重组汉滩病毒核蛋白的纯化及鉴定
http://www.100md.com
第四军医大学微生物学教研室 西安710032 尹文；徐志凯；薛小平；刘勇；王海涛；张芳琳
汉滩病毒|核蛋白质类|色谱法|亲和|印迹法|蛋白质
参见附件(98kb)。
第四军医大学微生物学教研室 西安710032 尹文；徐志凯；薛小平；刘勇；王海涛；张芳琳
关键词：汉滩病毒；核蛋白质类；色谱法；亲和；印迹法；蛋白质
摘要：目的 纯化重组表达的汉滩病毒核蛋白。方法 重组菌经IPTG诱导后 ,表达的目的蛋白为带有谷胱甘肽转硫酶 (GST)标签的融合蛋白 ,并以包涵体形式存在。将包涵体变性、复性后 ,采用GlutathioneSepharose 4B亲和色谱对核蛋白进行纯化 ,并用夹心ELISA和Westernblot检测纯化蛋白。结果 表达产物第一次过柱亲和层析后可去除杂蛋白 ,获得纯化的核蛋白与谷胱甘肽转硫酶的融合蛋白 ,再经凝血酶酶切 ,第二次过柱亲和层析后获得的穿过峰为核蛋白 ,洗脱峰为GST。纯化的融合蛋白和纯化的核蛋白均为SDS PAGE单点纯 ,并具有良好的抗原活性。结论 GlutathioneSepharos...
第四军医大学微生物学教研室 西安710032 尹文；徐志凯；薛小平；刘勇；王海涛；张芳琳
关键词：汉滩病毒；核蛋白质类；色谱法；亲和；印迹法；蛋白质
摘要：目的 纯化重组表达的汉滩病毒核蛋白。方法 重组菌经IPTG诱导后 ,表达的目的蛋白为带有谷胱甘肽转硫酶 (GST)标签的融合蛋白 ,并以包涵体形式存在。将包涵体变性、复性后 ,采用GlutathioneSepharose 4B亲和色谱对核蛋白进行纯化 ,并用夹心ELISA和Westernblot检测纯化蛋白。结果 表达产物第一次过柱亲和层析后可去除杂蛋白 ,获得纯化的核蛋白与谷胱甘肽转硫酶的融合蛋白 ,再经凝血酶酶切 ,第二次过柱亲和层析后获得的穿过峰为核蛋白 ,洗脱峰为GST。纯化的融合蛋白和纯化的核蛋白均为SDS PAGE单点纯 ,并具有良好的抗原活性。结论 GlutathioneSepharos...
您现在查看是摘要介绍页，详见CAJ附件(98kb)。