原发性高血压患者血管紧张素转换酶基因多态性及危险因素的关系研究
作者：占伊扬 钱卫冲 王海燕
单位：(210029 南京医科大学第一附属医院)
关键词：原发性高血压；血管紧张素转换酶；男性；基因多态性；危险因素
江苏医药001021 【摘要】 目的 研究中国人群中原发性高血压患者血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性及其危险因素的关系。方法 对社区人群调查中确诊的112例原发性高血压患者，和相同数量，性别、年龄相匹配的健康人询问与原发性高血压有关的因素，测量空腹血脂及坐位血压，应用聚合酶链反应(PCR)检测ACE I/D基因多态性。结果 两组ACE基因I/D多态性构成有显著性差异(P<0.05)。病例组DD基因型高于对照组(30.4%vs18.8%)，其中男性组达(34%vs14%)，均有显著差异(P<0.05)。结论 DD基因型似可作为原发性高血压，特别是男性原发性高血压的一种遗传易感指标；心脑血管病阳性家族史、向心性肥胖、高甘油三酯血症、DD基因型是原发性高血压的独立危险因素。
, 百拇医药
血管紧张素转换酶(ACE)是肾素-血管紧张素系统的关键酶之一，在高血压等疾病的发生发展中可能发挥着重要作用。ACE基因的第16内含子有一段插入/缺失多态性(insertion/deletion，I/D)，研究证实其与循环中ACE水平有关，而在原发性高血压的发病过程中是否起作用则颇具争议。本文采用社区人群病例对照研究方法了解中国人ACE基因I/D多态性的分布，探讨其与原发性高血压的关系，分析原发性高血压的危险因素。
对象与方法
一、研究对象：以整群分层抽样法，对江苏省金坛市某社区心血管流行病监测点1?100例无临床症状人群，根据血压水平(每位受试者测坐位血压3次，间隔5分钟，取第2、3两次收缩压、舒张压的平均值)，分病例组及对照组。病例组(平均收缩压≥160mmHg和/或舒张压≥95mmHg)共112例，根据性别、年龄配对原则，选取对照组(平均收缩压≤140mmHg和舒张压≤90mmHg)共112例，排除继发性高血压。病例组无服用降压药史。
, 百拇医药
二、调查内容：详细询问每位入选者年龄、性别、心脑血管疾病家族史(一级亲属中发生冠心病、脑卒中者为家族史阳性)等，按统一标准测量坐位血压、身高、体重、腰围、臀围，尽量避免偏差的出现。
三、人基因组DNA的提取：禁食10小时以上，肘静脉抽血5ml，分离后将血清送检血脂，将凝血块置-20℃冰箱(采用酚-氯仿法提取白细胞基因组DNA)半年内进行ACE多态性检测。
四、ACE基因I/D多态性检测：目的片段扩增参考文献[1]。引物Sense：5′-CTGCAGACCACTCCCATCCTTTCT-3′，Anti-sense：5′-GTAGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3′由中国科学院上海细胞生物所赛尔医学工程公司合成。Tag酶购自上海Promega公司。PCR反应条件：首先94℃变性30秒，58.5℃退火30秒，72℃延伸60秒，共循环35次；最后72℃充分延伸，运用PE2400基因合成仪扩增。PCR产物经1.2%琼脂糖电泳，溴化乙锭染色，紫外灯下观察扩增条带，并在GD-1000凝胶电泳分析拍照。为排除因D等位基因可被优先扩增，对所检为DD基因型个体进行特异性插入PCR扩增。Sense：5′-TGGGACCACAGCGCCCGCCACTAC-3′，Anti-sense：5′-CGCCAGCCCTCCCATGCCCATAA-3′。
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五、统计学分析：组间均数比较用t检验，频数分布用χ2检验。用单因素和多因素条件Logistic回归分析各种因素对原发性高血压的相对危险度。
结果
一、ACE基因I/D多态性：位于ACE基因第16内含子I/D多态性经PCR扩增可产生190bp缺失和490bp插入两种长度的片段，紫外灯下可呈三种条带：DD型(仅有190bp带型)，ID型(含490bp和190bp两种带型)，Ⅱ型(仅有490bp带型)。
二、临床资料比较：两组样本年龄相似，病例组收缩压、舒张压、体重、腰围、TC、TG、LDL-C、腰臀比(WHR)均高于对照组，HDL-C则低于对照组。
三、基因类型：两组ACE基因型分布有显著差异(P<0.05)，病例组DD基因型为30.4%，高于对照组18.8%，见表1。其中病例组男性DD基因型34%显著高于对照组14%(P<0.05)，见表2。
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四、等位基因频率分布：病例组与对照组等位基因频率经统计学比较无显著差异。
五、基因适合度的检验：两组基因型频率进行合适度检验，皆达Hardy-Weinberg平衡。
