复胃汤防治大鼠胃腺粘膜肠上皮化生实验研究
作者：李顺民 周小梅 孙兆泉 刘礼意
单位：李顺民(广东省深圳市中医院 广东深圳 518033)；周小梅(广东省深圳市中医院 广东深圳 518033)；孙兆泉(湖南中医药研究所 湖南长沙 410000)；刘礼意(湖南中医药研究所 湖南长沙 410000)
关键词：胃粘膜；肠化生；大鼠；复胃汤
中国医师杂志000913[中图分类号]R446.8 [文献标识码]B
[文章编号]1008-1372(2000)09-0542-02
复胃汤为临床经验方，在对人胃癌癌前病变的防治中有较好的疗效。本实验以临床为基础，利用甲基亚硝基胍(N-Methyl-N'-Nitro-N-Nitrosoguandine,简称MNNG)为主造成大鼠胃癌前病变，观察该药方对其形成过程的作用。
, http://www.100md.com
1 实验材料
1.1 药物及试剂
1.1.1 复胃汤：由柴胡10g、丹参20g、生黄芪20g、甘松6g、半枝莲30g、莪术10g、穿山甲10g、茯苓10g、救必应30g、生甘草3g组方，先制备浸膏，临用时用蒸馏水配制，大鼠灌胃用量为临床等效剂量，相当于生药量17.5g.kg-1.d-1。
1.1.2 维酶素：由镇江生物化学制药厂生产，批号960312。
1.1.3 MNNG：为Fluke产品。
1.1.4 盐酸雷尼替丁胶囊(简称R)：杭州民生药厂生产，批号：960715。
1.2 动物 Wistar雄性大鼠，由湖南医科大学实验动物学部提供，体重100～120g。
, 百拇医药
1.3 研究方法
1.3.1 分组：随机5组，每组20只：⑴MNNG+R模型对照组；⑵MNNG+R+复胃汤；⑶MNNG+R+维酶素；⑷正常动物空白对照组；⑸正常动物+复胃汤组以观察药物的毒性。
1.3.2 造模方法：⑴MNNG的配制：每周配一次1g/L的母液，每日新鲜配制75～80μg/ml；配制用去离子双蒸水，注意避光保存，配制时带口罩、手套，防止吸入和接触。⑵雷尼替丁饲料的配制：制成含>0.06%雷尼替丁的粉状饲料，饲料按20g.只-1.d-1给药。⑶造模MNNG给药方法：给大鼠自由饮用水(含MNNG75～80μg/ml)，每周灌胃2次，灌胃量按2mg/次，总共28周[1，2]。⑷第20周造模各组处死2只，取胃部作病理，检测造模是否成功。
1.3.3 给药方法：治疗组、治疗对照组及毒性观察组在第20周起开始灌胃给药，每周灌5d，模型对照组及空白对照组灌生理盐水，连续8周。
, 百拇医药
1.3.4 检测指标：第28周处死动物，取胃部沿大弯剪开胃，10%甲醛固定，每例胃标本沿长轴剪成6块宽约2mm的条状物，石蜡包埋，切片，和常规HE及AB(pH2.5)/PAS粘液组化染色。病理诊断与分级参照全国胃癌研究协作组病理组制定的标准进行分级及统计。胃粘膜肠上皮化生腺体计量分析方法：每例胃标本的8个组织块各组1张切片，行AB(pH2.5)/PBS染色，光镜下对每张切片上的肠化腺体进行计数，此8张切片上的肠化腺体总数(幽门及胃底腺分别计数)代表该例胃标本的肠化腺体总数[2～4]。取毒性观察组及空白组检测谷丙转氨酶、总蛋白及白蛋白、总胆红素；尿素氮及肌酐等肝肾功能。
1.3.5 统计学方法：计数资料用χ2分析，计量资料用方差分析、t检验。
2 结果
2.1 肠上皮化生分级诊断标准[5] 视野肠腺化生在1/3以下的则诊断为轻度；1/3以上至2/3以下的为中度；2/3以上为重度肠腺化生。
, 百拇医药
2.2 异型增生分级标准[6] 轻度为肠管的形状不规则，排列有些紊乱和疏密不均，主要分布在粘膜浅部；中度为腺管的结构不规则，形状大小不整，呈分枝状，多达粘膜深层，其深部常见囊状扩张的腺管；重度为腺管的结构紊乱，腺管的形状及大小不整，常常达粘膜全层。
