nu/ml)
n
NO(μmol/L)
对照组
50
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348.82±126.74
50
122.65±21.87
50
53.95±11.04
高血压组
87
843.63±277.76*
87
90.44±41.84*
87
37.33±13.13*
, 百拇医药
Ⅰ期
30
787.74±238.91*
30
145.69±19.15*
30
46.11±12.88*
Ⅱ期
17
808.99±250.99*
17
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64.33±16.89*△
14
37.73±11.25*△
Ⅲ期
40
896.53±307.34*
40
62.42±8.62*△
38
31.06±9.34*△#
* 与对照组比较P<0.01；△ 与高血压Ⅰ期比较P<0.01；# 与高血压Ⅱ期比较P<0.05表2 P-EH组和EH-C组OXLDL、SOD、NO的比较(X±s)
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Tab.2 Changes of OXLDL、SOD、NO in P-EH、EH-C and controls(X±s)
组别
n
OXLDL(μg/L)
SOD(nu/ml)
NO(μmol/L)
对照组
50
348.82±126.74
122.65±21.87
53.95±11.04
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P-EH
30
787.74±238.91*
145.69±19.15*
46.12±12.88*
EH-C
30
973.53±301.11*Δ
63.91±9.93*Δ
31.06±9.34*Δ
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* 与对照组比较， P<0.01； Δ 与P-EH组比较P<0.01
2.3 OXLDL和NO做相关分析 OXLDL与NO呈负相关(r=-0.382，P<0.01)。
3 讨论
研究表明，LDL氧化修饰形成OXLDL，其被巨噬细胞大量摄取，这一过程无负反馈调节作用导致大量胆固醇蓄积，因而OXLDL被认为是动脉粥样硬化形成的始动因子之一[3]。另外，OXLDL还具有细胞毒性作用，直接损伤血管内皮细胞和平滑肌细胞；化学趋化作用，使单核巨噬细胞粘附于动脉内膜上。这些进一步促进动脉粥样硬化的发生与发展[4]。本文结果表明，高血压患者血浆中OXLDL浓度明显高于正常对照组，各期高血压患者血浆OXLDL均显著升高。进一步分析发现，单纯高血压组和高血压合并冠心病组血浆中OXLDL显著升高且后者更高，提示高血压患者体内存在着脂质过氧化修饰，OXLDL升高参与了高血压致冠心病作用。
, 百拇医药
NO在舒张血管、维持血压上有着重要作用。此外，NO还通过抑制平滑肌细胞增殖、血小板聚集、减少白细胞粘附、减轻内皮细胞损伤、减少淋巴细胞形成来预防动脉粥样硬化的发生[5]。本文显示高血压I期患者血清中NO含量明显低于对照组，Ⅱ期和Ⅲ期患者NO含量进一步下降。表明高血压患者内皮细胞受损，导致NO水平下降、血管收缩、外周阻力增大，导致血压上升，血压上升又加重内皮细胞损伤，形成恶性循环。进一步分析发现， P-EH组和EH-C组中NO均低于正常组，且后者显著低于前者，提示NO的下降导致机体抗动脉粥样硬化系统平衡的破坏及动脉粥样硬化的发生，而动脉粥样硬化的发生必将导致NO含量的进一步下降。
本文结果高血压I期患者体内大量产生内源性SOD，表明体内存在过量.O-2，.O-2与NO的反应速率至少比SOD快3倍[6]，产生的过氧亚硝酸阴离子(ONOO-)进一步分解为.OH和NO2，.OH进而引发LDL的氧化修饰。而当ⅡⅢ期高血压时，机体处于失代偿期，SOD的消耗不足以对抗.O-2的产生，体内.O-2的浓度远远超过NO，此时NO不能抑制OXLDL的产生，故3期高血压患者之间OXLDL并无显著性差异。本文P-EH组患者的OXLDL显著低于EH-C组，而NO含量前者又高于后者；NO与OXLDL相关分析发现二者呈负相关，提示OXLDL和NO都可以导致动脉粥样硬化，但二者并不是孤立的，而是与自由基密切结合在一起的。
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通过本文结果证实了高血压患者血中存在大量.O-2、OXLDL，而NO显著低于正常，.O-2的增加又能失活NO同时诱发OXLDL的大量产生，OXLDL的致动脉粥样硬化至少部分是通过NO失活而作用的。故而.O-2、OXLDL、NO均是引起动脉粥样硬化病变的效应分子，它们的失衡及相互作用，是导致高血压伴发动脉粥样硬化的重要原因。同时提示在高血压的治疗上，如果能应用抗氧化剂或补充外源性NO等手段，则将对高血压的治疗和预防合并冠心病方面起到积极作用。
付鹏(中国医科大学第三临床学院心内科，沈阳 110021)
于露阳(沈阳市沈河区防疫站)
宋桂华(第二临床学院内科)
, 百拇医药
参考文献
1，王华梁，陈思聪，张国元，等.双抗体夹心法检测血浆氧化修饰低密度脂蛋白.上海医学检验杂志，1994；9(2)：135～137
2，于露阳,皮静波,孙贵范，等.改良铜镀镉还原法测定血清中硝酸盐和亚硝酸盐.中国卫生检验杂志,1998,8(1):32～35
3，Steinberg D, Parthasarathy S, Carew TE, et al. Beyond cholesterol： modification of low-density lipoprotein that increase its atherogenieity. N Engl J Med， 1989， 320:915—922
