切断单侧喉返神经后健侧环杓后肌结构与酶组化变化的研究
冯娅妮 石强 王军 何平
摘 要 目的：动态地观察单侧喉返神经切断后,健侧环杓后肌酶组织化学和结构的改变。方法：健康杂种犬9只，其中7只的右侧喉返神经切除2 cm，近心端结扎并缝于皮下。分别取术后2、4、6、8、10、20周犬健侧环杓后肌与正常犬的环杓后肌进行对照，以观察健侧酶组织化学和结构的变化。结果：去神经后2、4、6、8、10周，健侧肌纤维直径增大，丁二酰脱氢酶(SDH)活性增加但无统计学意义；20周健侧肌纤维直径和SDH酶活性明显增加(P<0.01)。结论：去神经后20周，健侧肌纤维的直径和SDH酶活性代偿性增加。
关键词：去神经支配；喉返神经 丁二酰脱氢酶 环杓后肌
由喉返神经损伤引起环杓后肌麻痹在临床上很常见，人们对失神经支配的环杓后肌的变化进行了研究，但对失神经支配健侧环杓后肌观察尚未见报道，本研究观察健侧环杓后肌结构与酶组织化学的变化。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
健康杂种犬9只，雌雄不限，体重10～13 kg。取2只犬的4侧环杓后肌作为正常对照组。
实验组7只犬经腹腔注射硫喷妥钠(30～40 mg/kg)麻醉，常规消毒，手术暴露右侧喉返神经，于2～4气管环水平切除喉返神经2 cm，近心端结扎并缝于皮下，缝合伤口。取正常(2只犬)4侧环杓后肌及术后2，4，6，8，10周(各1只犬)、20周(2只犬)的健侧环杓后肌，作组织化学切片。
动物麻醉后，迅速取出健侧环杓后肌，在滤纸上展平后随即放入Holt's[1]中8～12 h，待下沉后用恒冷切片机(Leica 2020)制备10 μm厚的冰冻横断切片，用于光镜酶组织化学染色。
按Micheau[2]法，将冰冻切片放入SDH孵育液内(37℃)反应30 min，10%中性福尔马林固定10 min，双蒸水漂洗，甘油明胶封片，光镜下观察环杓后肌肌纤维的变化。
, 百拇医药
应用Luzex-F显微图像分析仪，对环杓后肌的横断面切片进行测量。从每组切片中随机选择三型肌纤维各30条，测量其最小径和SDH酶的含量，对所得数据进行t检验。
2 结果
健侧肌纤维直径和SDH酶活性的定量检测
实验结果表明：术后2，4，6，8，10周健侧三型肌纤维的直径和SDH酶活性与正常环杓后肌比较差别无统计学意义(P>0.05)。20周时健侧三型肌纤维的直径和SDH酶活性明显大于正常环杓后肌，见表1，表2。
表1 三型肌纤维直径测量结果(X±s，μm)
Table 1 Diameters of three types of muscle
fibers (X±s，μm)
, 百拇医药
分 组
红肌纤维
中间肌纤维
白肌纤维
实验组
2周
30.11±5.14
39.19±7.08
44.52±7.97
4周
30.56±4.24
39.92±6.73
, 百拇医药
44.62±5.45
6周
30.98±4.15
40.37±4.31
44.98±4.86
8周
31.05±4.16
40.29±3.39
45.02±4.03
10周
31.15±6.83
41.24±5.93
, http://www.100md.com
46.58±4.58
20周
33.89±3.19*
44.69±5.38*
48.06±4.43**
对照组
31.31±4.16
40.28±6.89
44.72±5.44
与对照组比较* P<0.01 **P<0.05表2 三型肌纤维SDH灰度值(X±s)
, http://www.100md.com
Table 2 SDH activity of three types of muscle
fibers (X±s，μm)
分 组
红肌纤维
中间肌纤维
白肌纤维
实验组
2周
80.02±2.12
100.89±1.61
125.18±2.83
, 百拇医药
4周
79.83±4.31
100.54±2.83
124.97±2.00
6周
78.31±6.66
99.86±6.74
124.07±9.03
8周
78.15±7.98
99.32±6.83
123.32±7.92
, http://www.100md.com
10周
77.33±4.05
98.99±5.21
