恶性血液病患者化疗后输注脐血血浆的研究
作者：王秀华 张学忠 陈明伦 王自正 王书奎 徐燕丽 沈正善 田韧 孟钵 戴宇东 张益红
单位：王秀华 张学忠 陈明伦 徐燕丽 沈正善 田韧(210006 南京市第一医院血液科)；王自正 王书奎(南京市放免中心)；孟钵 戴宇东 张益红(南京市红十字血液中心)
关键词：脐血血浆；恶性血液病；化疗；细胞因子
江苏医药001022 【摘要】 目的 探讨脐血血浆(CBP)输注对恶性血液病患者化疗后细胞因子的变化和血像恢复的影响。方法 恶性血液病患者78例化疗后治疗组于第2、4天分别输注CBP 6个单位，或注射基因重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)150μg，对照组采用对症支持治疗，观察三组病例化疗后粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和红细胞生成素(Epo)的水平变化及骨髓和血像的恢复情况。结果 CBP和rhG-CSF治疗组外周血白细胞恢复较对照组快(P<0.05)，CBP输注后第2天外周血G-CSF和Epo水平达到高峰。且无输血反应及其它不良现象。结论 恶性血液病患者化疗后输注CBP具有促进外周血白细胞恢复的功能，临床上具有一定的开发利用价值。
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=
脐血中除含有较丰富的造血干/祖细胞外，其血浆中也富含多种造血生长因子，并可能存在一些尚未认识的造血因子，具有刺激造血的功能。为探讨CBP对恶性血液病患者化疗后血像恢复的影响及进一步开发其临床价值，笔者采用CBP临床输注，现将结果报告如下。
材料和方法
一、CBP制备 选择产前检查无肝胆、血液系统疾病及各种传染病，非高危妊娠，各型肝炎抗体阴性的健康产妇，足月顺产无产科并发症。当胎儿娩出后立即断脐，消毒封闭式采集脐血至胎盘剥离停止。设1只胎盘采集的脐血为1个单位，每单位脐血约100ml左右，制备成血浆约50ml，并做血型鉴定及无菌检测，置于-50℃冷冻保存备用。
二、观察对象 我院1998年1月～1999年12月确诊的住院病人，1个化疗周期为1个统计单位。患者随机分组：(1)CBP治疗组26例[白血病18例、淋巴瘤4例、多发性骨髓瘤(MM)3例、恶性组织细胞病1例]，男12例，女14例，年龄18～69岁，平均36岁，共化疗58个疗程。(2)rhG-CSF治疗组28例(白血病21例、淋巴瘤2例、MM5例)，男16例，女12例，年龄15～74岁，平均41岁，共化疗28个疗程。(3)对照组24例(白血病16例、淋巴瘤5例、MM3例)，男11例，女13例，年龄16～65岁，平均34岁，共化疗24个疗程。
, 百拇医药
三、治疗方法 急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)患者化疗采用DA方案(柔红霉素+阿糖胞苷)或HA方案(三尖杉酯碱+阿糖胞苷)，急性淋巴细胞性白血病(ALL)患者化疗采用VDP方案(长春新碱+柔红霉素+强的松)，淋巴瘤采用CHOP方案(环磷酰胺+阿霉素+长春新碱+强的松)，MM采用VAD方案(长春新碱+阿霉素+地塞米松)，均为常规剂量及用法。在化疗结束后第2天及第4天CBP组各输注CBP 6个单位；rhG-CSF组各注射rhG-CSF150μg；对照组仅采用一般的对症支持治疗。
四、观察指标 化疗后每3天查血常规1次，直至外周血WBC≥4.0×109/L，部分病例直至Hb达100g/L，BPC达100×109/L以上，化疗后第7天查骨髓，于10～35天再复查骨髓1～4次，直至骨髓增生达活跃。于CBP输注前及输注后第2、4、7天分别测定G-CSF(ELISA法)和Epo(RIA法)，同时观察患者身体状况的变化，包括精神、食欲、感染及出血情况等。
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结果
一、临床症状的改善情况 CBP治疗组输注后均感体力、食欲增加，无一例出现输血反应；化疗中出现上呼吸道感染4例，肺部和肛周感染各1例，感染率23.1%。rhG-CSF组上呼吸道感染3例，肺部感染1例，感染率14.3%。对照组上呼吸道感染5例，肺部感染2例，肠道感染1例，感染率33.3%。两治疗组感染发生率较对照组低。
二、血像及骨髓像的变化 CBP组WBC上升较快，平均较对照组缩短7天，有显著差别(P<0.05)，Hb、BPC上升亦较对照组快，但不显著；CBP组骨髓恢复至增生活跃所需天数较对照组明显缩短(P<0.05)，见表1。
三、G-CSF和Epo的变化 测定了36个疗程化疗前后细胞因子的变化，结果CBP输注后第2天患者外周血G-CSF水平达到高峰，较化疗前有显著差异(P<0.05)；外周血Epo水平亦较化疗前和输注前偏高，但无显著差异(P>0.05)，见表2。
