乙型肝炎病毒DNA荧光定量PCR的建立与应用
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温州医学院附属第一医院检验科 浙江温州325000 陶志华；陈晓东；王忠永；周武；袁谦
荧光定量|聚合酶链反应|乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸
参见附件(34kb)。
温州医学院附属第一医院检验科 浙江温州325000 陶志华；陈晓东；王忠永；周武；袁谦
关键词：荧光定量；聚合酶链反应；乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸
摘要：目的 建立血浆 (血清 )HBVDNA荧光定量PCR检测方法 ,探讨其临床应用价值。方法 用PUCm T载体和PCR纯化产物连接 ,转染DH5α菌 ,筛选阳性菌落 ,提取质粒 ,制作外标准品 ;在HBV基因组S区设计一对引物和TaqMan探针 ,严格优化反应物的组成和扩增条件 ,并对该方法进行评价。结果 建立的HBVDNA荧光定量PCR最低可检出 80 0拷贝 /ml;批内误差为 1 8%～ 6 5% ,批间误差为 2 6 %～ 9 1 % ;在 1 0 4 ～ 1 0 11拷贝 /ml之间与Ct值具有很好的线性 (Ct =- 1 .391 1ln(X) +4 1 .6 5,r =- 0 .9958) ;外周血HBVDNA临床定量检测发现 ,HBeAg阳性的 1 30例中 ,HBV ...
温州医学院附属第一医院检验科 浙江温州325000 陶志华；陈晓东；王忠永；周武；袁谦
关键词：荧光定量；聚合酶链反应；乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸
摘要：目的 建立血浆 (血清 )HBVDNA荧光定量PCR检测方法 ,探讨其临床应用价值。方法 用PUCm T载体和PCR纯化产物连接 ,转染DH5α菌 ,筛选阳性菌落 ,提取质粒 ,制作外标准品 ;在HBV基因组S区设计一对引物和TaqMan探针 ,严格优化反应物的组成和扩增条件 ,并对该方法进行评价。结果 建立的HBVDNA荧光定量PCR最低可检出 80 0拷贝 /ml;批内误差为 1 8%～ 6 5% ,批间误差为 2 6 %～ 9 1 % ;在 1 0 4 ～ 1 0 11拷贝 /ml之间与Ct值具有很好的线性 (Ct =- 1 .391 1ln(X) +4 1 .6 5,r =- 0 .9958) ;外周血HBVDNA临床定量检测发现 ,HBeAg阳性的 1 30例中 ,HBV ...
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