4，Liao JK, Shin WS, Lee WY, et al. Oxidized low density lipoprotein decreases the expression of endothelial nitric oxide synthase .J Biol Chem, 1995, 270 (1) : 319—324
5，Nitric oxide in coronary artery disease: roles in atherosclerosis, myocardial reperfusion and heart failure. Dusting GJEXS, 1996, 76: 33—55
6，Hausladen A. Measuring nitric oxide and superoxide: rate constants for a conitase reactivity. Methods Enzymol, 1996, 269: 243—266, 百拇医药
付鹏 于露阳 宋桂华
摘 要 目的：探讨活性氧、一氧化氮(NO)和氧化低密度脂蛋白(OXLDL)在高血压致冠心病中的作用。方法：分别用ELISA法、铜镀镉还原法和黄嘌呤氧化法测定OXLDL、NO和超化物歧化酶(SOD)。结果：高血压患者血中OXLDL浓度明显升高，NO、SOD含量明显降低(P<0.01)。单纯高血压组和高血压合并冠心病组OXLDL浓度均明显升高，NO及SOD含量均明显降低。相关分析，OXLDL与NO呈负相关(P<0.01)。结论：高血压患者血中活性氧、OXLDL、NO的相互作用是引发和促进高血压合并冠心病的原因之一。
关键词：高血压 一氧化氮 氧化低密度脂蛋白 超氧化物歧化酶
高血压是冠心病发病的独立危险因素，但其致冠心病的机制尚不清楚，活性氧、一氧化氮(NO)、氧化低密度脂蛋白(oxidized low densiy lipoprotein, OXLDL)的独立作用及相互影响是否是导致高血压合并冠心病的原因，目前国内尚少见报道。 本文分别测定了高血压患者血中NO、OXLDL及超氧化物歧化酶(SOD)，探讨其在高血压致冠心病中的作用。
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1 材料与方法
1.1 对象
1.1.1 高血压(EH)组87例，均按照1993年WHO/ISH高血压分类标准确诊的患者,除外继发性高血压。男52例，女35例，年龄29～73岁。血压 ( 166.6±15/97±7) mmHg。 病程0.5～30年。其中Ⅰ期30例，Ⅱ期17例，Ⅲ期40例。单纯高血压(P-EH) 30 例，合并冠心病(EH-C)30例。检查前至少停用降压药、抗氧化剂及硝酸甘油类药物3 d。
1.1.2 正常对照组50例，男32例，女18例。25～65岁。均为同期我院门诊健康体检者，除外心、脑、肺、肝、肾和内分泌系统疾病。
1.2 方法
1.2.1 采用ELISA法测定OXLDL[1]，受试者空腹12 h，晨取肘静脉血2 ml，立即加入备有抗氧化剂和抗凝剂的专用试管中，摇匀，1 h内分离血浆，置-70℃冰箱中待测。
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1.2.2 采用铜镀镉还原法测定NO[2]，与上述相同取肘静脉血5 ml，静止3 h，分离上清，置-70℃冰箱中待测。
1.2.3 活性氧不能直接检测，通过检测抗氧化酶SOD反映活性氧的变化，采用黄嘌呤氧化法测定SOD。
1.3 统计学处理 数据用X±s表示，用SAS统计软件进行方差分析、q检验及相关分析。
2 结果
2.1 高血压患者血中OXLDL较对照组明显升高，SOD、NO较对照组明显降低(P<0.01)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期高血压患者血中OXLDL较对照组明显升高，但各期之间差异无显著性。Ⅰ期SOD活性明显高于对照组，Ⅱ、Ⅲ期则明显降低。3期患者血中NO较对照组明显降低，各期之间有显著性差异(P<0.05)。见表1。
2.2 P-EH和EH-C组OXLDL均明显升高，NO及SOD均明显降低。见表2。
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表1 高血压患者OXLDL、SOD、NO与对照组的比较(X±s)
Tab.1 Comparison of OXLDL,SOD,NO between EH and controls(X±s)
组别
n
OXLDL(μg/L)
n
SOD(nu/ml)
n
NO(μmol/L)
对照组
50
, 百拇医药
348.82±126.74
50
122.65±21.87
50
53.95±11.04
高血压组
87
843.63±277.76*
87
90.44±41.84*
87
37.33±13.13*
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Ⅰ期
30
787.74±238.91*
30
145.69±19.15*
30
46.11±12.88*
Ⅱ期
17
808.99±250.99*
17
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64.33±16.89*△
14
37.73±11.25*△
Ⅲ期
40
896.53±307.34*
40
62.42±8.62*△
38
31.06±9.34*△#
* 与对照组比较P<0.01；△ 与高血压Ⅰ期比较P<0.01；# 与高血压Ⅱ期比较P<0.05表2 P-EH组和EH-C组OXLDL、SOD、NO的比较(X±s)
