肺癌与非恶性疾病患者的肺组织c-fos、c-jun基因表达研究
作者：苏晓丽 吴鄂生 海镇环
单位：湖南医科大学附属湘雅医院呼吸内科 长沙 410008
关键词：c-fos、c-jun；mRNA；肺癌；肺良性肿块；RT-PCR
中国现代医学杂志000920 探讨c-fos、c-jun癌基因与肺癌的关系。方法：采用PT-PCR方法检测肺 癌与非恶性肺疾病患者病变组织及正常肺组织中c-fos、c-jun mRNA表达。结果：c-fos、c- jun mRNA在两组患者病变组织中的表达均明显高于正常组织(P<0.001)，在肺癌组织中 的表达又高于肺良性肿块组织(P<0.05)，而且在小细胞肺癌和腺癌组织表达强于鳞癌 组织(P<0.001)。结果：c-fos、c-jun基因过度表达是肺癌发生中的分子事件，且与肺 癌的病理类型相关，但不能作为肺癌的一个诊断指标，其表达的强弱仅反映组织细胞增生程 度。
, 百拇医药
分类号 R734.2
c-fos、c-jun属于细胞癌基因家族，目前认为在致癌因素作用下，其 突变或过度表达与肿瘤发生有密切关系[1～3]。肺癌组织c-fos、c-jun表达研究 在国内已有报道，但其表达与肺癌病理类型的关系及在良性肿块中的表达情况，尚未见报道 。本课题采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法，检测肺癌与非恶性肺疾病患者病变组织 及正常肺组织中c-fos、c-jun mRNA表达，以了解它们在组织中表达的变化情况及意义。
1 临床资料
1998年3月～1998年8月在本院胸外科住院的肺内肿块患者，术前4周未用任何免疫调节剂及 化疗药物，亦未接受放疗。收集符合上述条件的34例患者手术切除标本，取肿块组织及远离 肿块(离肿块边缘4～8cm)的正常组织。
根据手术病理诊断结果分为两组：肺癌组：共24例，其中男18例，女6例，年龄20～71岁， 平均年龄56.5岁。吸烟者：17例，全部为男性。鳞癌14例，腺癌8例，小细胞癌2例；肺良性 肿块组：共10例，其中男9例，女1例，年龄28～58岁，平均年龄45.6岁。吸烟者：6例，全 部为男性。结核瘤5例，炎性肉芽肿3例，错构瘤2例。
, 百拇医药
2 方法
2.1 标本收集
手术切除标本，立即(离体5min内)分别无菌取肿块组织和远离肿块(离肿块边缘4～8cm)的正 常肺组织于Eppendorf管中，液氮冻存(-180℃)30～60min后，转至-70℃冰箱保存。
2.2 c-fos、c-jun mRNA测定
总RNA分离及RT-PCR按美国GIBCO公司总RNA提取试剂盒(Trizol)和Promega公司的逆转录PCR 一步法试剂盒说明操作。c-fos引物为：上游：5’-ACCAGTCCGGACCTGCAGTGG-3’，下游：5 ’-GCGGCATTTGGCTGCAGCCAT-3’ RT-PCR产物为261bp。c-jun引物为：上游：5’-CCCCTGTCC CCCATCGACATG-3’，下游：5’TTGCAACTGCGTTAGCAT-3’ RT-PCR产物为267bp。采用保守基 因 GAPDH作为内对照，RT-PCR产物为605bp，引物为：上游：5’-GCTGGCGCTGAGTACGTCGT-3’， 下游：5’-TGGGTGTCGCTGTTGAAGTC-3’。设一个加逆转录酶(AMV)的对照管和一个不加模板 的阴性对照。RT条件为：42℃，45min→94℃2min；PCR条件：94℃,45s,55℃,60s,72℃,60s ，循环35个周期，最后72℃延伸10min。取10μl PCR产物在1.5%琼脂糖凝胶自动图像分析仪 扫描，对样品进行定量分析。
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实验结果统计学分析：实验结果用均数±标准差；组内配对资料均数差别比较采用配对t 检验，两组间均数差别比较采用t检验；所选择检验水准α均为0.05。实验数据均采 用SPSS统计软件在计算机上进行统计学处理。
3 结果
3.1 肺癌患者癌组织与正常肺组织c-fos、c-jun mRNA表达情况
表1 肺癌组织与正常组织c-fos、c-jun mRNA表达半定量结果 (
±s) 组 别
n
c-fos
c-jun
肺癌组
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肺癌组织
24