六、单因素条件Logistic回归分析：共有18个变量参加分析，结果表明与原发性高血压关系较大的因素有5个(P<0.05)，见表3。
七、多因素条件Logistic回归分析：单因素有意义的5个变量采用多因素条件Logistic回归分析，结果4个危险因素进入模型，见表4。
表1 病例组和对照组ACE基因多态性分布(%) 基因型
DD
ID
Ⅱ
, 百拇医药
合计
病例
34(30.4)
46(41.1)
32(28.5)
112
对照
21(18.8)
63(56.2)
28(25.0)
112
合计
55(24.6)
, http://www.100md.com
109(48.7)
60(26.7)
224
χ2＝6.0 P<0.05表2 病例组和对照组男性ACE基因多态性分布(%) 基因型
DD
ID
Ⅱ
合计
病例
17(34)
17(34)
16(32)
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50
对照
7(14)
28(56)
15(30)
50
合计
24(24)
45(45)
31(31)
100
χ2＝6.89 P<0.05表3 单因素条件Logostic回归分析 因素(暴露 非暴露)
, http://www.100md.com
回归系数
标准误
比值比
95%可信限
P值
心脑血管疾病家族史(阳性，阴性)
0.8650
0.298
2.375
1.32～4.26
0.004
肥胖＃(是，否)
, 百拇医药
1.038
0.282
2.824
1.63～4.91
<0.001
向心性肥胖(是，否)
0.8842
0.273
2.421
1.41～4.13
0.001
高甘油三酯症(≥1.7，<1.7)
, http://www.100md.com
0.9985
0.313
2.714
1.47～5.01
0.001
DD基因型(是，否)
0.832
0.379
2.30
1.09～4.03
0.028
肥胖＃指BMI≥24 向心性肥胖指WHR 男≥0.90，女≥0.85表4 多因素条件Logostic回归分析模型 因素
, http://www.100md.com
回归系数
标准误
比值比95%
可信值
P值
心血管疾病阳性家族史
0.8376
0.328
2.311
1.21～4.40
0.011
向心性肥胖
0.6234
, http://www.100md.com
0.298
1.865
1.04～3.34
0.036
高甘油三酯血症
0.9039
0.346
2.469
1.25～4.86
0.009
DD基因型
0.8639
, 百拇医药 0.417
2.372
1.04～5.37
0.038
χ2＝30.16 P<0.001讨论
ACE是血管紧张素Ⅱ形成过程中的一个重要限速酶，后者在心血管疾病尤其是原发性高血压发病中起关键作用。而ACE主要受控于ACE基因。
ACE基因第16内含子I/D多态性存在于自然人群之中，本组研究对象来自同一社区中具有相同生活背景的一般人群，而非选自医院病人等特殊群体，样本完整性及代表较好，能真实地反映我国社区人群ACE I/D基因多态性的情况。根据对照组的结果推测中国农村社区汉族人中D等位基因频率为46.9%，Ⅰ等位基因频率为53.1%，与国内(I/D 0.54/0.46)及日本(I/D 0.56/0.44)报道的较为接近[2，3]，与加拿大白人(I/D0.40/0.60)，澳大利亚Zee高加索人(I/D 0.41/0.6)[4，5]相差较大，说明不同种族之间ACE基因I/D多态性存在差异。
, 百拇医药
Jeunemaitre、Harrap等研究认为ACE基因型与原发性高血压无关[6，7]，而Morise、Duru等则认为DD基因型与高血压相关明显[8，9]。有的国内研究结果亦支持上述观点。最近Fornage等[10]对大规模的家系及同胞研究否定了ACE基因区域等位基因的变异与个体间血压变异无关的假设，认为将性别分开，D等位基因易引起男子血压升高，我们的结果与之相似。
本研究在单因素回归分析的基础上，通过多因素条件Logistic回归分析，结果表明心脑血管疾病阳性家族史、向心性肥胖、高甘油三酯血症、DD基因型与原发性高血压存在不同程度的联系，可能是原发性高血压的独立危险因素。前两个危险因素应引起临床医师高度重视，原发性高血压的预防应强调体重控制，尤其是对有阳性家族史的高危人群更应加强宣教。原发性高血压与血脂异常有一定关系，可能在原发性高血压患者中，脂蛋白脂酶对胰岛素调节作用产生抵抗，使极低密度脂蛋白合成增加，清除降低，致高甘油三酯血症。
, 百拇医药
参考文献
1，Rigat B，Hubert C，Corvol P，et al.PCR detection of the insertion/deletion polymorphism of the human angiotensin converting enzyme gene.Nucl Acids Ress，1992，20：1433.
