异基因供者淋巴细胞输注抗白血病作用研究进展
作者：张立成 郭坤元
单位：解放军第88医院血液肿瘤科 山东泰安271000
关键词：
中国综合临床001202 供者淋巴细胞输注(DLI)目前已成为骨髓移植后复发患者的重要治疗手段，DLI在受者体内所介导的这种抗白血病作用，与输入的异基因免疫活性细胞诱导的过继性免疫反应有关，现就这一领域的研究加以综述。
1 供者淋巴细胞输注(DLI)的临床意义
自Kolb[1]1990年报告首例异基因骨髓移植(allo-BMT)后复发慢性髓性白血病(CML)患者，采用供者白细胞输注诱导再次细胞学完全缓解后，人们对DLI介导的过继性免疫反应产生了极大兴趣。临床单独应用供者淋巴细胞输注诱导抗白血病作用，或同时结合干扰素治疗细胞遗传学甚至血液学复发的CML，部分病例可获再次缓解而长期生存。利用DLI治疗allo-BMT后复发的霍奇金病、多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病等，以及DLI配合自体造血干细胞移植或大剂量化疗，诱导抗淋巴瘤或抗白血病作用，均已获得满意的疗效[2～4]。最近，欧洲移植中心总结了135例患者应用DLI治疗allo-BMT后复发的疗效，其中73%CML移植后复发患者重新缓解，29%AML患者再次缓解； Collins等也报道了北美25个移植小组140例患者，异基因移植后复发应用DLI治疗的结果，60%CML患者可获再次缓解，急性单核细胞性白血病(AML)及急性淋巴细胞性白血病的再缓解率也分别达到15.4%、18.25%。对于DLI治疗反应差的患者，采用白细胞介素-2激活后的供者淋巴细胞输注，或者增加淋巴细胞的数量以及输注次数，同样可以达到理想的效果[5]。目前，allo-BMT仍存在比较高的复发率，且复发后治疗颇为棘手，二次移植成功率又很低。DLI诱导的抗白血病作用，能够逆转allo-BMT后复发，表明异基因淋巴细胞能够消除逃逸放、化疗的白血病细胞，不失为预防及治疗复发的重要手段之一[6]。
, 百拇医药
2 供者淋巴细胞输注治疗白血病的可能机制
DLI介导的过继性免疫反应，能够治疗白血病复发已被人们普遍认识，但其详细机制尚不甚明了。目前一般认为DLI可能通过以下三种方式发挥抗白血病作用[7，8]：①细胞毒淋巴细胞(CD+4，CD+8，NK)释放穿孔素直接杀伤白血病细胞；②Fas/FasL途径诱导细胞凋亡(CD+4，CD+8)；③细胞因子介导白血病细胞死亡或生长抑制(主要为CD+4)。除T、NK以及LAK等效应细胞所发挥的作用外，主、次要组织相容性抗原的不合对于诱导异源性免疫反应至关重要。异基因T淋巴细胞需要通过识别专职抗原递呈细胞(APC)加工递呈，或白血病细胞自身直接加工递呈的白血病细胞特异性抗原才能发挥作用，而白血病细胞这种刺激异源性T细胞反应的能力与MHCⅡ类分子的表达密切相关。此外，来源于Ph+CML患者的Ph+树突状细胞以及CML患者的单核细胞也同样具备APC功能，能够诱导特异性的抗CML白血病反应[9]。目前已发现具有刺激抗白血病反应潜能的白血病抗原大致来源于三个方面：①广泛分布的mHA, HA-3，HA-4，HA-6，H-Y等；②具组织特异性的，如HA-1，HA-2(淋巴或髓系)，CD19(淋巴系)，CD45(淋巴或髓系)；③具白血病特异性的，如BCR-ABLp210，p190(CML)，PML/RARA(AML M3)，t4：11(ALL)，ras突变(髓系白血病)以及许多白血病表达增高的正常蛋白等。除白血病细胞特异性抗原的刺激外，异基因淋巴细胞中的CD+4细胞可以分泌多种细胞因子(IL-2、IL-12等)，增强NK，CD+8 T细胞的细胞毒活性，而干扰素-γ，肿瘤坏死因子-α等细胞因子，不但可以直接杀伤白血病细胞，而且还能够通过上调白血病细胞表面MHC分子，某些粘附分子以及Fas抗原的表达，使得靶细胞对T细胞更为敏感[10]，对DLI所介导的免疫反应具有放大作用。此外许多白血病细胞还表达Fas抗原，肿瘤坏死因子-α可以通过Fas途径优先诱导白血病细胞凋亡，而正常CD+34细胞由于缺乏Fas抗原的表达可以免受损害。
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3 供者淋巴细胞输注面临的问题
异基因DLI治疗白血病复发，已经取得令人满意的结果，但并非所有白血病患者对DLI有反应，BMT后的统计资料及DLI治疗移植后复发的最新结果表明，白血病细胞对DLI的敏感性存在很大的差别，髓系白血病更为敏感，而淋巴母细胞性白血病反应最差，许多因素可以影响到白血病细胞对DLI的敏感性，如疾病的状态，白血病细胞的免疫原性以及病程等。且DLI同样面临移植物抗宿主反应的发生甚至致命的危险，对正常造血干细胞也存在毒性，可以导致全血细胞减少，一过性的骨髓抑制，甚至骨髓衰竭等[11]。欧洲移植中心报道该疗法移植物抗宿主反应发生率为41%，北美25个移植小组报告的发生率则高达60%。最近，Dana-farber癌症研究所，用不同剂量供者CD+4细胞输注，治疗40例allo-BMT后复发的患者，输注的剂量分别为0.3×108CD+4 /kg、>1.0×108CD+4/kg，二组移植物抗宿主反应的发生率也分别达到32%、55%。因此，如何避免移植物抗宿主反应的发生而又不损害异源性T细胞介导的抗白血病作用的方法，成为解决问题的关键。
, 百拇医药
