人源性羧肽酶A突变体基因的构建及表达

http://www.100md.com 董轲；郝晓柯；刘新平；张盈华；季少平；潘伯荣

    参见附件(42kb)。

     董轲；郝晓柯；刘新平；张盈华；季少平；潘伯荣

    关键词：人源性羧肽酶A；突变体；表达

    摘要：目的 从人正常肺组织中提取羧肽酶A基因并进行定点突变.方法 从人正常肺组织中提取RNA,并进行逆转录得到人羧肽酶A(hCPA).以计算机模拟hCPA的结构,寻找合适的突变位点.用PCR重叠延伸法,对羧肽酶A进行定点突变,并在大肠杆菌中表达.结果 序列分析表明,所获hCPA的核苷酸序列为1251bp,编码417个氨基酸.hCPA突变体(mhCPA)基因的1126位核苷酸由G变为A,其余核苷酸序列均未发生变化,相应的此突变体蛋白质的376位核苷酸残基由丙氨酸突变为苏氨酸.将mhCPA基因在E.coli中诱导表达3h后,表达量高达30%左右.结论 成功地构建并表达了mhCPA基因,为hCPA在肿瘤的“抗体导向酶-前药疗法”(ADEPT)中的应用奠定了基础。

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