1.256±0.3211)2)
1.272±0.3711)2)
正常肺组织
24
0.797±0.093)
0.799±0.093)
肺良性肿块组
肿块组织
10
, http://www.100md.com
1.013±0.0381)
1.009±0.0471)
正常肺组织
10
0.800±0.021
0.830±0.058
注：1)与同组正常肺组织比较均P<0.001
2)与良性肿块组织比较均P<0.05
3)与良性肿块组正常肺组织比较均P>0.1
3.2 肺癌患者的癌组织c-fos、c-jun mRNA表达与肺癌病理类型的关系
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表2 不同病理类型肺癌组织c-fos、c-jun mRNA表达定量分析 (±s) 组 别
n
c-fos
c-jun
鳞 癌
14
1.032±0.156
1.019±0.193
腺 癌
8
1.503±0.1571)
, 百拇医药
1.547±0.1941)
小细胞癌
2
1.839±0.0981)2)
1.940±0.1531)2)
注：1)与鳞癌比较P<0.001
2)与腺癌比较P>0.054 讨论
本课题用半定量RT-PCR方法检测24例肺癌患者的肺癌组织与正常肺组织c-fos、c-jun mRNA 表达。结果表明：肺癌患者的肺癌组织c-fos、c-jun mRNA表达高于自身正常肺组织，经统 计学处理，两者之间有显著差异，P<0.001。Valm[4，5]等研究了非小细胞 肺癌(NSCLS)细胞株及人鳞癌c-fos、c-jun mRNA表达和蛋白表达，其结果与本实验一致。提 示：c-fos、c-jun基因过度表达与肺癌恶性表型有关。
, 百拇医药
实验结果显示：肺小细胞癌和肺腺癌的组织c-fos、c-jun mRNA表达高于肺鳞癌组织，P <0.001；而三种病理类型肺癌患者的正常肺组织之间，两基因表达无明显差别，P >0. 05。表明：c-fos、c-jun在正常肺组织中表达基本恒定，而在肺癌组织中的表达高低与肿瘤 细胞类型有关。提示：不同类型的癌细胞对c-fos、c-jun表达的调控机制或强度可能有差异 ，这种表达差异对于肿瘤的发生、治疗效果及预后估计有无意义，还有待进一步研究。
实验结果显示肺癌组织和良性肿块组织的c-fos、c-jun表达都明显增加，而肺癌组织较良性 肿块组织增高更加明显，这就提示由于炎症等所致的增生性病变其c-fos、c-jun表达也会 增 高，说明c-fos、c-jun表达与细胞的生长和分化有关，而并非肿瘤的特异基因。所以不能靠 c-fos、c-jun基因表达增加诊断恶性肿瘤，c-fos、c-jun基因表达的高低只能反映组织细胞 增生的程度。
参考文献
, http://www.100md.com
1，Minna JD.The molecular biology of lung cancer pathogenesis.Chest,1993; 103:4498～4505
2，Bishop JM.Molecular themes in oncogenesis.Cell,1991;64:235～248
3，Lewin B.Oncogenic conversion by regulatory changes in transcription fa ctors.Cell,1991;64:303～312
4，Volm M,Drings P,Wodrich W,et al.Expression of oncoproteins in primary human non-small cell lung cancer and incidence of metastases.Clin Exp Metastasis ,1993;11:325～329
5，Volm M,Van Kaick G,Mattern J.Analysis of c-fos、c-jun、c-erbB1、c-erbB 2 and c-myc in primary lung carcinomas and their lymph node.Clin Exp Metastasis, 1994;12(4):329～334
2000-16-14收稿, 百拇医药
单位：湖南医科大学附属湘雅医院呼吸内科 长沙 410008
关键词：c-fos、c-jun；mRNA；肺癌；肺良性肿块；RT-PCR
