表达EB病毒主要膜蛋白gp350/220的非复制型重组痘苗病毒的构建
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中国预防医学科学院病毒学研究所；北京100052 魏滨；谷淑燕；李燕；郭斐；阮力
Epstein-Barr病毒|gp350,220|非复制型重组痘苗病毒|体液免疫
参见附件(75kb)。
中国预防医学科学院病毒学研究所；北京100052 魏滨；谷淑燕；李燕；郭斐；阮力
关键词：Epstein-Barr病毒；gp350/220；非复制型重组痘苗病毒；体液免疫
摘要：利用非复制痘苗病毒质粒载体pNEOCK11β75及pNEOCK,改造了表达EB病毒主要膜蛋白gp350/220的复制型重组痘苗病毒VMA,构建了非复制型重组痘苗病毒VMAΔCK。该病毒能在鸡胚原代成纤维细胞(CEF)中正常繁殖,而在人源细胞中不能正常繁殖。在CEF中连续传代至第25代,经PCR证明,该病毒符合非复制型重组痘苗病毒的特征。经免疫荧光及免疫酶斑法证实,VMAΔCK可稳定表达gp350/220,且表达水平与VMA无明显差异。VMAΔCK经腹腔免疫Bakb/C小鼠,4周后能诱生一定水平的抗gp350/220特异性抗体,加强免疫2周后该抗体水平明显升高。这一结果类似于VMA免疫Bakb/C小鼠的结果。初免后,VMAΔCK免疫组抗痘苗抗体水平明显低于VMA免疫组;加强免疫2周后,两组小鼠的抗痘苗抗体水平趋于一致。上述结果证明,所构建的非复制痘苗病毒不影响目的抗原的表达,也不影响该抗原的免疫原性,但导致病毒毒力下降,而且用该病毒免疫小鼠后小鼠抗痘苗病毒载体的免疫反应明显下降。
中国预防医学科学院病毒学研究所；北京100052 魏滨；谷淑燕；李燕；郭斐；阮力
关键词：Epstein-Barr病毒；gp350/220；非复制型重组痘苗病毒；体液免疫
摘要：利用非复制痘苗病毒质粒载体pNEOCK11β75及pNEOCK,改造了表达EB病毒主要膜蛋白gp350/220的复制型重组痘苗病毒VMA,构建了非复制型重组痘苗病毒VMAΔCK。该病毒能在鸡胚原代成纤维细胞(CEF)中正常繁殖,而在人源细胞中不能正常繁殖。在CEF中连续传代至第25代,经PCR证明,该病毒符合非复制型重组痘苗病毒的特征。经免疫荧光及免疫酶斑法证实,VMAΔCK可稳定表达gp350/220,且表达水平与VMA无明显差异。VMAΔCK经腹腔免疫Bakb/C小鼠,4周后能诱生一定水平的抗gp350/220特异性抗体,加强免疫2周后该抗体水平明显升高。这一结果类似于VMA免疫Bakb/C小鼠的结果。初免后,VMAΔCK免疫组抗痘苗抗体水平明显低于VMA免疫组;加强免疫2周后,两组小鼠的抗痘苗抗体水平趋于一致。上述结果证明,所构建的非复制痘苗病毒不影响目的抗原的表达,也不影响该抗原的免疫原性,但导致病毒毒力下降,而且用该病毒免疫小鼠后小鼠抗痘苗病毒载体的免疫反应明显下降。
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