排石合剂质量标准研究
作者：戈升荣 安富荣 袁静 施安国 王平全
单位：上海第二医科大学附属仁济医院临床药学研究室 200001
关键词：排石合剂；总黄酮；比色法；金钱草
中草药001213
摘 要 排石合剂为我院新开发的一种制剂，以金钱草为君药辅以怀牛 膝和车前子等组成。可用于治疗尿路感染、血尿和泌尿系统结石等疾病。建立本品的质量标 准为质控提供依据。处方中的黄酮和皂苷用定性方法鉴别，金钱草和怀牛膝用TLC进行鉴别 ，其中的总黄酮按《中华人民共和国药典》1995年版所载比色法测定实验表明在0.008 ～0.048 mg/mL范围内浓度与吸收度呈良好的线形关系，其低、中、高浓度的加样回收率分 别为100.39%、102.36%和101.17%，本方法简便、快速且重现性好。
, http://www.100md.com Studies on the Quality Standard of Pai shi Mixture
(A New Herbal Preparation Developed by Our Hospital)
Ge Shengrong An Furong Yuan Jing Shi Angu o and Wang Pingquan
(Department of Clinical Phamacy of Renji Hospital, Shanghai Second University of Medical Seiences Shanghai 200001)
Abstract Pai shi mixture is a newly developed herbal prepara tion composed of Glechoma longituba (Nakai) Kupr. as the main compo nent supplement ed by Achyranthes bidentata, Plantago asiatica and several other minor ingredients. It was proposed for the treatment of urinary infection, hem at uria and urinary calculi. The object of the present study is to establish a sta n dard for the quality control of the product. The presence of flavonoids and sap o nins were varified by specific qualitative identification. G. longitub a and A. bidentata were distinguishing by TLC. Content o f total flavonoids was determined by colorimetry as described in the 1995 edition of Chinese Pharm acopoeia. The plot of concentration against absorption gave a straight line ([ W TBX〗r=0.999 6) over the range of 0.008～0.048 mg/mL. The averag e recovery of low, middle and high concentrations were 100.39%, 102.36% and 10 1.17% respect ively. The method proved to be simple, rapid and reproducible.
, 百拇医药
Key words Pai shi Mixture total flavonoid colorimetry Glechoma longituba (Nakai) Kupr.
排石合剂是我院的一种自制制剂，由金钱草、怀牛膝、车前子等中药组成，具有利尿排石、 清热消炎、凉血止血等功效，用于治疗泌尿系统结石、尿路感染、血尿等疾病，疗效很好。 为了制定控制内在质量的标准，我们根据处方中药物的性质，对其中所含的黄酮类、皂苷类 成分及 金钱草、怀牛膝等药物分别做了鉴别试验，并进行了总黄酮的含量测定，从而为质量标准的 制定提供了依据。
1 仪器与试药
UV-210PC 型紫外分光光度计(日本岛津)；紫外光灯(上海顾村电器厂)；硅胶G板(青岛海洋 化工厂)；聚酰胺薄膜(台州市路桥四青生化材料厂)；芦丁、齐墩果酸对照品(中国药品生物 制品检定所)；排石合剂及药材原料由我院制剂室提供。
, http://www.100md.com
2 鉴别试验
2.1 皂苷类成分
2.1.1 取本品适量，置于具塞试管中，密塞，强力振摇，产生大量泡沫并且在20 min内 不明显减少。