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表1 三组外周血像和骨髓像的变化(
±s) 分组
WBC达4.0×109/L
Hb达100g/L
BPC达100×109/L
骨髓至增生活跃
n
天数
n
天数
n
, 百拇医药 天数
n
天数
CBP
56
12.14±4.23*
27
14.15±3.76
32
15.65±5.23
38
11.35±4.58*
, 百拇医药
rhG-CSF
28
11.05±4.16*
16
13.27±3.43
18
13.86±4.65*
21
10.86±4.69*
对照
24
18.68±5.84
, 百拇医药
13
15.24±4.18
14
18.19±5.36
17
17.65±5.76
与对照组比较*P<0.05表2 CBP输注前后外周血G-CSF和Epo水平的变化(±s，n＝36)
化疗前
输注前
输注后2d
, 百拇医药
输注后4d
输注后7d
G-CSF(ng/L)
42.5±23.4
61.3±32.3
112.6±67.8
98.6±54.1
79.2±48.9
Epo(U/L)
99.3±51.8
121.4±57.2
187.5±73.2
, 百拇医药
165.7±81.4
141.5±68.3
讨论
九十年代以来，一些学者对脐血中造血生长因子进行了研究，Laver等[1]于1990年定性分析发现脐血中含较高水平的G-CSF和粒单集落刺激因子(GM-CSF)，最近笔者[2]利用RIA法和ELISA法定量测出脐血血浆中含有较高水平的G-CSF和Epo，含量分别为338±281ng/L和32.66±21.65U/L，并含一定量的IL-2和IL-6。1994年Ruggieri等[3]报道，脐血血浆能够增强脐血中混合集落形成单位(CFU-GEMM)的自我更新能力，随后，Carow等[4]发现脐血血浆亦能增强骨髓中造血干/祖细胞的自我更新和增殖的能力，而成人外周血浆联合使用IL-1，IL-3，IL-6，IL-11，G-CSF，GM-CSF等均不能替代脐血血浆，这两项研究证实了脐血血浆具有刺激造血的功能。近年来，笔者[5、6]使用脐血血浆与rhG-CSF对正常骨髓细胞生长影响进行比较研究，发现脐血血浆在维持骨髓细胞存活和增加粒单集落形成单位(CFU-GM)集落形成方面与rhG-CSF效果相当，且具有增强白血病细胞对阿糖胞苷敏感性的作用。因此，利用脐血血浆临床输注治疗粒细胞减少症具有一定的理论与体外实验基础。
, 百拇医药
我们的临床观察结果显示，恶性血液病患者化疗后输注脐血血浆，其外周血白细胞和骨髓增生恢复较快，感染发生率明显下降，无一例出现输血反应及其它不良现象。其外周血G-CSF和Epo水平于输注后第2天达高峰，可能与化疗后骨髓抑制导致反馈性增高和输注脐血血浆有关。目前，基因重组粒细胞生长因子价格还很昂贵，许多患者不能承受，而脐血血浆来源丰富、价格低廉，故值得开发与应用。
基金项目：江苏省教委基金(98KJD320011)
参考文献
1，Laver J，Duncan E，Abboud M，et al.High levels of granulocyte and granulocytemacrophage colony-stimulating factors is cord blood of normal full-term neonates.J Pediatr，1990，116：627-632.
, http://www.100md.com
2，王秀华，张学忠，时宏珍，等.脐血血浆中Epo、G-CSF、IL-2、IL-6含量的测定.中华血液学杂志，1999，20：600.
3，Ruggieri L，Heimfeld S，Broxmeyer HE.Cytokine-dependent ex vivo expansion of early subsets of CD34+ cord blood myeloid progenitors is enhanced by cord blood plasma，but expansion of the mere mature subsets of progenitors is ravored.Blood Cells，1994，20：436-454.
4，Carow CE，Hamgoc G，Broxmeyer HE，et al.Human multipotential progenitor cells(CFU-GEMM) have extensive replanting capacity for secondary CFU-GEMM：an effect enhanced by cord blood plasma.Blood，1993，81：942-949.
5，张学忠，陈玉心，汪承亚，等.脐血血浆与rhG-CSF对正常骨髓细胞影响的比较研究.中国输血杂志，1998，11：5-7.
6，张学忠，陈玉心，王秀华，等.脐血血浆增强阿糖胞苷抗白血病效应的实验研究.中华血液学杂志，1999，20：229-231.