123.21±4.25
20周
76.03±4.12
95.11±4.28
121.05±3.18
对照组
80.25±7.04
101.32±6.74
125.76±6.30
, http://www.100md.com
* 与对照组比较P<0.01；灰度值为酶含量的倒数值，数值越小，酶含量越高
3 讨论
SDH酶为线粒体标志酶[3]，根据SDH酶，将肌纤维分成红肌(高SDH)、中间肌(中度SDH)和白肌(低SDH)。环杓后肌的中间肌收缩慢，抗疲劳能力极强，占56%；红肌收缩慢，抗疲劳能力较强，占42%；白肌收缩快，易疲劳，占2%。环杓后肌参与呼吸运动，需连续的长期的收缩，因此其肌纤维的构成适应这一要求。
本研究发现，失神经支配20周后，健侧环杓后肌出现明显代偿，肌纤维的直径及SDH酶的活性均明显大于正常对照。
环杓后肌作为喉内肌中惟一的声门开大肌，在呼吸过程中起重要作用。有报道[4]环杓后肌并非单纯的呼吸肌，在维持杓状软骨的位置及控制其微细的运动方面也有重要作用。当一侧环杓后肌失神经支配，失去正常功能时，对侧环杓后肌为减少呼吸道阻力、维持呼吸道通畅和改善发音，代偿性地加强自身的收缩运动。表现为肌纤维直径增加，SDH酶活性增强。
, 百拇医药
冯娅妮(中国医科大学第一临床学院麻醉科，沈阳 110001)
石强(第一临床学院放射线科)
王军(沈阳武警总队医院妇产科)
何平(第二临床学院耳鼻喉科)
参考文献
1，陈啸梅.组织化学手册.北京：人民卫生出版社，第二 版,1982,22～32
2，Micheau C.Combined enzymatic reaction for nervous and muscular tissue (cholinesterase and succinic dehydrogenase). Stain Tech,1974,49:195-198
3，牟连才,杨式麟.环杓后肌解剖生理的研究进展.国外医学.耳鼻咽喉科学分册,1990,14(5):263～265
4，王振海,杨式麟.小儿与成人喉内肌肌纤维型的差异与喉功能的关系.中国医科大学学报,1994,23(4):262～263, 百拇医药
摘 要 目的：动态地观察单侧喉返神经切断后,健侧环杓后肌酶组织化学和结构的改变。方法：健康杂种犬9只，其中7只的右侧喉返神经切除2 cm，近心端结扎并缝于皮下。分别取术后2、4、6、8、10、20周犬健侧环杓后肌与正常犬的环杓后肌进行对照，以观察健侧酶组织化学和结构的变化。结果：去神经后2、4、6、8、10周，健侧肌纤维直径增大，丁二酰脱氢酶(SDH)活性增加但无统计学意义；20周健侧肌纤维直径和SDH酶活性明显增加(P<0.01)。结论：去神经后20周，健侧肌纤维的直径和SDH酶活性代偿性增加。
关键词：去神经支配；喉返神经 丁二酰脱氢酶 环杓后肌
由喉返神经损伤引起环杓后肌麻痹在临床上很常见，人们对失神经支配的环杓后肌的变化进行了研究，但对失神经支配健侧环杓后肌观察尚未见报道，本研究观察健侧环杓后肌结构与酶组织化学的变化。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
健康杂种犬9只，雌雄不限，体重10～13 kg。取2只犬的4侧环杓后肌作为正常对照组。
实验组7只犬经腹腔注射硫喷妥钠(30～40 mg/kg)麻醉，常规消毒，手术暴露右侧喉返神经，于2～4气管环水平切除喉返神经2 cm，近心端结扎并缝于皮下，缝合伤口。取正常(2只犬)4侧环杓后肌及术后2，4，6，8，10周(各1只犬)、20周(2只犬)的健侧环杓后肌，作组织化学切片。
动物麻醉后，迅速取出健侧环杓后肌，在滤纸上展平后随即放入Holt's[1]中8～12 h，待下沉后用恒冷切片机(Leica 2020)制备10 μm厚的冰冻横断切片，用于光镜酶组织化学染色。
按Micheau[2]法，将冰冻切片放入SDH孵育液内(37℃)反应30 min，10%中性福尔马林固定10 min，双蒸水漂洗，甘油明胶封片，光镜下观察环杓后肌肌纤维的变化。
, 百拇医药
应用Luzex-F显微图像分析仪，对环杓后肌的横断面切片进行测量。从每组切片中随机选择三型肌纤维各30条，测量其最小径和SDH酶的含量，对所得数据进行t检验。
