山莨菪碱对家兔全脑缺血再灌注脑组织TXA2和PGI2代谢的影响
作者：周代星 邓普珍
单位：华中科技大学同济医 学院附属医院急诊科，武汉 430030
关键词：山莨菪碱；完全性脑缺血再灌注；血栓素A2；前列环素
中国急救医学001203 [摘 要]目的 探讨山莨菪碱对家兔全脑缺血再灌注期间脑组织TXA2和P GI2代谢的影响。方法 40只家兔随机分为假手术组、缺血组、缺 血再灌注组、治疗组，采用“闭塞双侧颈总动脉和椎动脉+体循环低血压法”建立全脑缺血 再灌注损伤模型，缺血20 min，再灌注2 h，通过放免法测定脑组织TXB2、6-keto-PGF 1α含量及其比值。结果 缺血组脑组织TXB2、6-keto-PGF 1α含量明显高于假手术组(P<0.01，P<0.05)；再灌注组脑组织TXB2、TXB 2/6-ke to-PGF1α比值明显高于缺血组(P<0.01)；而治疗组脑组织TXB2及TXB2/6- keto -PGF1α比值较缺血再灌注组显著降低(P<0.01)。结论 脑 缺血再灌注损伤与TXA2/PGI2比例失调有关；山莨菪碱具有抑制TXA2合成，调节TXA 2-PGI2平衡的作用。
, 百拇医药
[中图分类号]R 453；R 743.3 [文献标识码]A [文章编号]1002-1949(2000)12-0697-02[ HT7”
Effect of anisodamine on the metabolism of thromboxane A2,prostacyclin of cortex after complete cerebral ischemia and reperfusion in the rabbit
ZHOU Dai-xing,DENG Pu-zhen.
(Emergency Department of Tongji Hospital,Tongji Medi cal College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China)
, 百拇医药
[Abstract]Objective To study effect of anisodamine on t he metabolism of thromboxane A2(TXA2),prostacyclin (PGI2) of cortex after complete cerebral ischemia and reperfusion in the rabbit.Methods The model of acute complete cerebral ischemia and reperfusion in rabbits w as induced by ligation of bilaueral common carotids and vertebral arteries with systemtic hypotension,ischemia for twenty minutes and reperfusion for two hours. Forty rabbits were randomly divided into four groups:sham group,ischemia group, ischemia-reperfusion group,treated group.The levels of thromboxane B2(TXB2)a nd 6-keto-prostaglandin F1α(6-keto-PGF1α)of cortex were determined by radio-immunoassay.Results The level of TXB2，6-keto-P GF1α in ischemia group were increased significantly compared with that in sham group(P<0.05,P<0.01),the level of TXB2 and the ratio of TXB 2/6-keto-PGF1α in ischemia-reperfusion group were higher than that in isc hemia group (P<0.01),but the level of TXB2 and the ratio of TXB2/6-keto -PGF1α in treated group were reduced significantly in comparison with that in ischem ia-reperfusion group (P<0.01).Conclusions Imbalance be tween TXA2 and PGI2 might involved in brain damage by ischemia and reperfusion,an d anisodamine might inhibit TXA2 synthesis and regulate the balance between TX A2 and PGI2.