2.1.2 取本品10 mL于具塞试管中，加无水乙醚10 mL提取2 次，合并乙醚层，减压蒸干 ，加少许冰醋酸溶解，转移至试管中，沿管壁缓缓加入硫酸适量，可见冰醋酸层为红色，中 间有红褐色环，硫酸层有黄绿色荧光。
2.2 黄酮类成分：取本品15 mL于具塞试管中，用甲醇约10 mL提取，离心，取上清液于分 液漏斗中，用适量乙酸乙酯萃取2 次，合并乙酸乙酯层，减压蒸干，用无水乙醇约5 mL溶解 ，取2 mL，加镁粉少许、盐酸数滴，可见有大量气泡产生，溶液渐变红色，微热，溶液呈透 明的红棕色。
2.3 金钱草的TLC[1]：取本品10 mL，用乙酸乙酯10 mL提取2 次，合并乙酸乙酯 层 ，减压浓缩至3 mL作为供试品溶液。取金钱草5 g，加100 mL水煎煮，煎煮液减压浓缩，加 乙酸乙酯适量提取2 次，合并乙酸乙酯层，减压浓缩至3 mL作为阳性对照品溶液，同时制备 不含金钱草的阴性对照液。吸取上述溶液各5 μL，分别点于聚酰胺薄膜上，以水-乙醇- 乙酰丙酮(4∶2∶1)展开后，喷以2% AlCl3乙醇液显色后，于110 ℃烘5 min，于紫外光灯 下观察。
, 百拇医药
2.4 怀牛膝的TLC[2]：取本品20 mL，用乙醚(25，20，20 mL)提取3 次，水层 再 用乙酸乙酯(15，10，10 mL)提取3 次，水层再用水饱和的正丁醇(15，10 mL)提取2 次，合 并正丁醇层，减压蒸干，残渣加乙醇10 mL溶解，加盐酸1 mL，加热回流1 h，浓缩至约5 mL ， 加水10 mL，用石油醚(60 ℃～90 ℃)20 mL振摇提取，蒸干，残渣加乙醇1 mL溶解，作为供 试品溶液。另取齐墩果酸对照品加无水乙醇配成每毫升含1 mg的溶液作为对照品溶液。同时 制备怀牛膝的阳性对照液和不含怀牛膝的阴性对照液。分别吸取对照溶液、供试品 溶液适量点于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇(40∶1)为展开剂展开后，喷以5%磷钼酸试液显 色后于105 ℃烘5 min，除阴性对照液外其它试液均可见在同一位置上显蓝色斑点。
3 总黄酮的含量测定[3]
3.1 测定波长的选择：精密称取芦丁对照品5 mg于25 mL容量瓶中，用甲醇稀释到刻度(20 0 μg/mL)。精密吸取对照品溶液4 mL于25 mL容量瓶中，加水至6 mL，加5%的NaNO2溶液1 mL，摇匀，放置6 min；加10%的AlCl3溶液1 mL，摇匀，放置6 min；再加5%的NaOH溶液1 0 mL，最后用水稀释至刻度，摇匀，放置15 min后于波长350～600 nm间扫描，可见在510 n m处有最大吸收。
, http://www.100md.com
3.2 标准曲线的制备：精密吸取对照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL于2 5 mL容量瓶中，各加水至6 mL，以下按3.1项下自“加5%的NaNO2溶液1 mL……”起处理 ， 以第一份为空白，在510 nm处测定吸光度A。得回归曲线为C=0.081 55A+2.378×10-3(r=0.999 6)。 。
3.3 样品加样回收率试验：精密吸取已知含量的样品溶液适量于 10 mL容量瓶中，精密加 入对 照品溶液，用甲醇稀释到刻度，涡旋混匀，转移至离心管中离心，精吸上清液5 mL于25 mL 容量瓶中，加水至6 mL，以下按3.1项下自“加5%的NaNO2溶液1 mL……”起处理，测定 其 吸光度，由回归方程求出总黄酮的含量，计算回收率，结果低、中、高三个浓度的加样回收 率分别为100.39±2.88，102.36±0.99，101.17±0.36(n=3)。
, http://www.100md.com
3.4 样品含量测定：精密吸取经一定稀释的本品适量置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释到刻 度，涡旋混匀，转移至离心管中离心，精吸上清液4 mL于25 mL容量瓶中，加水至6 mL，以 下按3.1项下自“加5%的NaNO2溶液1 mL……”起处理，测定其吸光度，由回归方程求出 总黄酮的含量(相当于含芦丁的量)，结果见表1。
4 与质量有关的项目测定
按中国药典1995版检测，结果见表1。
表1 样品测定结果 批号
981201
990101
990601
相对密度
, 百拇医药
1.17
1.17
1.12
pH测定
4.61
4.82
4.54
总黄酮含量
8.92±0.04
11.88±0.01
8.60±0.18
注：总黄酮系1 mL合剂中黄酮(相当于芦丁的量)的毫克数。
, 百拇医药
5 讨论
5.1 排石合剂中成分复杂，干扰因素多。本实验做过排石合剂、金钱草水煎液及 除去金钱草外的其他几味中药水煎液经甲醇提取后，同上所述进行一系列的显色反应后的扫 描曲线，发现前两者的扫描曲线相似，而后者在相应位置上却没有吸收峰，所以用本法的含 量基本可以反映君药金钱草的质量。