2 结果
健侧肌纤维直径和SDH酶活性的定量检测
实验结果表明：术后2，4，6，8，10周健侧三型肌纤维的直径和SDH酶活性与正常环杓后肌比较差别无统计学意义(P>0.05)。20周时健侧三型肌纤维的直径和SDH酶活性明显大于正常环杓后肌，见表1，表2。
表1 三型肌纤维直径测量结果(X±s，μm)
Table 1 Diameters of three types of muscle
fibers (X±s，μm)
, 百拇医药
分 组
红肌纤维
中间肌纤维
白肌纤维
实验组
2周
30.11±5.14
39.19±7.08
44.52±7.97
4周
30.56±4.24
39.92±6.73
, 百拇医药
44.62±5.45
6周
30.98±4.15
40.37±4.31
44.98±4.86
8周
31.05±4.16
40.29±3.39
45.02±4.03
10周
31.15±6.83
41.24±5.93
, http://www.100md.com
46.58±4.58
20周
33.89±3.19*
44.69±5.38*
48.06±4.43**
对照组
31.31±4.16
40.28±6.89
44.72±5.44
与对照组比较* P<0.01 **P<0.05表2 三型肌纤维SDH灰度值(X±s)
, http://www.100md.com
Table 2 SDH activity of three types of muscle
fibers (X±s，μm)
分 组
红肌纤维
中间肌纤维
白肌纤维
实验组
2周
80.02±2.12
100.89±1.61
125.18±2.83
, 百拇医药
4周
79.83±4.31
100.54±2.83
124.97±2.00
6周
78.31±6.66
99.86±6.74
124.07±9.03
8周
78.15±7.98
99.32±6.83
123.32±7.92
, http://www.100md.com
10周
77.33±4.05
98.99±5.21
123.21±4.25
20周
76.03±4.12
95.11±4.28
121.05±3.18
对照组
80.25±7.04
101.32±6.74
125.76±6.30
, http://www.100md.com
* 与对照组比较P<0.01；灰度值为酶含量的倒数值，数值越小，酶含量越高
3 讨论
SDH酶为线粒体标志酶[3]，根据SDH酶，将肌纤维分成红肌(高SDH)、中间肌(中度SDH)和白肌(低SDH)。环杓后肌的中间肌收缩慢，抗疲劳能力极强，占56%；红肌收缩慢，抗疲劳能力较强，占42%；白肌收缩快，易疲劳，占2%。环杓后肌参与呼吸运动，需连续的长期的收缩，因此其肌纤维的构成适应这一要求。
本研究发现，失神经支配20周后，健侧环杓后肌出现明显代偿，肌纤维的直径及SDH酶的活性均明显大于正常对照。
环杓后肌作为喉内肌中惟一的声门开大肌，在呼吸过程中起重要作用。有报道[4]环杓后肌并非单纯的呼吸肌，在维持杓状软骨的位置及控制其微细的运动方面也有重要作用。当一侧环杓后肌失神经支配，失去正常功能时，对侧环杓后肌为减少呼吸道阻力、维持呼吸道通畅和改善发音，代偿性地加强自身的收缩运动。表现为肌纤维直径增加，SDH酶活性增强。
, 百拇医药
冯娅妮(中国医科大学第一临床学院麻醉科，沈阳 110001)
石强(第一临床学院放射线科)
王军(沈阳武警总队医院妇产科)
何平(第二临床学院耳鼻喉科)
参考文献
1，陈啸梅.组织化学手册.北京：人民卫生出版社，第二 版,1982,22～32
2，Micheau C.Combined enzymatic reaction for nervous and muscular tissue (cholinesterase and succinic dehydrogenase). Stain Tech,1974,49:195-198
3，牟连才,杨式麟.环杓后肌解剖生理的研究进展.国外医学.耳鼻咽喉科学分册,1990,14(5):263～265
4，王振海,杨式麟.小儿与成人喉内肌肌纤维型的差异与喉功能的关系.中国医科大学学报,1994,23(4):262～263, 百拇医药