2.3 各组胃粘膜病变发生率 各组于第20周时各处死2只动物，各组均有一只动物出现肠上皮化生。MNNG+R模型对照组分别在第9,15,21,25,26周各死亡一只动物；复胃汤组分别在第10,13,27周各死亡一只动物；维酶素组分别在15,17,23,25周各死亡一只动物。满28周时余下动物数及胃病变情况见表1。肠上皮化生率模型组为76.92%，复胃汤组仅33.33%，发生明显低于模型对照组，差异有显著性意义(P<0.05)。并且未出现中重度异型增生。结果提示，复胃汤有降低或逆转MNNG所致肠上皮化生的作用。
表1各组胃粘膜病变例数及发生率 例(%) 组别
, 百拇医药
动物数(只)
肠上皮化生
中重度异型增生
胃癌
模型对照组
13
9(76.92)
2(15.38)
0
复胃汤组
15
5(33.33)*
, 百拇医药 0
0
维酶素组
14
8(57.14)
1
0
*复胃肠组与模型对照组比较χ2＝5.370，P<0.05
2.4 胃粘膜肠上皮化生腺体的计量分析 复胃汤能明显减少肠化腺体数量，与模型对照组比较，差异非常显著(幽门腺或总和腺体比较P<0.01，胃底腺比较P<0.05)；其作用明显优于对照药维酶素，差异有显著性(化生幽门腺体数或幽门腺与胃底腺化生总和比较。结果提示，复胃汤能明显减少大鼠肠化腺体数，对MNNG所致的肠上皮化生有明显的对抗作用，其作用强于维酶素，结果详见表2。表2胃粘膜肠化腺体计数 (
±s) 组别
, 百拇医药
动物数
(只)
幽门腺
胃底腺
幽门腺+胃底腺
模型对照组
13
255.1±108.2
134.8±92.3
374.7±103.5
复胃汤组
15
112.7±103.6**△△
, 百拇医药
71.5±67.3*
178.6±92.0**△
维酶素组
14
219.4±113.9
114.7±98.8
312.6±107.9
注：与模型对照组比较t＝2.0929，*P<0.05，t幽＝3.5537，t幽+底＝5.3090，**P<0.01；与维酶素组比较t＝2.6419，△P<0.05，t＝3.6053，△△P<0.01
, http://www.100md.com 2.5 复胃汤对大鼠肝肾功能的影响 分别取正常动物(灌胃给生理盐水)及复胃汤动物各15只，复胃汤组药量为人临床用量的10倍，连续给药8周。在给药过程中，观察大鼠的体重、摄食、粪便、行为活动，均未出现异常，亦未出现动物死亡。满8周后处死动物，各内脏，未见明显异常，取血检测以下生化指标：丙氨酸氨基转换酶(ALT)、尿素氮(BUN)、总蛋白(RPROT)、白蛋白(ALB)、总胆红素(G-BIL)、肌酐(CR)。结果见表3。各项指标与正常对照组比较，无明显差异(P>0.05)。综合观察表明复胃汤对动物无明显毒性，临床应用是比较安全的。
3 讨论
胃癌前病变是指容易发生癌变的胃粘膜病理组织学变化，即胃粘膜的异型增生和肠上皮化生等。胃癌是我国最常见的恶性肿瘤，约占全部肿瘤死亡的1/5。为了更好地防治胃癌，对癌前病变防治研究已是胃癌研究的重点，基础研究已有大量文献报道[1～4]，我们的肠化造模研究结果与上述报道基本相符。由于将完全由动物自由饮水改为每周灌胃2次，动物服用MNNG更加可靠、精确，故提高了28周时的胃粘膜肠化率。西医对肠化的治疗有消胆胺、维酶素、吗丁啉、弱酸及五肽胃泌素、维甲酸等，但疗效不理想。中医研究发现通过增强胃粘膜屏障，调节胃肠运动，阻止胆汁返流，抗幽门螺旋杆菌感染，免疫调节，滋阴养肝或抑酸等综合作用，可能使萎缩腺体恢复，化生消退[5]。复胃汤为临床经验方，方中君药柴胡微辛苦性平，疏肝散结；半枝莲辛微苦凉，入胃经，功能清热解毒，活血祛瘀；臣药莪术辛苦温，破血祛瘀，行气止痛；黄芪甘微温，补养气血，托毒生肌；佐使药甘松甘温，理气止痛，醒脾健胃；救必应甘苦凉，清热解毒利湿，活血散瘀止痛；丹参苦微寒，活血祛瘀，凉血消痛；穿山甲咸微寒，归肝胃经，祛瘀散结；茯苓甘淡平，健脾渗湿，甘草甘平补中，调和诸药。十味药物合参，共奏疏肝清胃，化瘀散结之功。对胃粘膜肠化和异型增生治疗取得较好的效果。本实验用本方治MNNG致肠化动物结果表明，复胃汤有阻止肠化发生或减轻肠化程度的作用，与临床应用是基本吻合的。复胃汤有较好的防治胃癌前病变的作用，大剂量试验，动物未见毒性反应，其作用优于西药维酶素，因此结合临床，进一步作机理研究，对胃癌的中医药防治具有重要意义。