, http://www.100md.com
[Key words] Anisodamine; Complete cerebral ischemia and reperfusion ; Thromboxane A2； Prostacyclin
脑缺血再灌注期间，血栓素A2(TXA2)与前列环素(PGI2)平衡失调可参与脑缺血后低灌 注综合征的形成，加重脑继发性损伤[1]。山莨菪碱具有细胞保护作用，我们以往 的研究表明其可通过稳定生物膜、Ca2+拮抗 、抗脂质过氧化对脑缺血再灌注损伤具有保护作用[2]。本研究在此基础上，通过 观察山莨菪碱对脑缺血灌注期间脑组织TXA2、PGI2的影响，进一步探讨其脑保护作用机 制。
1 材料与方法
, http://www.100md.com 1.1 药品与试剂 山莨菪碱为江苏连云港东风制药厂产品，批号9807031；TXB2、6-ket o-PGF1α放免试剂盒购自中国人民解放军总医院。
1.2 实验动物分组 健康家兔40只，雌雄兼用，随机分为假手术组、缺血组、缺血再灌注 组、治疗组，每组10只。
1.3 模型制作 采用“闭塞双侧颈总动脉和椎动脉+体循环低血压法”建立全脑缺血再灌 注损伤模型[2]，缺血20 min，再灌注2 h。假手术组只进行手术操作；缺血组仅 作缺血处理。治疗组于再灌注前1 min由股静脉给予山莨菪碱，剂量为10 mg/kg体重，继以P aO2>97.5 mmHg(1 mmHg＝0.133 kPa)，PaCO2 35～45 mmHg,Ⅱ导联记录ECG。
1.4 脑组织TXB2、6-keto-PGF1α含量测定 各组于完成必要操作后，迅速开颅 ，取大脑皮层脑组织约200 mg，立即用生理盐水冲洗残留血液，置液氮罐保存待测。测定时 用分析天平准确称取100 mg，加入0.5 ml无水乙醇研磨去脂，再加生理盐水1.5 ml，在冰 浴下制成匀浆，离心(3 000 rpm×15 min，4℃)，取上清液，用1NHCl调pH至3.5～4.0 ，用沸点30～60℃的石油醚去脂，再用重蒸乙酸乙酯抽提2次，合并2次提取液，按试剂盒说 明书测定TXB2、6-keto-PGF1α含量，单位以pg/g wet wt表示。
, http://www.100md.com
1.5 统计学处理 各组计量资料以
±s表示，采用SAS软件进行配对检验。
2 结果
缺血组脑组织内TXA2、6-keto-PGF1α含量均明显高于假手术组(P<0.01， P<0.05)，而TXB2/6-keto-PGF1α比值无明显变化；再灌注组脑组织TXB2 进一步增加，显著高于缺血组(P<0.01)，而6-keto-PGF1α无明显变化，导致T XB2/6-keto-PGF1α比值明显升高，显著高于假手术组及缺血组(P<0.01)， 表明脑缺血再灌注期间，脑组织内TXA2和PGI2之间出现平衡失调。治疗组脑组织内TXB 2、TXB2/6-keto-PGF1α比值较缺血再灌注组显著降低(P<0.01)，但对6-k eto-PGF1α无明显影响，表明山莨菪碱具有抑制TXA2合成，调节TXA2-PGI2平 衡的作用。见附表。
, 百拇医药
附表 4组动物脑组织
TXB2、6-keto-PGF1α含量及比 值变化 组 别
TXB2
(pg/g wet wt)
6-keto-PGF1α
(pg/g wet wt)
TXB2/6-keto
-PGF1α
假手术组
24.94±1.23
, 百拇医药
19.31±1.29
1.29±0 .04
缺血组
27.20±1.57**
20.74±1.22*
1.31±0.03
缺血再灌注组
39.13±1.74△
20.63±1.37*
1.89±0.06 **△
, http://www.100md.com
治疗组
26.01±1.83＃
19.95±1.25
1.30±0.03＃
*P<0.05，**P<0.01与假手术组比较；△P<0.01与缺血组比较；＃ P<0.01与缺血再灌注组比较。3 讨论