中国现代医学杂志000920 探讨c-fos、c-jun癌基因与肺癌的关系。方法：采用PT-PCR方法检测肺 癌与非恶性肺疾病患者病变组织及正常肺组织中c-fos、c-jun mRNA表达。结果：c-fos、c- jun mRNA在两组患者病变组织中的表达均明显高于正常组织(P<0.001)，在肺癌组织中 的表达又高于肺良性肿块组织(P<0.05)，而且在小细胞肺癌和腺癌组织表达强于鳞癌 组织(P<0.001)。结果：c-fos、c-jun基因过度表达是肺癌发生中的分子事件，且与肺 癌的病理类型相关，但不能作为肺癌的一个诊断指标，其表达的强弱仅反映组织细胞增生程 度。
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分类号 R734.2
c-fos、c-jun属于细胞癌基因家族，目前认为在致癌因素作用下，其 突变或过度表达与肿瘤发生有密切关系[1～3]。肺癌组织c-fos、c-jun表达研究 在国内已有报道，但其表达与肺癌病理类型的关系及在良性肿块中的表达情况，尚未见报道 。本课题采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法，检测肺癌与非恶性肺疾病患者病变组织 及正常肺组织中c-fos、c-jun mRNA表达，以了解它们在组织中表达的变化情况及意义。
1 临床资料
1998年3月～1998年8月在本院胸外科住院的肺内肿块患者，术前4周未用任何免疫调节剂及 化疗药物，亦未接受放疗。收集符合上述条件的34例患者手术切除标本，取肿块组织及远离 肿块(离肿块边缘4～8cm)的正常组织。
根据手术病理诊断结果分为两组：肺癌组：共24例，其中男18例，女6例，年龄20～71岁， 平均年龄56.5岁。吸烟者：17例，全部为男性。鳞癌14例，腺癌8例，小细胞癌2例；肺良性 肿块组：共10例，其中男9例，女1例，年龄28～58岁，平均年龄45.6岁。吸烟者：6例，全 部为男性。结核瘤5例，炎性肉芽肿3例，错构瘤2例。
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2 方法
2.1 标本收集
手术切除标本，立即(离体5min内)分别无菌取肿块组织和远离肿块(离肿块边缘4～8cm)的正 常肺组织于Eppendorf管中，液氮冻存(-180℃)30～60min后，转至-70℃冰箱保存。
2.2 c-fos、c-jun mRNA测定
总RNA分离及RT-PCR按美国GIBCO公司总RNA提取试剂盒(Trizol)和Promega公司的逆转录PCR 一步法试剂盒说明操作。c-fos引物为：上游：5’-ACCAGTCCGGACCTGCAGTGG-3’，下游：5 ’-GCGGCATTTGGCTGCAGCCAT-3’ RT-PCR产物为261bp。c-jun引物为：上游：5’-CCCCTGTCC CCCATCGACATG-3’，下游：5’TTGCAACTGCGTTAGCAT-3’ RT-PCR产物为267bp。采用保守基 因 GAPDH作为内对照，RT-PCR产物为605bp，引物为：上游：5’-GCTGGCGCTGAGTACGTCGT-3’， 下游：5’-TGGGTGTCGCTGTTGAAGTC-3’。设一个加逆转录酶(AMV)的对照管和一个不加模板 的阴性对照。RT条件为：42℃，45min→94℃2min；PCR条件：94℃,45s,55℃,60s,72℃,60s ，循环35个周期，最后72℃延伸10min。取10μl PCR产物在1.5%琼脂糖凝胶自动图像分析仪 扫描，对样品进行定量分析。
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实验结果统计学分析：实验结果用均数±标准差；组内配对资料均数差别比较采用配对t 检验，两组间均数差别比较采用t检验；所选择检验水准α均为0.05。实验数据均采 用SPSS统计软件在计算机上进行统计学处理。
3 结果
3.1 肺癌患者癌组织与正常肺组织c-fos、c-jun mRNA表达情况
表1 肺癌组织与正常组织c-fos、c-jun mRNA表达半定量结果 (
±s) 组 别n
c-fos
c-jun
肺癌组
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肺癌组织
24
1.256±0.3211)2)
1.272±0.3711)2)
正常肺组织
24
