PC12细胞硫氧还蛋白cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

http://www.100md.com 哈尔滨医科大学生物化学和分子生物学教研室；清华大学生命科学院 哈尔滨150086 谢振华；王爱民；马春；刘长

PC12细胞|硫氧还蛋白|RT-PCR|克隆和表达

    参见附件(43kb)。

     哈尔滨医科大学生物化学和分子生物学教研室；清华大学生命科学院 哈尔滨150086 谢振华；王爱民；马春；刘长振；刘明；杨歌德；贺雨虹

    关键词：PC12细胞；硫氧还蛋白；RT-PCR；克隆和表达

    摘要：硫氧还蛋白 (Thioredoxin ,TRX)是广泛存在于原核和真核细胞中的低分子量蛋白质 ,它含有保守的Cys Gly Pro Cys活性位点 ,作为多效性细胞因子而具有重要的生物学功能。从PC1 2细胞中提取总RNA ,经逆转录PCR(RT PCR)扩增出硫氧还蛋白cDNA并克隆到PUC1 8质粒上。序列分析表明 ,克隆所得序列与GenBank中大鼠硫氧还蛋白cDNA序列完全一致。将该基因亚克隆到表达质粒pQE30上 ,质粒pQE30 TRX在大肠杆菌M1 5中获得高效表达。带 6His的融合蛋白约占总菌体蛋白的 30 %。分析鉴定表明 ,纯化的融合蛋白质分子量是 1 4kD ,且具有二硫键还原酶活性。

    http://www.100md.com/html/analecta/2002/08/01/03/693.htm

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