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Tab.2 Changes of OXLDL、SOD、NO in P-EH、EH-C and controls(X±s)
组别
n
OXLDL(μg/L)
SOD(nu/ml)
NO(μmol/L)
对照组
50
348.82±126.74
122.65±21.87
53.95±11.04
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P-EH
30
787.74±238.91*
145.69±19.15*
46.12±12.88*
EH-C
30
973.53±301.11*Δ
63.91±9.93*Δ
31.06±9.34*Δ
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* 与对照组比较， P<0.01； Δ 与P-EH组比较P<0.01
2.3 OXLDL和NO做相关分析 OXLDL与NO呈负相关(r=-0.382，P<0.01)。
3 讨论
研究表明，LDL氧化修饰形成OXLDL，其被巨噬细胞大量摄取，这一过程无负反馈调节作用导致大量胆固醇蓄积，因而OXLDL被认为是动脉粥样硬化形成的始动因子之一[3]。另外，OXLDL还具有细胞毒性作用，直接损伤血管内皮细胞和平滑肌细胞；化学趋化作用，使单核巨噬细胞粘附于动脉内膜上。这些进一步促进动脉粥样硬化的发生与发展[4]。本文结果表明，高血压患者血浆中OXLDL浓度明显高于正常对照组，各期高血压患者血浆OXLDL均显著升高。进一步分析发现，单纯高血压组和高血压合并冠心病组血浆中OXLDL显著升高且后者更高，提示高血压患者体内存在着脂质过氧化修饰，OXLDL升高参与了高血压致冠心病作用。
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NO在舒张血管、维持血压上有着重要作用。此外，NO还通过抑制平滑肌细胞增殖、血小板聚集、减少白细胞粘附、减轻内皮细胞损伤、减少淋巴细胞形成来预防动脉粥样硬化的发生[5]。本文显示高血压I期患者血清中NO含量明显低于对照组，Ⅱ期和Ⅲ期患者NO含量进一步下降。表明高血压患者内皮细胞受损，导致NO水平下降、血管收缩、外周阻力增大，导致血压上升，血压上升又加重内皮细胞损伤，形成恶性循环。进一步分析发现， P-EH组和EH-C组中NO均低于正常组，且后者显著低于前者，提示NO的下降导致机体抗动脉粥样硬化系统平衡的破坏及动脉粥样硬化的发生，而动脉粥样硬化的发生必将导致NO含量的进一步下降。
本文结果高血压I期患者体内大量产生内源性SOD，表明体内存在过量.O-2，.O-2与NO的反应速率至少比SOD快3倍[6]，产生的过氧亚硝酸阴离子(ONOO-)进一步分解为.OH和NO2，.OH进而引发LDL的氧化修饰。而当ⅡⅢ期高血压时，机体处于失代偿期，SOD的消耗不足以对抗.O-2的产生，体内.O-2的浓度远远超过NO，此时NO不能抑制OXLDL的产生，故3期高血压患者之间OXLDL并无显著性差异。本文P-EH组患者的OXLDL显著低于EH-C组，而NO含量前者又高于后者；NO与OXLDL相关分析发现二者呈负相关，提示OXLDL和NO都可以导致动脉粥样硬化，但二者并不是孤立的，而是与自由基密切结合在一起的。
, http://www.100md.com
通过本文结果证实了高血压患者血中存在大量.O-2、OXLDL，而NO显著低于正常，.O-2的增加又能失活NO同时诱发OXLDL的大量产生，OXLDL的致动脉粥样硬化至少部分是通过NO失活而作用的。故而.O-2、OXLDL、NO均是引起动脉粥样硬化病变的效应分子，它们的失衡及相互作用，是导致高血压伴发动脉粥样硬化的重要原因。同时提示在高血压的治疗上，如果能应用抗氧化剂或补充外源性NO等手段，则将对高血压的治疗和预防合并冠心病方面起到积极作用。
付鹏(中国医科大学第三临床学院心内科，沈阳 110021)
于露阳(沈阳市沈河区防疫站)
宋桂华(第二临床学院内科)
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参考文献
1，王华梁，陈思聪，张国元，等.双抗体夹心法检测血浆氧化修饰低密度脂蛋白.上海医学检验杂志，1994；9(2)：135～137
2，于露阳,皮静波,孙贵范，等.改良铜镀镉还原法测定血清中硝酸盐和亚硝酸盐.中国卫生检验杂志,1998,8(1):32～35
3，Steinberg D, Parthasarathy S, Carew TE, et al. Beyond cholesterol： modification of low-density lipoprotein that increase its atherogenieity. N Engl J Med， 1989， 320:915—922
4，Liao JK, Shin WS, Lee WY, et al. Oxidized low density lipoprotein decreases the expression of endothelial nitric oxide synthase .J Biol Chem, 1995, 270 (1) : 319—324
5，Nitric oxide in coronary artery disease: roles in atherosclerosis, myocardial reperfusion and heart failure. Dusting GJEXS, 1996, 76: 33—55
6，Hausladen A. Measuring nitric oxide and superoxide: rate constants for a conitase reactivity. Methods Enzymol, 1996, 269: 243—266, 百拇医药