DSB修复基因hKu70反义RNA真核表达载体构建

http://www.100md.com 中山大学公共卫生学院卫生毒理学教研室 广东广州510089；深圳市疾病预防控制中心 刘起展；庄志雄；江高峰；

DNA双链断裂|hKu70|逆转录酶-多聚酶链式反应|修复基因|真核表达载体|反义RNA

    参见附件(51kb)。

     中山大学公共卫生学院卫生毒理学教研室 广东广州510089；深圳市疾病预防控制中心 刘起展；庄志雄；江高峰；何云；杜柳涛

    关键词：DNA双链断裂；hKu70；逆转录酶-多聚酶链式反应；修复基因；真核表达载体；反义RNA

    摘要：目的 构建人DNA双链断裂 (DSB)修复基因hKu70反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K ,为以后的hKu70基因功能和毒理学研究提供实验材料。方法 提取人胚肺成纤维细胞 (HLF)总RNA ,逆转录酶 多聚酶链式反应 (RT PCR)扩增hKu70基因cDNA保守序列 ,经与pGEM T载体连接、筛选、克隆、抽提质粒和双酶切后 ,将纯化的hKu70基因cDNA保守序列反向插入绿色荧光蛋白表达载体pEGFP C1中 ,筛选、克隆、抽提质粒 ,从而构建hKu70基因反义RNA真核表达载体pEGFP C1 K。结果 经RT PCR获得 467bp含限制性内切酶位点的DNA片段 ,T载体克隆后经双酶切、测序 ,确定该片段为hKu70基因..

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