TXA2和PGI2为一对天然的拮抗物，它们是调节血管张力的重要活性物质，TXA2具有收 缩血管、诱导血小板聚集的作用；PGI2则相反。 正常情况下，二者在脑组织内保持动态平衡，以维持脑血管的稳定和脑血流的通畅。脑缺血 后，超载的细胞内Ca2+，刺激细胞膜上的磷脂酶A2，使富含磷脂的神经组织释放 出大量的花生四烯酸(AA)；再灌注期间，脑组织内堆积的AA经环氧化酶生成不稳定的中间代 谢产物PGG2和PGH2，前者经TXA2合成酶催化形成TXA2，后者经PGI2合成酶催化形 成PGI2。由于再灌注期间，脑组织产生大量的氧自由基，损伤血管内皮细胞，抑制PGI 2合成酶，使得PGI2减少而TXA2合成相对过度激活，导致TXA2/PGI2比例失调，脑 组织微循环障碍，出现继发性缺血、缺氧，加重脑继发性损害。TXB2、6-keto-PGF1 α分别为TXA2、PGI2的稳定代谢产物，测定前二者的含量可直接反应TXA2、PGI 2的变化。本研究中，全脑缺血20 min脑组织内TXB2、6-keto-PGF1α含量即明显增 加，再灌注2 h后，脑组织TXB2含量进一步增加，且TXB2/6-keto-PG F1α比值显著升高，结合我们以往实验中的超微病理改变[2]，表明脑缺血 灌注期间脑组织损伤程度加重与TXA2/PGI2比例失调有一定的关系。
, 百拇医药
既往体外研究[3]表明，山莨菪碱可能通过抑制TXA2合成酶或环氧化酶减少TXA 2的合成，并抑制血小板、粒细胞聚集。张英鸽等[4，5]在大鼠不完全脑缺血 模型上证明，山莨菪碱可增加脑组织血流量，调节缺血区内血流分布及再灌注量。本研究结 果发现，脑缺血后再灌注早期应用山莨菪碱治疗可明显降低再灌注期间脑组织TXB2含量及 TXB2/6-keto-PGF1α比值。以上结果表明，山莨菪碱具有减少脑缺血再灌注期间T XA2合成，调节TXA2-PGI2平衡，改善脑循环的作用，这可能是其发挥脑保护作用的机 制之一。
[参考文献]
[1]Woodraw WW,Concetta H.Effect of prostaglandin F1α and thrombo xane A2 analogue on bovine cerebral arterial tone and calcium fluexs[J].Stro ke,1991,22:66-72.
, http://www.100md.com
[2]周代星，邓普珍.山莨菪碱对急性完全性脑缺血再灌流后脑组织Ca2+ 、MDA含量、SOD活性及超微结构的影响[J].急诊医学，1998，7(1)：32-34.
[3]Xiu RJ,Hammerschmidt DE,Coppo PA,et al.Anisodamine inhibits thrombox ame synthesis,granulocyte aggregation,and platelet aggregation[J].JAMA,1982,24 7:1458.
[4]张英鸽，可君.山莨菪碱对部分缺血再灌注流量的影响[J].中国病理生理 杂志，1991，7(2)：197.
[5]张英鸽，可君.山莨菪碱对脑缺血局部血流量的影响[J].中国药理学通报 ，1992，8(4)：275.
[收稿：2000-08-03]
, 百拇医药
单位：华中科技大学同济医 学院附属医院急诊科，武汉 430030
关键词：山莨菪碱；完全性脑缺血再灌注；血栓素A2；前列环素
中国急救医学001203 [摘 要]目的 探讨山莨菪碱对家兔全脑缺血再灌注期间脑组织TXA2和P GI2代谢的影响。方法 40只家兔随机分为假手术组、缺血组、缺 血再灌注组、治疗组，采用“闭塞双侧颈总动脉和椎动脉+体循环低血压法”建立全脑缺血 再灌注损伤模型，缺血20 min，再灌注2 h，通过放免法测定脑组织TXB2、6-keto-PGF 1α含量及其比值。结果 缺血组脑组织TXB2、6-keto-PGF 1α含量明显高于假手术组(P<0.01，P<0.05)；再灌注组脑组织TXB2、TXB 2/6-ke to-PGF1α比值明显高于缺血组(P<0.01)；而治疗组脑组织TXB2及TXB2/6- keto -PGF1α比值较缺血再灌注组显著降低(P<0.01)。结论 脑 缺血再灌注损伤与TXA2/PGI2比例失调有关；山莨菪碱具有抑制TXA2合成，调节TXA 2-PGI2平衡的作用。
, 百拇医药
[中图分类号]R 453；R 743.3 [文献标识码]A [文章编号]1002-1949(2000)12-0697-02[ HT7”
Effect of anisodamine on the metabolism of thromboxane A2,prostacyclin of cortex after complete cerebral ischemia and reperfusion in the rabbit
ZHOU Dai-xing,DENG Pu-zhen.