5.2 本实验参考中华人民共和国药典，采用比色法测定处方中总黄酮的含量，经显色稳定 性考察发现溶液的吸光度在15～60 min内基本保持不变，因此建议测定应在该时间段内完成 。
5.3 上述试验结果表明，排石合剂中可定性的检出皂苷类、黄酮类、金钱草、怀牛膝等。 依据上述结果，建议标准中规定，相对密度应不小于1.08，pH值在4.0～5.0之间， 总黄酮含量以无水芦丁(C27H30O16)计，每1 mL应不少于5 mg。
, 百拇医药
Address： Ge Shengrong, Affiliated Renji Hsopital, Shanghai Secon d University of Medical Sciences, Shanghai
戈升荣 女，1998年7毕业于上海医科大学，获药剂学硕士学位。现在仁济医院临床药学研 究室工作，从事中药制剂的研究。至今已发表文章6 篇。
参 考 文 献
1，杨晓穗.常用中药材真伪理化鉴别.北京：中国医药科技出版社，1994：380
2，中华人民共和国药典.一部.广州：广州科技出版社，1995：58
3，中华人民共和国药典.一部.广州：广州科技出版社，1995：604
4，郑芙蓉，陈华庭，胡卫东.时珍国药研究，1997，8(6)：516
(1999-12-14收稿), 百拇医药
单位：上海第二医科大学附属仁济医院临床药学研究室 200001
关键词：排石合剂；总黄酮；比色法；金钱草
中草药001213
摘 要 排石合剂为我院新开发的一种制剂，以金钱草为君药辅以怀牛 膝和车前子等组成。可用于治疗尿路感染、血尿和泌尿系统结石等疾病。建立本品的质量标 准为质控提供依据。处方中的黄酮和皂苷用定性方法鉴别，金钱草和怀牛膝用TLC进行鉴别 ，其中的总黄酮按《中华人民共和国药典》1995年版所载比色法测定实验表明在0.008 ～0.048 mg/mL范围内浓度与吸收度呈良好的线形关系，其低、中、高浓度的加样回收率分 别为100.39%、102.36%和101.17%，本方法简便、快速且重现性好。
, http://www.100md.com Studies on the Quality Standard of Pai shi Mixture
(A New Herbal Preparation Developed by Our Hospital)
Ge Shengrong An Furong Yuan Jing Shi Angu o and Wang Pingquan
(Department of Clinical Phamacy of Renji Hospital, Shanghai Second University of Medical Seiences Shanghai 200001)
Abstract Pai shi mixture is a newly developed herbal prepara tion composed of Glechoma longituba (Nakai) Kupr. as the main compo nent supplement ed by Achyranthes bidentata, Plantago asiatica and several other minor ingredients. It was proposed for the treatment of urinary infection, hem at uria and urinary calculi. The object of the present study is to establish a sta n dard for the quality control of the product. The presence of flavonoids and sap o nins were varified by specific qualitative identification. G. longitub a and A. bidentata were distinguishing by TLC. Content o f total flavonoids was determined by colorimetry as described in the 1995 edition of Chinese Pharm acopoeia. The plot of concentration against absorption gave a straight line ([ W TBX〗r=0.999 6) over the range of 0.008～0.048 mg/mL. The averag e recovery of low, middle and high concentrations were 100.39%, 102.36% and 10 1.17% respect ively. The method proved to be simple, rapid and reproducible.