总之，异基因DLI诱导的抗白血病作用，为逆转或预防allo-BMT后的白血病复发开辟了一条新的生物治疗途径。如何最大程度地避免移植物抗宿主反应的发生，特异性地增强异基因T细胞的抗白血病作用，以及淋巴细胞输注的剂量及时机尚需进一步探讨。TK自杀基因转染供者淋巴细胞输注，配合丙氧鸟苷治疗，可以最大限度地发挥抗白血病作用，而控制移植物抗宿主反应的发生[12]。采用TCRVβ抗体体外扩增白血病特异性T细胞，过继性输注能够选择性增强DLI的抗白血病作用。异基因供者淋巴细胞经适当剂量γ照射后输注，也可以有效地预防移植物抗宿主反应的发生，而保留或放大抗白血病作用。特别是异基因DLI应用于自体BMT后也有一定疗效[3，4]，这将使DLI具有更广阔的应用前景，成为治愈白血病的重要辅助治疗手段。
参考文献
1，Kolb HJ,Mittermueller J,Clemm CH,et al .Donor leukocyte
, http://www.100md.com
transfusion for treatment of recurrent chronic myelogenous leukemia in bone marrow transplant patients.Blood,1990,76(12):2462
2，Van-Rhee F,Kolb HJ.Donor leukocyte transfusion for leukemic
relaapse.Curr Clin Hematol,1995,2(6):423-430
3，Williamson LM,Warwick RM.Transfusion-associated graft-
versus-host disease and its prevention.Blood Rev,1995,9(4):258
, 百拇医药
4，Guillaume T,Rubinstein DB,Symann M.Immune reconstitution and immunotherapy after autologous hematopoietic stem cell transplantation.Blood,1998,92(5):1471-1490
5，Slavin S,Naparstek E,Nagler A,et al.Allogeneic cell therapy
for relapsed leukemia following allogeneic bone marrow transplantation with donor peripheral blood lymphocytes.Exp Hematol,1995,23(14):1553-1562
6，Mehta J,Powles R,Treleaven J,et al.Outcome of acute
, 百拇医药
leukemia relapsing after bone marrow transplantation:utility of second transplants and adoptive immunotherapy.Bone Marrow Transplant,1997,19(7):709-719
7，Aizawa S,Kamisaku H,Sado T.An MHC-compatible allogeneic bone marrow donor with a distinct role of T cell subsets in graft-versus-leukemia effect and lethal graft-versus-host disease.Bone Marrow Transplant,1995,16(4):603
8，Barrett AJ.Mechanisms of the graft-versus-leukemia reaction.Stem Cells,1997,15(4):252
, 百拇医药
9，Choudhury A,Gajewski JL,Liang JL,et al.Use of leukemic
dendritic cells for the generation of antileukemic cellular cytotoxicity against Philadelphia-chromosome positive chronic myelogenous leukemia.Blood,1997,89(4):1133-1142
10，Munker R,Lubbert M,Yonehara S,et al.Expression of the fas antigen on primary human leukemia cells.Ann Hematol,1995,70(1):15
11，Oshima Y,Takahashi S,Nagayama H,et al.Fatal GVHD
demonstrating an involvement of respiratory muscle following donor leukocyte transfusion.Bone Marrow Transplant,1997,19(7):737
12，Bonini C,Ferrari G,Verzeletti S,et al.HSV-TK gene transfer into donor lymphocytes for control of allogeneic graft-versus-leukemia.Science,1997,276(5319):1719-1724, 百拇医药