0.797±0.093)
0.799±0.093)
肺良性肿块组
肿块组织
10
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1.013±0.0381)
1.009±0.0471)
正常肺组织
10
0.800±0.021
0.830±0.058
注：1)与同组正常肺组织比较均P<0.001
2)与良性肿块组织比较均P<0.05
3)与良性肿块组正常肺组织比较均P>0.1
3.2 肺癌患者的癌组织c-fos、c-jun mRNA表达与肺癌病理类型的关系
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表2 不同病理类型肺癌组织c-fos、c-jun mRNA表达定量分析 (
±s) 组 别n
c-fos
c-jun
鳞 癌
14
1.032±0.156
1.019±0.193
腺 癌
8
1.503±0.1571)
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1.547±0.1941)
小细胞癌
2
1.839±0.0981)2)
1.940±0.1531)2)
注：1)与鳞癌比较P<0.001
2)与腺癌比较P>0.054 讨论
本课题用半定量RT-PCR方法检测24例肺癌患者的肺癌组织与正常肺组织c-fos、c-jun mRNA 表达。结果表明：肺癌患者的肺癌组织c-fos、c-jun mRNA表达高于自身正常肺组织，经统 计学处理，两者之间有显著差异，P<0.001。Valm[4，5]等研究了非小细胞 肺癌(NSCLS)细胞株及人鳞癌c-fos、c-jun mRNA表达和蛋白表达，其结果与本实验一致。提 示：c-fos、c-jun基因过度表达与肺癌恶性表型有关。
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实验结果显示：肺小细胞癌和肺腺癌的组织c-fos、c-jun mRNA表达高于肺鳞癌组织，P <0.001；而三种病理类型肺癌患者的正常肺组织之间，两基因表达无明显差别，P >0. 05。表明：c-fos、c-jun在正常肺组织中表达基本恒定，而在肺癌组织中的表达高低与肿瘤 细胞类型有关。提示：不同类型的癌细胞对c-fos、c-jun表达的调控机制或强度可能有差异 ，这种表达差异对于肿瘤的发生、治疗效果及预后估计有无意义，还有待进一步研究。
实验结果显示肺癌组织和良性肿块组织的c-fos、c-jun表达都明显增加，而肺癌组织较良性 肿块组织增高更加明显，这就提示由于炎症等所致的增生性病变其c-fos、c-jun表达也会 增 高，说明c-fos、c-jun表达与细胞的生长和分化有关，而并非肿瘤的特异基因。所以不能靠 c-fos、c-jun基因表达增加诊断恶性肿瘤，c-fos、c-jun基因表达的高低只能反映组织细胞 增生的程度。
参考文献
, http://www.100md.com
1，Minna JD.The molecular biology of lung cancer pathogenesis.Chest,1993; 103:4498～4505
2，Bishop JM.Molecular themes in oncogenesis.Cell,1991;64:235～248
3，Lewin B.Oncogenic conversion by regulatory changes in transcription fa ctors.Cell,1991;64:303～312
4，Volm M,Drings P,Wodrich W,et al.Expression of oncoproteins in primary human non-small cell lung cancer and incidence of metastases.Clin Exp Metastasis ,1993;11:325～329
5，Volm M,Van Kaick G,Mattern J.Analysis of c-fos、c-jun、c-erbB1、c-erbB 2 and c-myc in primary lung carcinomas and their lymph node.Clin Exp Metastasis, 1994;12(4):329～334
2000-16-14收稿, 百拇医药