, 百拇医药
Key words Pai shi Mixture total flavonoid colorimetry Glechoma longituba (Nakai) Kupr.
排石合剂是我院的一种自制制剂，由金钱草、怀牛膝、车前子等中药组成，具有利尿排石、 清热消炎、凉血止血等功效，用于治疗泌尿系统结石、尿路感染、血尿等疾病，疗效很好。 为了制定控制内在质量的标准，我们根据处方中药物的性质，对其中所含的黄酮类、皂苷类 成分及 金钱草、怀牛膝等药物分别做了鉴别试验，并进行了总黄酮的含量测定，从而为质量标准的 制定提供了依据。
1 仪器与试药
UV-210PC 型紫外分光光度计(日本岛津)；紫外光灯(上海顾村电器厂)；硅胶G板(青岛海洋 化工厂)；聚酰胺薄膜(台州市路桥四青生化材料厂)；芦丁、齐墩果酸对照品(中国药品生物 制品检定所)；排石合剂及药材原料由我院制剂室提供。
, http://www.100md.com
2 鉴别试验
2.1 皂苷类成分
2.1.1 取本品适量，置于具塞试管中，密塞，强力振摇，产生大量泡沫并且在20 min内 不明显减少。
2.1.2 取本品10 mL于具塞试管中，加无水乙醚10 mL提取2 次，合并乙醚层，减压蒸干 ，加少许冰醋酸溶解，转移至试管中，沿管壁缓缓加入硫酸适量，可见冰醋酸层为红色，中 间有红褐色环，硫酸层有黄绿色荧光。
2.2 黄酮类成分：取本品15 mL于具塞试管中，用甲醇约10 mL提取，离心，取上清液于分 液漏斗中，用适量乙酸乙酯萃取2 次，合并乙酸乙酯层，减压蒸干，用无水乙醇约5 mL溶解 ，取2 mL，加镁粉少许、盐酸数滴，可见有大量气泡产生，溶液渐变红色，微热，溶液呈透 明的红棕色。
2.3 金钱草的TLC[1]：取本品10 mL，用乙酸乙酯10 mL提取2 次，合并乙酸乙酯 层 ，减压浓缩至3 mL作为供试品溶液。取金钱草5 g，加100 mL水煎煮，煎煮液减压浓缩，加 乙酸乙酯适量提取2 次，合并乙酸乙酯层，减压浓缩至3 mL作为阳性对照品溶液，同时制备 不含金钱草的阴性对照液。吸取上述溶液各5 μL，分别点于聚酰胺薄膜上，以水-乙醇- 乙酰丙酮(4∶2∶1)展开后，喷以2% AlCl3乙醇液显色后，于110 ℃烘5 min，于紫外光灯 下观察。
, 百拇医药
2.4 怀牛膝的TLC[2]：取本品20 mL，用乙醚(25，20，20 mL)提取3 次，水层 再 用乙酸乙酯(15，10，10 mL)提取3 次，水层再用水饱和的正丁醇(15，10 mL)提取2 次，合 并正丁醇层，减压蒸干，残渣加乙醇10 mL溶解，加盐酸1 mL，加热回流1 h，浓缩至约5 mL ， 加水10 mL，用石油醚(60 ℃～90 ℃)20 mL振摇提取，蒸干，残渣加乙醇1 mL溶解，作为供 试品溶液。另取齐墩果酸对照品加无水乙醇配成每毫升含1 mg的溶液作为对照品溶液。同时 制备怀牛膝的阳性对照液和不含怀牛膝的阴性对照液。分别吸取对照溶液、供试品 溶液适量点于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇(40∶1)为展开剂展开后，喷以5%磷钼酸试液显 色后于105 ℃烘5 min，除阴性对照液外其它试液均可见在同一位置上显蓝色斑点。
3 总黄酮的含量测定[3]
3.1 测定波长的选择：精密称取芦丁对照品5 mg于25 mL容量瓶中，用甲醇稀释到刻度(20 0 μg/mL)。精密吸取对照品溶液4 mL于25 mL容量瓶中，加水至6 mL，加5%的NaNO2溶液1 mL，摇匀，放置6 min；加10%的AlCl3溶液1 mL，摇匀，放置6 min；再加5%的NaOH溶液1 0 mL，最后用水稀释至刻度，摇匀，放置15 min后于波长350～600 nm间扫描，可见在510 n m处有最大吸收。