2，胡爱华，周文郁，刘怡雯，等.中国汉族人血管紧张素转换酶I/D多态性与原发性高血压的关系.高血压杂志，1998，6：163.
3，Nakai K，Itoh C，Miura Y，et al.Deletion polymorphism of the ACE gene associate with increased risk for ischemic heart disease in the Japanese.Jap J Clin Pathol，1994，42：689-694.
, 百拇医药
4，Hegele RA，Brunt JH，Connelly PW，et al. Genetic and biochemical factors associated with variation in blood pressure in a genetic isolate.Hypertens，1996，27：308-312.
5，Zee RY，Lou YK，Griffiths LR，et al.Absence of a polymorphism of the angiotensin I-converting enzyme gene with essential hypertension.Biochem Biophys Res Commum，1992，184：9-15.
6，Jeunemaitre X，Lifton R，Hunt SC，et al.Absence of linkage between the angiotensin converting enzyme locus and human essential hypertension.Nat Genet，1992，1：72-75.
, http://www.100md.com
7，Harrap SB，Davidson R，Connor JM，et al.The angiotensin I converting enzyme and predisposition to high blood pressure.Hypertension，1993，21：445-460
8，Morise T，Takeuchi Y，Takeda R，et al.Angiotensin-converting exzyme polymorphism and essential hypertension.Lancet，1994，343：125.
9，Duru K，Farrow S，Wang JM，et al.Frequency of a deletion polymorphism in the gene for angiotensin converting enzyme is increased in African-Americans with hypertension.Am J Hypertens，1994，7：759-762.
10，Fornage M，Anos C，Kardia s，et al.Variation in the region of the angiotensin-converting enzyme gene influences interindividual differences in blood pressure levels in young white males.Circulation，1998，97：1773-1779.
收稿：1999-09-29
修回：1999-11-18, 百拇医药
单位：(210029 南京医科大学第一附属医院)
关键词：原发性高血压；血管紧张素转换酶；男性；基因多态性；危险因素
江苏医药001021 【摘要】 目的 研究中国人群中原发性高血压患者血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性及其危险因素的关系。方法 对社区人群调查中确诊的112例原发性高血压患者，和相同数量，性别、年龄相匹配的健康人询问与原发性高血压有关的因素，测量空腹血脂及坐位血压，应用聚合酶链反应(PCR)检测ACE I/D基因多态性。结果 两组ACE基因I/D多态性构成有显著性差异(P<0.05)。病例组DD基因型高于对照组(30.4%vs18.8%)，其中男性组达(34%vs14%)，均有显著差异(P<0.05)。结论 DD基因型似可作为原发性高血压，特别是男性原发性高血压的一种遗传易感指标；心脑血管病阳性家族史、向心性肥胖、高甘油三酯血症、DD基因型是原发性高血压的独立危险因素。
, 百拇医药
血管紧张素转换酶(ACE)是肾素-血管紧张素系统的关键酶之一，在高血压等疾病的发生发展中可能发挥着重要作用。ACE基因的第16内含子有一段插入/缺失多态性(insertion/deletion，I/D)，研究证实其与循环中ACE水平有关，而在原发性高血压的发病过程中是否起作用则颇具争议。本文采用社区人群病例对照研究方法了解中国人ACE基因I/D多态性的分布，探讨其与原发性高血压的关系，分析原发性高血压的危险因素。
对象与方法
一、研究对象：以整群分层抽样法，对江苏省金坛市某社区心血管流行病监测点1?100例无临床症状人群，根据血压水平(每位受试者测坐位血压3次，间隔5分钟，取第2、3两次收缩压、舒张压的平均值)，分病例组及对照组。病例组(平均收缩压≥160mmHg和/或舒张压≥95mmHg)共112例，根据性别、年龄配对原则，选取对照组(平均收缩压≤140mmHg和舒张压≤90mmHg)共112例，排除继发性高血压。病例组无服用降压药史。
, 百拇医药
二、调查内容：详细询问每位入选者年龄、性别、心脑血管疾病家族史(一级亲属中发生冠心病、脑卒中者为家族史阳性)等，按统一标准测量坐位血压、身高、体重、腰围、臀围，尽量避免偏差的出现。