, 百拇医药
表3复胃汤对大鼠肝肾功能的影响 (
±s) 组别
动物数(只)
ALT(u/L)
BUN(mmol/L)
RPROT(g/L)
ALB(g/L)
G-BIL(μmol/L)
CR(μmol/L)
正常对照组
15
, 百拇医药 67.9±11.8
7.8±0.9
79.6±5.4
37.8±5.6
12.7±2.7
66.9±7.9
复胃汤组
15
68.7±12.2
7.6±1.1
78.9±4.8
38.4±4.5
, http://www.100md.com
13.8±2.6
67.6±7.5
参考文献
1，李春启，刘为纹，房殿春.实验性腺胃粘膜肠上皮化生模型的建立.解放军医学杂志 1994；19(2)：131
2，刘春启，刘为纹，房殿春，等.实验性胃粘膜肠上皮化生组织发生的研究.肿瘤防治研究 1994；21(3)：148
3，李春启，刘为纹，房殿春，等.实验动物胃粘膜癌前病变的模型建立、发生机理及其逆转治疗的研究.第三军医大学学报 1994；16(1)：5
4，李春启，刘为纹，房殿春，等.大鼠实验性胃粘膜癌变过程中的组化观察.第三军医大学学报 1994；16(2)：92
5，李益农，萧树东，张锦刊，等.慢性胃炎的诊治问题.中华内科杂志 1983；22(5)：257
6，全国胃癌防治协作组病理组.胃及十二指肠粘膜活检病理.沈阳：辽宁人民出版社 1981；35～37
[收稿日期：1999-12-10], http://www.100md.com
单位：李顺民(广东省深圳市中医院 广东深圳 518033)；周小梅(广东省深圳市中医院 广东深圳 518033)；孙兆泉(湖南中医药研究所 湖南长沙 410000)；刘礼意(湖南中医药研究所 湖南长沙 410000)
关键词：胃粘膜；肠化生；大鼠；复胃汤
中国医师杂志000913[中图分类号]R446.8 [文献标识码]B
[文章编号]1008-1372(2000)09-0542-02
复胃汤为临床经验方，在对人胃癌癌前病变的防治中有较好的疗效。本实验以临床为基础，利用甲基亚硝基胍(N-Methyl-N'-Nitro-N-Nitrosoguandine,简称MNNG)为主造成大鼠胃癌前病变，观察该药方对其形成过程的作用。
, http://www.100md.com
1 实验材料
1.1 药物及试剂
1.1.1 复胃汤：由柴胡10g、丹参20g、生黄芪20g、甘松6g、半枝莲30g、莪术10g、穿山甲10g、茯苓10g、救必应30g、生甘草3g组方，先制备浸膏，临用时用蒸馏水配制，大鼠灌胃用量为临床等效剂量，相当于生药量17.5g.kg-1.d-1。
1.1.2 维酶素：由镇江生物化学制药厂生产，批号960312。
1.1.3 MNNG：为Fluke产品。
1.1.4 盐酸雷尼替丁胶囊(简称R)：杭州民生药厂生产，批号：960715。
1.2 动物 Wistar雄性大鼠，由湖南医科大学实验动物学部提供，体重100～120g。
, 百拇医药
1.3 研究方法
1.3.1 分组：随机5组，每组20只：⑴MNNG+R模型对照组；⑵MNNG+R+复胃汤；⑶MNNG+R+维酶素；⑷正常动物空白对照组；⑸正常动物+复胃汤组以观察药物的毒性。