单位：解放军第88医院血液肿瘤科 山东泰安271000
关键词：
中国综合临床001202 供者淋巴细胞输注(DLI)目前已成为骨髓移植后复发患者的重要治疗手段，DLI在受者体内所介导的这种抗白血病作用，与输入的异基因免疫活性细胞诱导的过继性免疫反应有关，现就这一领域的研究加以综述。
1 供者淋巴细胞输注(DLI)的临床意义
自Kolb[1]1990年报告首例异基因骨髓移植(allo-BMT)后复发慢性髓性白血病(CML)患者，采用供者白细胞输注诱导再次细胞学完全缓解后，人们对DLI介导的过继性免疫反应产生了极大兴趣。临床单独应用供者淋巴细胞输注诱导抗白血病作用，或同时结合干扰素治疗细胞遗传学甚至血液学复发的CML，部分病例可获再次缓解而长期生存。利用DLI治疗allo-BMT后复发的霍奇金病、多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病等，以及DLI配合自体造血干细胞移植或大剂量化疗，诱导抗淋巴瘤或抗白血病作用，均已获得满意的疗效[2～4]。最近，欧洲移植中心总结了135例患者应用DLI治疗allo-BMT后复发的疗效，其中73%CML移植后复发患者重新缓解，29%AML患者再次缓解； Collins等也报道了北美25个移植小组140例患者，异基因移植后复发应用DLI治疗的结果，60%CML患者可获再次缓解，急性单核细胞性白血病(AML)及急性淋巴细胞性白血病的再缓解率也分别达到15.4%、18.25%。对于DLI治疗反应差的患者，采用白细胞介素-2激活后的供者淋巴细胞输注，或者增加淋巴细胞的数量以及输注次数，同样可以达到理想的效果[5]。目前，allo-BMT仍存在比较高的复发率，且复发后治疗颇为棘手，二次移植成功率又很低。DLI诱导的抗白血病作用，能够逆转allo-BMT后复发，表明异基因淋巴细胞能够消除逃逸放、化疗的白血病细胞，不失为预防及治疗复发的重要手段之一[6]。
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2 供者淋巴细胞输注治疗白血病的可能机制
DLI介导的过继性免疫反应，能够治疗白血病复发已被人们普遍认识，但其详细机制尚不甚明了。目前一般认为DLI可能通过以下三种方式发挥抗白血病作用[7，8]：①细胞毒淋巴细胞(CD+4，CD+8，NK)释放穿孔素直接杀伤白血病细胞；②Fas/FasL途径诱导细胞凋亡(CD+4，CD+8)；③细胞因子介导白血病细胞死亡或生长抑制(主要为CD+4)。除T、NK以及LAK等效应细胞所发挥的作用外，主、次要组织相容性抗原的不合对于诱导异源性免疫反应至关重要。异基因T淋巴细胞需要通过识别专职抗原递呈细胞(APC)加工递呈，或白血病细胞自身直接加工递呈的白血病细胞特异性抗原才能发挥作用，而白血病细胞这种刺激异源性T细胞反应的能力与MHCⅡ类分子的表达密切相关。此外，来源于Ph+CML患者的Ph+树突状细胞以及CML患者的单核细胞也同样具备APC功能，能够诱导特异性的抗CML白血病反应[9]。目前已发现具有刺激抗白血病反应潜能的白血病抗原大致来源于三个方面：①广泛分布的mHA, HA-3，HA-4，HA-6，H-Y等；②具组织特异性的，如HA-1，HA-2(淋巴或髓系)，CD19(淋巴系)，CD45(淋巴或髓系)；③具白血病特异性的，如BCR-ABLp210，p190(CML)，PML/RARA(AML M3)，t4：11(ALL)，ras突变(髓系白血病)以及许多白血病表达增高的正常蛋白等。除白血病细胞特异性抗原的刺激外，异基因淋巴细胞中的CD+4细胞可以分泌多种细胞因子(IL-2、IL-12等)，增强NK，CD+8 T细胞的细胞毒活性，而干扰素-γ，肿瘤坏死因子-α等细胞因子，不但可以直接杀伤白血病细胞，而且还能够通过上调白血病细胞表面MHC分子，某些粘附分子以及Fas抗原的表达，使得靶细胞对T细胞更为敏感[10]，对DLI所介导的免疫反应具有放大作用。此外许多白血病细胞还表达Fas抗原，肿瘤坏死因子-α可以通过Fas途径优先诱导白血病细胞凋亡，而正常CD+34细胞由于缺乏Fas抗原的表达可以免受损害。
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3 供者淋巴细胞输注面临的问题
异基因DLI治疗白血病复发，已经取得令人满意的结果，但并非所有白血病患者对DLI有反应，BMT后的统计资料及DLI治疗移植后复发的最新结果表明，白血病细胞对DLI的敏感性存在很大的差别，髓系白血病更为敏感，而淋巴母细胞性白血病反应最差，许多因素可以影响到白血病细胞对DLI的敏感性，如疾病的状态，白血病细胞的免疫原性以及病程等。且DLI同样面临移植物抗宿主反应的发生甚至致命的危险，对正常造血干细胞也存在毒性，可以导致全血细胞减少，一过性的骨髓抑制，甚至骨髓衰竭等[11]。欧洲移植中心报道该疗法移植物抗宿主反应发生率为41%，北美25个移植小组报告的发生率则高达60%。最近，Dana-farber癌症研究所，用不同剂量供者CD+4细胞输注，治疗40例allo-BMT后复发的患者，输注的剂量分别为0.3×108CD+4 /kg、>1.0×108CD+4/kg，二组移植物抗宿主反应的发生率也分别达到32%、55%。因此，如何避免移植物抗宿主反应的发生而又不损害异源性T细胞介导的抗白血病作用的方法，成为解决问题的关键。
, 百拇医药