三、人基因组DNA的提取：禁食10小时以上，肘静脉抽血5ml，分离后将血清送检血脂，将凝血块置-20℃冰箱(采用酚-氯仿法提取白细胞基因组DNA)半年内进行ACE多态性检测。
四、ACE基因I/D多态性检测：目的片段扩增参考文献[1]。引物Sense：5′-CTGCAGACCACTCCCATCCTTTCT-3′，Anti-sense：5′-GTAGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3′由中国科学院上海细胞生物所赛尔医学工程公司合成。Tag酶购自上海Promega公司。PCR反应条件：首先94℃变性30秒，58.5℃退火30秒，72℃延伸60秒，共循环35次；最后72℃充分延伸，运用PE2400基因合成仪扩增。PCR产物经1.2%琼脂糖电泳，溴化乙锭染色，紫外灯下观察扩增条带，并在GD-1000凝胶电泳分析拍照。为排除因D等位基因可被优先扩增，对所检为DD基因型个体进行特异性插入PCR扩增。Sense：5′-TGGGACCACAGCGCCCGCCACTAC-3′，Anti-sense：5′-CGCCAGCCCTCCCATGCCCATAA-3′。
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五、统计学分析：组间均数比较用t检验，频数分布用χ2检验。用单因素和多因素条件Logistic回归分析各种因素对原发性高血压的相对危险度。
结果
一、ACE基因I/D多态性：位于ACE基因第16内含子I/D多态性经PCR扩增可产生190bp缺失和490bp插入两种长度的片段，紫外灯下可呈三种条带：DD型(仅有190bp带型)，ID型(含490bp和190bp两种带型)，Ⅱ型(仅有490bp带型)。
二、临床资料比较：两组样本年龄相似，病例组收缩压、舒张压、体重、腰围、TC、TG、LDL-C、腰臀比(WHR)均高于对照组，HDL-C则低于对照组。
三、基因类型：两组ACE基因型分布有显著差异(P<0.05)，病例组DD基因型为30.4%，高于对照组18.8%，见表1。其中病例组男性DD基因型34%显著高于对照组14%(P<0.05)，见表2。
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四、等位基因频率分布：病例组与对照组等位基因频率经统计学比较无显著差异。
五、基因适合度的检验：两组基因型频率进行合适度检验，皆达Hardy-Weinberg平衡。
六、单因素条件Logistic回归分析：共有18个变量参加分析，结果表明与原发性高血压关系较大的因素有5个(P<0.05)，见表3。
七、多因素条件Logistic回归分析：单因素有意义的5个变量采用多因素条件Logistic回归分析，结果4个危险因素进入模型，见表4。
表1 病例组和对照组ACE基因多态性分布(%) 基因型
DD
ID
Ⅱ
, 百拇医药
合计
病例
34(30.4)
46(41.1)
32(28.5)
112
对照
21(18.8)
63(56.2)
28(25.0)
112
合计
55(24.6)
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109(48.7)
60(26.7)
224
χ2＝6.0 P<0.05表2 病例组和对照组男性ACE基因多态性分布(%) 基因型
DD
ID
Ⅱ
合计
病例
17(34)
17(34)
16(32)
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50
对照
7(14)
28(56)
15(30)
50
合计
24(24)
45(45)
31(31)
100
χ2＝6.89 P<0.05表3 单因素条件Logostic回归分析 因素(暴露 非暴露)
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回归系数
标准误
比值比
95%可信限
P值
心脑血管疾病家族史(阳性，阴性)
0.8650
0.298
2.375
1.32～4.26
0.004
肥胖＃(是，否)
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1.038
0.282
2.824
1.63～4.91
<0.001
向心性肥胖(是，否)
0.8842
0.273
2.421
1.41～4.13
0.001
高甘油三酯症(≥1.7，<1.7)
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0.9985
0.313
2.714
1.47～5.01
0.001
DD基因型(是，否)
0.832
0.379
2.30
1.09～4.03
0.028
肥胖＃指BMI≥24 向心性肥胖指WHR 男≥0.90，女≥0.85表4 多因素条件Logostic回归分析模型 因素
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回归系数
标准误
比值比95%
可信值
P值
心血管疾病阳性家族史
0.8376
0.328
2.311
1.21～4.40
0.011
向心性肥胖
0.6234
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0.298
1.865
1.04～3.34
0.036
高甘油三酯血症
0.9039
0.346
2.469
1.25～4.86
0.009
DD基因型
0.8639
, 百拇医药 0.417
2.372
1.04～5.37
0.038
χ2＝30.16 P<0.001讨论
ACE是血管紧张素Ⅱ形成过程中的一个重要限速酶，后者在心血管疾病尤其是原发性高血压发病中起关键作用。而ACE主要受控于ACE基因。