(Emergency Department of Tongji Hospital,Tongji Medi cal College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China)
, 百拇医药
[Abstract]Objective To study effect of anisodamine on t he metabolism of thromboxane A2(TXA2),prostacyclin (PGI2) of cortex after complete cerebral ischemia and reperfusion in the rabbit.Methods The model of acute complete cerebral ischemia and reperfusion in rabbits w as induced by ligation of bilaueral common carotids and vertebral arteries with systemtic hypotension,ischemia for twenty minutes and reperfusion for two hours. Forty rabbits were randomly divided into four groups:sham group,ischemia group, ischemia-reperfusion group,treated group.The levels of thromboxane B2(TXB2)a nd 6-keto-prostaglandin F1α(6-keto-PGF1α)of cortex were determined by radio-immunoassay.Results The level of TXB2，6-keto-P GF1α in ischemia group were increased significantly compared with that in sham group(P<0.05,P<0.01),the level of TXB2 and the ratio of TXB 2/6-keto-PGF1α in ischemia-reperfusion group were higher than that in isc hemia group (P<0.01),but the level of TXB2 and the ratio of TXB2/6-keto -PGF1α in treated group were reduced significantly in comparison with that in ischem ia-reperfusion group (P<0.01).Conclusions Imbalance be tween TXA2 and PGI2 might involved in brain damage by ischemia and reperfusion,an d anisodamine might inhibit TXA2 synthesis and regulate the balance between TX A2 and PGI2.
, http://www.100md.com
[Key words] Anisodamine; Complete cerebral ischemia and reperfusion ; Thromboxane A2； Prostacyclin
脑缺血再灌注期间，血栓素A2(TXA2)与前列环素(PGI2)平衡失调可参与脑缺血后低灌 注综合征的形成，加重脑继发性损伤[1]。山莨菪碱具有细胞保护作用，我们以往 的研究表明其可通过稳定生物膜、Ca2+拮抗 、抗脂质过氧化对脑缺血再灌注损伤具有保护作用[2]。本研究在此基础上，通过 观察山莨菪碱对脑缺血灌注期间脑组织TXA2、PGI2的影响，进一步探讨其脑保护作用机 制。
1 材料与方法
, http://www.100md.com 1.1 药品与试剂 山莨菪碱为江苏连云港东风制药厂产品，批号9807031；TXB2、6-ket o-PGF1α放免试剂盒购自中国人民解放军总医院。
1.2 实验动物分组 健康家兔40只，雌雄兼用，随机分为假手术组、缺血组、缺血再灌注 组、治疗组，每组10只。
1.3 模型制作 采用“闭塞双侧颈总动脉和椎动脉+体循环低血压法”建立全脑缺血再灌 注损伤模型[2]，缺血20 min，再灌注2 h。假手术组只进行手术操作；缺血组仅 作缺血处理。治疗组于再灌注前1 min由股静脉给予山莨菪碱，剂量为10 mg/kg体重，继以P aO2>97.5 mmHg(1 mmHg＝0.133 kPa)，PaCO2 35～45 mmHg,Ⅱ导联记录ECG。
1.4 脑组织TXB2、6-keto-PGF1α含量测定 各组于完成必要操作后，迅速开颅 ，取大脑皮层脑组织约200 mg，立即用生理盐水冲洗残留血液，置液氮罐保存待测。测定时 用分析天平准确称取100 mg，加入0.5 ml无水乙醇研磨去脂，再加生理盐水1.5 ml，在冰 浴下制成匀浆，离心(3 000 rpm×15 min，4℃)，取上清液，用1NHCl调pH至3.5～4.0 ，用沸点30～60℃的石油醚去脂，再用重蒸乙酸乙酯抽提2次，合并2次提取液，按试剂盒说 明书测定TXB2、6-keto-PGF1α含量，单位以pg/g wet wt表示。
