聚合酶链反应诱导丙型肝炎病毒(HCV)蛋白酶活性位点的突变及突变HCV NS3/4a蛋白的表达
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徐州医学院附属医院传染病科 魏来；封波；陈勇
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参见附件(61kb)。
徐州医学院附属医院传染病科 魏来；封波；陈勇
关键词：丙型肝炎病毒；丝氨酸蛋白酶；聚合酶链反应；诱导突变
摘要：目的 以聚合酶链反应 (PCR)突变方法诱导丙型肝炎病毒 (HCV)蛋白酶活性位点ser116 5的突变 ,获得全长非结构基因 3(NS3) / 4a的表达与纯化。方法 分别以NS3N端正向引物与诱变反向引物 ,诱变正向引物与NS4aC端反向引物获得 2个PCR产物 ,产物纯化后在新的PCR反应体系中加入以上 2个PCR产物与NS3N端正向引物、NS4aC端反向引物。再次PCR扩增突变模板 ,分别与野生型模板重组入表达载体pET2 6 Ub ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)pCG1,诱导表达后经菌体裂解、纯清化、硫酸铵沉淀、DEAE Sepharose、NTA纯化 ,Westernblot分析表达蛋白的特异性及PCR诱导突变使HCV蛋白.
徐州医学院附属医院传染病科 魏来；封波；陈勇
关键词：丙型肝炎病毒；丝氨酸蛋白酶；聚合酶链反应；诱导突变
摘要：目的 以聚合酶链反应 (PCR)突变方法诱导丙型肝炎病毒 (HCV)蛋白酶活性位点ser116 5的突变 ,获得全长非结构基因 3(NS3) / 4a的表达与纯化。方法 分别以NS3N端正向引物与诱变反向引物 ,诱变正向引物与NS4aC端反向引物获得 2个PCR产物 ,产物纯化后在新的PCR反应体系中加入以上 2个PCR产物与NS3N端正向引物、NS4aC端反向引物。再次PCR扩增突变模板 ,分别与野生型模板重组入表达载体pET2 6 Ub ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)pCG1,诱导表达后经菌体裂解、纯清化、硫酸铵沉淀、DEAE Sepharose、NTA纯化 ,Westernblot分析表达蛋白的特异性及PCR诱导突变使HCV蛋白.
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