收稿：2000-02-01
修回：2000-04-12, 百拇医药
单位：王秀华 张学忠 陈明伦 徐燕丽 沈正善 田韧(210006 南京市第一医院血液科)；王自正 王书奎(南京市放免中心)；孟钵 戴宇东 张益红(南京市红十字血液中心)
关键词：脐血血浆；恶性血液病；化疗；细胞因子
江苏医药001022 【摘要】 目的 探讨脐血血浆(CBP)输注对恶性血液病患者化疗后细胞因子的变化和血像恢复的影响。方法 恶性血液病患者78例化疗后治疗组于第2、4天分别输注CBP 6个单位，或注射基因重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)150μg，对照组采用对症支持治疗，观察三组病例化疗后粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和红细胞生成素(Epo)的水平变化及骨髓和血像的恢复情况。结果 CBP和rhG-CSF治疗组外周血白细胞恢复较对照组快(P<0.05)，CBP输注后第2天外周血G-CSF和Epo水平达到高峰。且无输血反应及其它不良现象。结论 恶性血液病患者化疗后输注CBP具有促进外周血白细胞恢复的功能，临床上具有一定的开发利用价值。
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脐血中除含有较丰富的造血干/祖细胞外，其血浆中也富含多种造血生长因子，并可能存在一些尚未认识的造血因子，具有刺激造血的功能。为探讨CBP对恶性血液病患者化疗后血像恢复的影响及进一步开发其临床价值，笔者采用CBP临床输注，现将结果报告如下。
材料和方法
一、CBP制备 选择产前检查无肝胆、血液系统疾病及各种传染病，非高危妊娠，各型肝炎抗体阴性的健康产妇，足月顺产无产科并发症。当胎儿娩出后立即断脐，消毒封闭式采集脐血至胎盘剥离停止。设1只胎盘采集的脐血为1个单位，每单位脐血约100ml左右，制备成血浆约50ml，并做血型鉴定及无菌检测，置于-50℃冷冻保存备用。
二、观察对象 我院1998年1月～1999年12月确诊的住院病人，1个化疗周期为1个统计单位。患者随机分组：(1)CBP治疗组26例[白血病18例、淋巴瘤4例、多发性骨髓瘤(MM)3例、恶性组织细胞病1例]，男12例，女14例，年龄18～69岁，平均36岁，共化疗58个疗程。(2)rhG-CSF治疗组28例(白血病21例、淋巴瘤2例、MM5例)，男16例，女12例，年龄15～74岁，平均41岁，共化疗28个疗程。(3)对照组24例(白血病16例、淋巴瘤5例、MM3例)，男11例，女13例，年龄16～65岁，平均34岁，共化疗24个疗程。
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三、治疗方法 急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)患者化疗采用DA方案(柔红霉素+阿糖胞苷)或HA方案(三尖杉酯碱+阿糖胞苷)，急性淋巴细胞性白血病(ALL)患者化疗采用VDP方案(长春新碱+柔红霉素+强的松)，淋巴瘤采用CHOP方案(环磷酰胺+阿霉素+长春新碱+强的松)，MM采用VAD方案(长春新碱+阿霉素+地塞米松)，均为常规剂量及用法。在化疗结束后第2天及第4天CBP组各输注CBP 6个单位；rhG-CSF组各注射rhG-CSF150μg；对照组仅采用一般的对症支持治疗。
四、观察指标 化疗后每3天查血常规1次，直至外周血WBC≥4.0×109/L，部分病例直至Hb达100g/L，BPC达100×109/L以上，化疗后第7天查骨髓，于10～35天再复查骨髓1～4次，直至骨髓增生达活跃。于CBP输注前及输注后第2、4、7天分别测定G-CSF(ELISA法)和Epo(RIA法)，同时观察患者身体状况的变化，包括精神、食欲、感染及出血情况等。
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结果
一、临床症状的改善情况 CBP治疗组输注后均感体力、食欲增加，无一例出现输血反应；化疗中出现上呼吸道感染4例，肺部和肛周感染各1例，感染率23.1%。rhG-CSF组上呼吸道感染3例，肺部感染1例，感染率14.3%。对照组上呼吸道感染5例，肺部感染2例，肠道感染1例，感染率33.3%。两治疗组感染发生率较对照组低。
二、血像及骨髓像的变化 CBP组WBC上升较快，平均较对照组缩短7天，有显著差别(P<0.05)，Hb、BPC上升亦较对照组快，但不显著；CBP组骨髓恢复至增生活跃所需天数较对照组明显缩短(P<0.05)，见表1。
三、G-CSF和Epo的变化 测定了36个疗程化疗前后细胞因子的变化，结果CBP输注后第2天患者外周血G-CSF水平达到高峰，较化疗前有显著差异(P<0.05)；外周血Epo水平亦较化疗前和输注前偏高，但无显著差异(P>0.05)，见表2。
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表1 三组外周血像和骨髓像的变化(
±s) 分组WBC达4.0×109/L