ACE基因第16内含子I/D多态性存在于自然人群之中，本组研究对象来自同一社区中具有相同生活背景的一般人群，而非选自医院病人等特殊群体，样本完整性及代表较好，能真实地反映我国社区人群ACE I/D基因多态性的情况。根据对照组的结果推测中国农村社区汉族人中D等位基因频率为46.9%，Ⅰ等位基因频率为53.1%，与国内(I/D 0.54/0.46)及日本(I/D 0.56/0.44)报道的较为接近[2，3]，与加拿大白人(I/D0.40/0.60)，澳大利亚Zee高加索人(I/D 0.41/0.6)[4，5]相差较大，说明不同种族之间ACE基因I/D多态性存在差异。
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Jeunemaitre、Harrap等研究认为ACE基因型与原发性高血压无关[6，7]，而Morise、Duru等则认为DD基因型与高血压相关明显[8，9]。有的国内研究结果亦支持上述观点。最近Fornage等[10]对大规模的家系及同胞研究否定了ACE基因区域等位基因的变异与个体间血压变异无关的假设，认为将性别分开，D等位基因易引起男子血压升高，我们的结果与之相似。
本研究在单因素回归分析的基础上，通过多因素条件Logistic回归分析，结果表明心脑血管疾病阳性家族史、向心性肥胖、高甘油三酯血症、DD基因型与原发性高血压存在不同程度的联系，可能是原发性高血压的独立危险因素。前两个危险因素应引起临床医师高度重视，原发性高血压的预防应强调体重控制，尤其是对有阳性家族史的高危人群更应加强宣教。原发性高血压与血脂异常有一定关系，可能在原发性高血压患者中，脂蛋白脂酶对胰岛素调节作用产生抵抗，使极低密度脂蛋白合成增加，清除降低，致高甘油三酯血症。
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参考文献
1，Rigat B，Hubert C，Corvol P，et al.PCR detection of the insertion/deletion polymorphism of the human angiotensin converting enzyme gene.Nucl Acids Ress，1992，20：1433.
2，胡爱华，周文郁，刘怡雯，等.中国汉族人血管紧张素转换酶I/D多态性与原发性高血压的关系.高血压杂志，1998，6：163.
3，Nakai K，Itoh C，Miura Y，et al.Deletion polymorphism of the ACE gene associate with increased risk for ischemic heart disease in the Japanese.Jap J Clin Pathol，1994，42：689-694.
, 百拇医药
4，Hegele RA，Brunt JH，Connelly PW，et al. Genetic and biochemical factors associated with variation in blood pressure in a genetic isolate.Hypertens，1996，27：308-312.
5，Zee RY，Lou YK，Griffiths LR，et al.Absence of a polymorphism of the angiotensin I-converting enzyme gene with essential hypertension.Biochem Biophys Res Commum，1992，184：9-15.
6，Jeunemaitre X，Lifton R，Hunt SC，et al.Absence of linkage between the angiotensin converting enzyme locus and human essential hypertension.Nat Genet，1992，1：72-75.
, http://www.100md.com
7，Harrap SB，Davidson R，Connor JM，et al.The angiotensin I converting enzyme and predisposition to high blood pressure.Hypertension，1993，21：445-460
8，Morise T，Takeuchi Y，Takeda R，et al.Angiotensin-converting exzyme polymorphism and essential hypertension.Lancet，1994，343：125.
9，Duru K，Farrow S，Wang JM，et al.Frequency of a deletion polymorphism in the gene for angiotensin converting enzyme is increased in African-Americans with hypertension.Am J Hypertens，1994，7：759-762.
10，Fornage M，Anos C，Kardia s，et al.Variation in the region of the angiotensin-converting enzyme gene influences interindividual differences in blood pressure levels in young white males.Circulation，1998，97：1773-1779.
收稿：1999-09-29
修回：1999-11-18, 百拇医药