1.3.2 造模方法：⑴MNNG的配制：每周配一次1g/L的母液，每日新鲜配制75～80μg/ml；配制用去离子双蒸水，注意避光保存，配制时带口罩、手套，防止吸入和接触。⑵雷尼替丁饲料的配制：制成含>0.06%雷尼替丁的粉状饲料，饲料按20g.只-1.d-1给药。⑶造模MNNG给药方法：给大鼠自由饮用水(含MNNG75～80μg/ml)，每周灌胃2次，灌胃量按2mg/次，总共28周[1，2]。⑷第20周造模各组处死2只，取胃部作病理，检测造模是否成功。
1.3.3 给药方法：治疗组、治疗对照组及毒性观察组在第20周起开始灌胃给药，每周灌5d，模型对照组及空白对照组灌生理盐水，连续8周。
, 百拇医药
1.3.4 检测指标：第28周处死动物，取胃部沿大弯剪开胃，10%甲醛固定，每例胃标本沿长轴剪成6块宽约2mm的条状物，石蜡包埋，切片，和常规HE及AB(pH2.5)/PAS粘液组化染色。病理诊断与分级参照全国胃癌研究协作组病理组制定的标准进行分级及统计。胃粘膜肠上皮化生腺体计量分析方法：每例胃标本的8个组织块各组1张切片，行AB(pH2.5)/PBS染色，光镜下对每张切片上的肠化腺体进行计数，此8张切片上的肠化腺体总数(幽门及胃底腺分别计数)代表该例胃标本的肠化腺体总数[2～4]。取毒性观察组及空白组检测谷丙转氨酶、总蛋白及白蛋白、总胆红素；尿素氮及肌酐等肝肾功能。
1.3.5 统计学方法：计数资料用χ2分析，计量资料用方差分析、t检验。
2 结果
2.1 肠上皮化生分级诊断标准[5] 视野肠腺化生在1/3以下的则诊断为轻度；1/3以上至2/3以下的为中度；2/3以上为重度肠腺化生。
, 百拇医药
2.2 异型增生分级标准[6] 轻度为肠管的形状不规则，排列有些紊乱和疏密不均，主要分布在粘膜浅部；中度为腺管的结构不规则，形状大小不整，呈分枝状，多达粘膜深层，其深部常见囊状扩张的腺管；重度为腺管的结构紊乱，腺管的形状及大小不整，常常达粘膜全层。
2.3 各组胃粘膜病变发生率 各组于第20周时各处死2只动物，各组均有一只动物出现肠上皮化生。MNNG+R模型对照组分别在第9,15,21,25,26周各死亡一只动物；复胃汤组分别在第10,13,27周各死亡一只动物；维酶素组分别在15,17,23,25周各死亡一只动物。满28周时余下动物数及胃病变情况见表1。肠上皮化生率模型组为76.92%，复胃汤组仅33.33%，发生明显低于模型对照组，差异有显著性意义(P<0.05)。并且未出现中重度异型增生。结果提示，复胃汤有降低或逆转MNNG所致肠上皮化生的作用。
表1各组胃粘膜病变例数及发生率 例(%) 组别
, 百拇医药
动物数(只)
肠上皮化生
中重度异型增生
胃癌
模型对照组
13
9(76.92)
2(15.38)
0
复胃汤组
15
5(33.33)*
, 百拇医药 0
0
维酶素组
14
8(57.14)
1
0
*复胃肠组与模型对照组比较χ2＝5.370，P<0.05
2.4 胃粘膜肠上皮化生腺体的计量分析 复胃汤能明显减少肠化腺体数量，与模型对照组比较，差异非常显著(幽门腺或总和腺体比较P<0.01，胃底腺比较P<0.05)；其作用明显优于对照药维酶素，差异有显著性(化生幽门腺体数或幽门腺与胃底腺化生总和比较。结果提示，复胃汤能明显减少大鼠肠化腺体数，对MNNG所致的肠上皮化生有明显的对抗作用，其作用强于维酶素，结果详见表2。表2胃粘膜肠化腺体计数 (
±s) 组别, 百拇医药
动物数
(只)
幽门腺
胃底腺
幽门腺+胃底腺
模型对照组
13
255.1±108.2
134.8±92.3
374.7±103.5
复胃汤组
15
112.7±103.6**△△
, 百拇医药
71.5±67.3*
178.6±92.0**△
维酶素组
14
219.4±113.9
114.7±98.8
312.6±107.9
注：与模型对照组比较t＝2.0929，*P<0.05，t幽＝3.5537，t幽+底＝5.3090，**P<0.01；与维酶素组比较t＝2.6419，△P<0.05，t＝3.6053，△△P<0.01