, http://www.100md.com
3.2 标准曲线的制备：精密吸取对照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL于2 5 mL容量瓶中，各加水至6 mL，以下按3.1项下自“加5%的NaNO2溶液1 mL……”起处理 ， 以第一份为空白，在510 nm处测定吸光度A。得回归曲线为C=0.081 55A+2.378×10-3(r=0.999 6)。 。
3.3 样品加样回收率试验：精密吸取已知含量的样品溶液适量于 10 mL容量瓶中，精密加 入对 照品溶液，用甲醇稀释到刻度，涡旋混匀，转移至离心管中离心，精吸上清液5 mL于25 mL 容量瓶中，加水至6 mL，以下按3.1项下自“加5%的NaNO2溶液1 mL……”起处理，测定 其 吸光度，由回归方程求出总黄酮的含量，计算回收率，结果低、中、高三个浓度的加样回收 率分别为100.39±2.88，102.36±0.99，101.17±0.36(n=3)。
, http://www.100md.com
3.4 样品含量测定：精密吸取经一定稀释的本品适量置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释到刻 度，涡旋混匀，转移至离心管中离心，精吸上清液4 mL于25 mL容量瓶中，加水至6 mL，以 下按3.1项下自“加5%的NaNO2溶液1 mL……”起处理，测定其吸光度，由回归方程求出 总黄酮的含量(相当于含芦丁的量)，结果见表1。
4 与质量有关的项目测定
按中国药典1995版检测，结果见表1。
表1 样品测定结果 批号
981201
990101
990601
相对密度
, 百拇医药
1.17
1.17
1.12
pH测定
4.61
4.82
4.54
总黄酮含量
8.92±0.04
11.88±0.01
8.60±0.18
注：总黄酮系1 mL合剂中黄酮(相当于芦丁的量)的毫克数。
, 百拇医药
5 讨论
5.1 排石合剂中成分复杂，干扰因素多。本实验做过排石合剂、金钱草水煎液及 除去金钱草外的其他几味中药水煎液经甲醇提取后，同上所述进行一系列的显色反应后的扫 描曲线，发现前两者的扫描曲线相似，而后者在相应位置上却没有吸收峰，所以用本法的含 量基本可以反映君药金钱草的质量。
5.2 本实验参考中华人民共和国药典，采用比色法测定处方中总黄酮的含量，经显色稳定 性考察发现溶液的吸光度在15～60 min内基本保持不变，因此建议测定应在该时间段内完成 。
5.3 上述试验结果表明，排石合剂中可定性的检出皂苷类、黄酮类、金钱草、怀牛膝等。 依据上述结果，建议标准中规定，相对密度应不小于1.08，pH值在4.0～5.0之间， 总黄酮含量以无水芦丁(C27H30O16)计，每1 mL应不少于5 mg。
, 百拇医药
Address： Ge Shengrong, Affiliated Renji Hsopital, Shanghai Secon d University of Medical Sciences, Shanghai
戈升荣 女，1998年7毕业于上海医科大学，获药剂学硕士学位。现在仁济医院临床药学研 究室工作，从事中药制剂的研究。至今已发表文章6 篇。
参 考 文 献
1，杨晓穗.常用中药材真伪理化鉴别.北京：中国医药科技出版社，1994：380
2，中华人民共和国药典.一部.广州：广州科技出版社，1995：58
3，中华人民共和国药典.一部.广州：广州科技出版社，1995：604
4，郑芙蓉，陈华庭，胡卫东.时珍国药研究，1997，8(6)：516
(1999-12-14收稿), 百拇医药