Hb达100g/L
BPC达100×109/L
骨髓至增生活跃
n
天数
n
天数
n
, 百拇医药 天数
n
天数
CBP
56
12.14±4.23*
27
14.15±3.76
32
15.65±5.23
38
11.35±4.58*
, 百拇医药
rhG-CSF
28
11.05±4.16*
16
13.27±3.43
18
13.86±4.65*
21
10.86±4.69*
对照
24
18.68±5.84
, 百拇医药
13
15.24±4.18
14
18.19±5.36
17
17.65±5.76
与对照组比较*P<0.05表2 CBP输注前后外周血G-CSF和Epo水平的变化(
±s，n＝36)化疗前
输注前
输注后2d
, 百拇医药
输注后4d
输注后7d
G-CSF(ng/L)
42.5±23.4
61.3±32.3
112.6±67.8
98.6±54.1
79.2±48.9
Epo(U/L)
99.3±51.8
121.4±57.2
187.5±73.2
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165.7±81.4
141.5±68.3
讨论
九十年代以来，一些学者对脐血中造血生长因子进行了研究，Laver等[1]于1990年定性分析发现脐血中含较高水平的G-CSF和粒单集落刺激因子(GM-CSF)，最近笔者[2]利用RIA法和ELISA法定量测出脐血血浆中含有较高水平的G-CSF和Epo，含量分别为338±281ng/L和32.66±21.65U/L，并含一定量的IL-2和IL-6。1994年Ruggieri等[3]报道，脐血血浆能够增强脐血中混合集落形成单位(CFU-GEMM)的自我更新能力，随后，Carow等[4]发现脐血血浆亦能增强骨髓中造血干/祖细胞的自我更新和增殖的能力，而成人外周血浆联合使用IL-1，IL-3，IL-6，IL-11，G-CSF，GM-CSF等均不能替代脐血血浆，这两项研究证实了脐血血浆具有刺激造血的功能。近年来，笔者[5、6]使用脐血血浆与rhG-CSF对正常骨髓细胞生长影响进行比较研究，发现脐血血浆在维持骨髓细胞存活和增加粒单集落形成单位(CFU-GM)集落形成方面与rhG-CSF效果相当，且具有增强白血病细胞对阿糖胞苷敏感性的作用。因此，利用脐血血浆临床输注治疗粒细胞减少症具有一定的理论与体外实验基础。
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我们的临床观察结果显示，恶性血液病患者化疗后输注脐血血浆，其外周血白细胞和骨髓增生恢复较快，感染发生率明显下降，无一例出现输血反应及其它不良现象。其外周血G-CSF和Epo水平于输注后第2天达高峰，可能与化疗后骨髓抑制导致反馈性增高和输注脐血血浆有关。目前，基因重组粒细胞生长因子价格还很昂贵，许多患者不能承受，而脐血血浆来源丰富、价格低廉，故值得开发与应用。
基金项目：江苏省教委基金(98KJD320011)
参考文献
1，Laver J，Duncan E，Abboud M，et al.High levels of granulocyte and granulocytemacrophage colony-stimulating factors is cord blood of normal full-term neonates.J Pediatr，1990，116：627-632.
, http://www.100md.com
2，王秀华，张学忠，时宏珍，等.脐血血浆中Epo、G-CSF、IL-2、IL-6含量的测定.中华血液学杂志，1999，20：600.
3，Ruggieri L，Heimfeld S，Broxmeyer HE.Cytokine-dependent ex vivo expansion of early subsets of CD34+ cord blood myeloid progenitors is enhanced by cord blood plasma，but expansion of the mere mature subsets of progenitors is ravored.Blood Cells，1994，20：436-454.
4，Carow CE，Hamgoc G，Broxmeyer HE，et al.Human multipotential progenitor cells(CFU-GEMM) have extensive replanting capacity for secondary CFU-GEMM：an effect enhanced by cord blood plasma.Blood，1993，81：942-949.
5，张学忠，陈玉心，汪承亚，等.脐血血浆与rhG-CSF对正常骨髓细胞影响的比较研究.中国输血杂志，1998，11：5-7.
6，张学忠，陈玉心，王秀华，等.脐血血浆增强阿糖胞苷抗白血病效应的实验研究.中华血液学杂志，1999，20：229-231.
收稿：2000-02-01
修回：2000-04-12, 百拇医药