单纯疱疹病毒Ⅰ和Ⅱ型共同抗原gD在大肠埃希菌中的重组表达
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天津医科大学微生物学教研室 300050天津 李梅；李晓眠；刘民
参见附件(47kb)。
天津医科大学微生物学教研室 300050天津 李梅；李晓眠；刘民
关键词：疱疹病毒；人；膜糖蛋白类；诱导表达
摘要：目的 克隆人单纯疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ (HSV Ⅰ、Ⅱ )型共同性抗原gD基因 ,构建重组表达载体pMAL c2 gD ,诱导融合蛋白MBP gD的表达。方法 提取病毒DNA ,PCR扩增出gD基因 ,克隆于原核表达载体pMAL c2并转化大肠埃希菌DH5α。PCR、双酶切及测序证实插入的gD基因序列正确后 ,IPTG诱导表达融合蛋白MBP gD ,并进行免疫学鉴定。结果 构建的重组表达质粒pMAL c2 gD在大肠埃希菌中能高效表达。经SDS PAGE分析 ,表达产物约占菌体总蛋白 35 5 % ,其中 39%以可溶蛋白形式存在于胞质中 ,61 %以包涵体形式存在。结论 构建了pMAL c2 gD表达质粒 ,Westernblot证实 ,H...
天津医科大学微生物学教研室 300050天津 李梅；李晓眠；刘民
关键词：疱疹病毒；人；膜糖蛋白类；诱导表达
摘要：目的 克隆人单纯疱疹病毒Ⅰ、Ⅱ (HSV Ⅰ、Ⅱ )型共同性抗原gD基因 ,构建重组表达载体pMAL c2 gD ,诱导融合蛋白MBP gD的表达。方法 提取病毒DNA ,PCR扩增出gD基因 ,克隆于原核表达载体pMAL c2并转化大肠埃希菌DH5α。PCR、双酶切及测序证实插入的gD基因序列正确后 ,IPTG诱导表达融合蛋白MBP gD ,并进行免疫学鉴定。结果 构建的重组表达质粒pMAL c2 gD在大肠埃希菌中能高效表达。经SDS PAGE分析 ,表达产物约占菌体总蛋白 35 5 % ,其中 39%以可溶蛋白形式存在于胞质中 ,61 %以包涵体形式存在。结论 构建了pMAL c2 gD表达质粒 ,Westernblot证实 ,H...
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