总之，异基因DLI诱导的抗白血病作用，为逆转或预防allo-BMT后的白血病复发开辟了一条新的生物治疗途径。如何最大程度地避免移植物抗宿主反应的发生，特异性地增强异基因T细胞的抗白血病作用，以及淋巴细胞输注的剂量及时机尚需进一步探讨。TK自杀基因转染供者淋巴细胞输注，配合丙氧鸟苷治疗，可以最大限度地发挥抗白血病作用，而控制移植物抗宿主反应的发生[12]。采用TCRVβ抗体体外扩增白血病特异性T细胞，过继性输注能够选择性增强DLI的抗白血病作用。异基因供者淋巴细胞经适当剂量γ照射后输注，也可以有效地预防移植物抗宿主反应的发生，而保留或放大抗白血病作用。特别是异基因DLI应用于自体BMT后也有一定疗效[3，4]，这将使DLI具有更广阔的应用前景，成为治愈白血病的重要辅助治疗手段。
参考文献
1，Kolb HJ,Mittermueller J,Clemm CH,et al .Donor leukocyte
, http://www.100md.com
transfusion for treatment of recurrent chronic myelogenous leukemia in bone marrow transplant patients.Blood,1990,76(12):2462
2，Van-Rhee F,Kolb HJ.Donor leukocyte transfusion for leukemic
relaapse.Curr Clin Hematol,1995,2(6):423-430
3，Williamson LM,Warwick RM.Transfusion-associated graft-
versus-host disease and its prevention.Blood Rev,1995,9(4):258
, 百拇医药
4，Guillaume T,Rubinstein DB,Symann M.Immune reconstitution and immunotherapy after autologous hematopoietic stem cell transplantation.Blood,1998,92(5):1471-1490
5，Slavin S,Naparstek E,Nagler A,et al.Allogeneic cell therapy
for relapsed leukemia following allogeneic bone marrow transplantation with donor peripheral blood lymphocytes.Exp Hematol,1995,23(14):1553-1562
6，Mehta J,Powles R,Treleaven J,et al.Outcome of acute
, 百拇医药
leukemia relapsing after bone marrow transplantation:utility of second transplants and adoptive immunotherapy.Bone Marrow Transplant,1997,19(7):709-719
7，Aizawa S,Kamisaku H,Sado T.An MHC-compatible allogeneic bone marrow donor with a distinct role of T cell subsets in graft-versus-leukemia effect and lethal graft-versus-host disease.Bone Marrow Transplant,1995,16(4):603
8，Barrett AJ.Mechanisms of the graft-versus-leukemia reaction.Stem Cells,1997,15(4):252
, 百拇医药
9，Choudhury A,Gajewski JL,Liang JL,et al.Use of leukemic
dendritic cells for the generation of antileukemic cellular cytotoxicity against Philadelphia-chromosome positive chronic myelogenous leukemia.Blood,1997,89(4):1133-1142
10，Munker R,Lubbert M,Yonehara S,et al.Expression of the fas antigen on primary human leukemia cells.Ann Hematol,1995,70(1):15
11，Oshima Y,Takahashi S,Nagayama H,et al.Fatal GVHD
demonstrating an involvement of respiratory muscle following donor leukocyte transfusion.Bone Marrow Transplant,1997,19(7):737
12，Bonini C,Ferrari G,Verzeletti S,et al.HSV-TK gene transfer into donor lymphocytes for control of allogeneic graft-versus-leukemia.Science,1997,276(5319):1719-1724, 百拇医药