, http://www.100md.com 2.5 复胃汤对大鼠肝肾功能的影响 分别取正常动物(灌胃给生理盐水)及复胃汤动物各15只，复胃汤组药量为人临床用量的10倍，连续给药8周。在给药过程中，观察大鼠的体重、摄食、粪便、行为活动，均未出现异常，亦未出现动物死亡。满8周后处死动物，各内脏，未见明显异常，取血检测以下生化指标：丙氨酸氨基转换酶(ALT)、尿素氮(BUN)、总蛋白(RPROT)、白蛋白(ALB)、总胆红素(G-BIL)、肌酐(CR)。结果见表3。各项指标与正常对照组比较，无明显差异(P>0.05)。综合观察表明复胃汤对动物无明显毒性，临床应用是比较安全的。
3 讨论
胃癌前病变是指容易发生癌变的胃粘膜病理组织学变化，即胃粘膜的异型增生和肠上皮化生等。胃癌是我国最常见的恶性肿瘤，约占全部肿瘤死亡的1/5。为了更好地防治胃癌，对癌前病变防治研究已是胃癌研究的重点，基础研究已有大量文献报道[1～4]，我们的肠化造模研究结果与上述报道基本相符。由于将完全由动物自由饮水改为每周灌胃2次，动物服用MNNG更加可靠、精确，故提高了28周时的胃粘膜肠化率。西医对肠化的治疗有消胆胺、维酶素、吗丁啉、弱酸及五肽胃泌素、维甲酸等，但疗效不理想。中医研究发现通过增强胃粘膜屏障，调节胃肠运动，阻止胆汁返流，抗幽门螺旋杆菌感染，免疫调节，滋阴养肝或抑酸等综合作用，可能使萎缩腺体恢复，化生消退[5]。复胃汤为临床经验方，方中君药柴胡微辛苦性平，疏肝散结；半枝莲辛微苦凉，入胃经，功能清热解毒，活血祛瘀；臣药莪术辛苦温，破血祛瘀，行气止痛；黄芪甘微温，补养气血，托毒生肌；佐使药甘松甘温，理气止痛，醒脾健胃；救必应甘苦凉，清热解毒利湿，活血散瘀止痛；丹参苦微寒，活血祛瘀，凉血消痛；穿山甲咸微寒，归肝胃经，祛瘀散结；茯苓甘淡平，健脾渗湿，甘草甘平补中，调和诸药。十味药物合参，共奏疏肝清胃，化瘀散结之功。对胃粘膜肠化和异型增生治疗取得较好的效果。本实验用本方治MNNG致肠化动物结果表明，复胃汤有阻止肠化发生或减轻肠化程度的作用，与临床应用是基本吻合的。复胃汤有较好的防治胃癌前病变的作用，大剂量试验，动物未见毒性反应，其作用优于西药维酶素，因此结合临床，进一步作机理研究，对胃癌的中医药防治具有重要意义。
, 百拇医药
表3复胃汤对大鼠肝肾功能的影响 (
±s) 组别动物数(只)
ALT(u/L)
BUN(mmol/L)
RPROT(g/L)
ALB(g/L)
G-BIL(μmol/L)
CR(μmol/L)
正常对照组
15
, 百拇医药 67.9±11.8
7.8±0.9
79.6±5.4
37.8±5.6
12.7±2.7
66.9±7.9
复胃汤组
15
68.7±12.2
7.6±1.1
78.9±4.8
38.4±4.5
, http://www.100md.com
13.8±2.6
67.6±7.5
参考文献
1，李春启，刘为纹，房殿春.实验性腺胃粘膜肠上皮化生模型的建立.解放军医学杂志 1994；19(2)：131
2，刘春启，刘为纹，房殿春，等.实验性胃粘膜肠上皮化生组织发生的研究.肿瘤防治研究 1994；21(3)：148
3，李春启，刘为纹，房殿春，等.实验动物胃粘膜癌前病变的模型建立、发生机理及其逆转治疗的研究.第三军医大学学报 1994；16(1)：5
4，李春启，刘为纹，房殿春，等.大鼠实验性胃粘膜癌变过程中的组化观察.第三军医大学学报 1994；16(2)：92
5，李益农，萧树东，张锦刊，等.慢性胃炎的诊治问题.中华内科杂志 1983；22(5)：257
6，全国胃癌防治协作组病理组.胃及十二指肠粘膜活检病理.沈阳：辽宁人民出版社 1981；35～37
[收稿日期：1999-12-10], http://www.100md.com