, http://www.100md.com
1.5 统计学处理 各组计量资料以
±s表示，采用SAS软件进行配对检验。2 结果
缺血组脑组织内TXA2、6-keto-PGF1α含量均明显高于假手术组(P<0.01， P<0.05)，而TXB2/6-keto-PGF1α比值无明显变化；再灌注组脑组织TXB2 进一步增加，显著高于缺血组(P<0.01)，而6-keto-PGF1α无明显变化，导致T XB2/6-keto-PGF1α比值明显升高，显著高于假手术组及缺血组(P<0.01)， 表明脑缺血再灌注期间，脑组织内TXA2和PGI2之间出现平衡失调。治疗组脑组织内TXB 2、TXB2/6-keto-PGF1α比值较缺血再灌注组显著降低(P<0.01)，但对6-k eto-PGF1α无明显影响，表明山莨菪碱具有抑制TXA2合成，调节TXA2-PGI2平 衡的作用。见附表。
, 百拇医药
附表 4组动物脑组织
TXB2、6-keto-PGF1α含量及比 值变化 组 别
TXB2
(pg/g wet wt)
6-keto-PGF1α
(pg/g wet wt)
TXB2/6-keto
-PGF1α
假手术组
24.94±1.23
, 百拇医药
19.31±1.29
1.29±0 .04
缺血组
27.20±1.57**
20.74±1.22*
1.31±0.03
缺血再灌注组
39.13±1.74△
20.63±1.37*
1.89±0.06 **△
, http://www.100md.com
治疗组
26.01±1.83＃
19.95±1.25
1.30±0.03＃
*P<0.05，**P<0.01与假手术组比较；△P<0.01与缺血组比较；＃ P<0.01与缺血再灌注组比较。3 讨论
TXA2和PGI2为一对天然的拮抗物，它们是调节血管张力的重要活性物质，TXA2具有收 缩血管、诱导血小板聚集的作用；PGI2则相反。 正常情况下，二者在脑组织内保持动态平衡，以维持脑血管的稳定和脑血流的通畅。脑缺血 后，超载的细胞内Ca2+，刺激细胞膜上的磷脂酶A2，使富含磷脂的神经组织释放 出大量的花生四烯酸(AA)；再灌注期间，脑组织内堆积的AA经环氧化酶生成不稳定的中间代 谢产物PGG2和PGH2，前者经TXA2合成酶催化形成TXA2，后者经PGI2合成酶催化形 成PGI2。由于再灌注期间，脑组织产生大量的氧自由基，损伤血管内皮细胞，抑制PGI 2合成酶，使得PGI2减少而TXA2合成相对过度激活，导致TXA2/PGI2比例失调，脑 组织微循环障碍，出现继发性缺血、缺氧，加重脑继发性损害。TXB2、6-keto-PGF1 α分别为TXA2、PGI2的稳定代谢产物，测定前二者的含量可直接反应TXA2、PGI 2的变化。本研究中，全脑缺血20 min脑组织内TXB2、6-keto-PGF1α含量即明显增 加，再灌注2 h后，脑组织TXB2含量进一步增加，且TXB2/6-keto-PG F1α比值显著升高，结合我们以往实验中的超微病理改变[2]，表明脑缺血 灌注期间脑组织损伤程度加重与TXA2/PGI2比例失调有一定的关系。
, 百拇医药
既往体外研究[3]表明，山莨菪碱可能通过抑制TXA2合成酶或环氧化酶减少TXA 2的合成，并抑制血小板、粒细胞聚集。张英鸽等[4，5]在大鼠不完全脑缺血 模型上证明，山莨菪碱可增加脑组织血流量，调节缺血区内血流分布及再灌注量。本研究结 果发现，脑缺血后再灌注早期应用山莨菪碱治疗可明显降低再灌注期间脑组织TXB2含量及 TXB2/6-keto-PGF1α比值。以上结果表明，山莨菪碱具有减少脑缺血再灌注期间T XA2合成，调节TXA2-PGI2平衡，改善脑循环的作用，这可能是其发挥脑保护作用的机 制之一。
[参考文献]
[1]Woodraw WW,Concetta H.Effect of prostaglandin F1α and thrombo xane A2 analogue on bovine cerebral arterial tone and calcium fluexs[J].Stro ke,1991,22:66-72.
, http://www.100md.com
[2]周代星，邓普珍.山莨菪碱对急性完全性脑缺血再灌流后脑组织Ca2+ 、MDA含量、SOD活性及超微结构的影响[J].急诊医学，1998，7(1)：32-34.
[3]Xiu RJ,Hammerschmidt DE,Coppo PA,et al.Anisodamine inhibits thrombox ame synthesis,granulocyte aggregation,and platelet aggregation[J].JAMA,1982,24 7:1458.
[4]张英鸽，可君.山莨菪碱对部分缺血再灌注流量的影响[J].中国病理生理 杂志，1991，7(2)：197.
[5]张英鸽，可君.山莨菪碱对脑缺血局部血流量的影响[J].中国药理学通报 ，1992，8(4)：275.
[收稿：2000-08-03]
, 百拇医药